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SYBR Green I：一種DNA結合染料，能非特異性地與雙鏈DNA結合，結合后發出熒光，價格便宜，但因無特異性，易受到非特異性擴增和引物二聚體地的影響，是定量結果不可靠。可用融解曲線分析區分特異性和非特異性擴增，引物的設計和反應條件的優化對消除非特異性熒光有很大幫助。 2.Taqman探針： 也稱為水解寡核苷酸探針。該探針在5’端標記報告熒光基團，在3’端標記淬滅熒光基團，在探針完整時報告熒光基團發出的熒光被淬滅熒光基團吸收，因此沒有熒光產生。在延伸階段，由于DNA聚合酶具有5’－3’外切酶活性，5’端標記報告熒光基團被水解掉，遠離淬滅熒光基團，于是產生熒光信號。Taqman探針的優點是可以利用多種熒光同時進行多重分析，這是SYBR等DNA結合熒光基團所不具備的優點。 3.分子信標（molecular beacons）： 為一發夾結構，環區與目的片段特異性互補，莖區的5’端和3’端分別標有熒光基團和淬滅基團。......閱讀全文
實驗室很多同學都要做Real time PCR實驗，實驗室的師兄師姐都會有很多寶貴意見，不過也有實驗室前沒有做過的，查找了下資料和大家分享下關于實時熒光 Taqman 探針設計、實時熒光PCR探針的選擇、引物的設計及評價。熒光探針法是用序列特異的熒光標記探針來檢測產物，探針法的出現使得定量
多聚集鏈反應（polymerase chain reaction,PCR）技術發明至今已近20年了，在這期間技術得到了不斷的發展，近年來出現的實時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR）技術實現了PCR從定性到定量的飛躍，它以其特異性強、靈敏度高、重復性好、
正在著手做 real-time PCR 的朋友們，我想最開始肯定要考慮引物設計的問題。看完下面的文字，我保證你得到想要的引物設計方法和引物序列。第一步：拿到你所要研究的基因的序列。不要告訴我你不會找序列。如果真的不會，請參考丁香園內其他版塊，如NCBI使用，序列查找等。第二步：確
聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction，PCR)可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增。在擴增反應結束之后，我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析，也可以通過放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析。無論定性還是定量分析，分析的都是PCR終產物。但是在許多
一般來講，進行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高，所以每個樣品至少要做3個平行孔，以防在后面的數據分析中，由于Ct相差較多或者SD太大，無法進行統計分析。通常來講，反應體系的引物終濃度為10
一般來講，進行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高，所以每個樣品至少要做3個平行孔，以防在后面的數據分析中，由于Ct相差較多或者SD太大，無法進行統計分析。通常來講，反應體系的引物終濃度為10
(張蓓，沈立松 上海第二醫科大學附屬新華醫院上海兒童醫學中心實驗診斷中心)摘要:多聚酶鏈反應飛速的發展使其成為了分子生物學實驗室重要的工具，實時熒光定量PCR(real-timequantitative PCR)技術以其敏感性高、重復性好、速度快和污染少使PCR技術又
何謂PCR,簡單的說，PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內 In Vitro 的大量合成。基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制.目前常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。 PCR的要素基本的PCR須具備１.要被復制的DNA模板 Template ２
PCR技術簡介 前言 一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase chain reacti
相關專題1 甲基化敏感性限制性內切酶 (methylation-sensitive restriction Endonuclease，MS-RE)-PCR/Southern法這種方法利用甲基化敏感性限制性內切酶 對甲基化區的不切割的特性，將DNA消化為不同大小的片段后再進行分析。常使用的甲基化敏感的
測序技術的引入促使miRNA研究領域進入快速發展階段，然而qPCR仍是驗證測序數據的重要標準。本文將為您介紹使用qPCR進行miRNA分析的基本要點，希望能幫助新人快速入門。什么是miRNA？miRNA是一類小的非編碼RNA，能夠與RNA誘導沉默復合物（RISC）結合，通過作用于mRNA，進而介導轉
（二）反應液污染 可采用下列方法之一處理：1. DNase I法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室溫反應30 min后加熱滅活，然后加入模板和Taq聚合酶進行正常PCR擴增。該方法的優點是不需要知道污染
前言 一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Po
聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction, PCR）自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測核酸分子的定性方法，而且也是一個能對核酸分子進行精確定量的有力工具[1]。隨著分子生物學技術研究的不斷進展，定量PCR技術取得了突飛猛進的發展，不僅建立了一系
熒光定量PCR簡介 熒光定量PCR檢測技術誕生至今已10多年的時間，而其應用一直都沒廣泛展開，究其原因，無外乎受制于相關儀器、試劑和技術的發展。近期，尤其是08年以來，儀器和試劑是遍地開花，這也使科研人員均躍躍欲試，都想借此技術使自己的研究能突飛猛進，發展勢頭通過查找每年所發表的文章數可一目了然。據
熒光定量PCR的應用分子生物學研究1、核酸定量分析。 對傳染性疾病進行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 轉基因動植物基因拷貝數的檢測，RNAi 基因失活率的檢測等。2 、基因表達差異分析。 比較經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異 （ 如藥物處理、物理
3.3 SYBR@Green 法SYBR@Green I是一種結合于小溝中的雙鏈DNA結合染料，與雙鏈DNA結合后，其熒光大大增強。這一性質使其用于擴增產物的檢測非常理想。SYBR@Green I 的最大吸收波長約為497nm，發射波長最大約為520nm。在PCR反應體系中，加入過量SYBR@Gre
多聚集鏈反應（polymerasechainreaction,PCR）技術發明至今已近20年了，在這期間技術得到了不斷的發展，近年來出現的實時熒光定量PCR（real-timequantitativePCR）技術實現了PCR從定性到定量的飛躍，它以其特異性強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全
本文比較分析了國內外李斯特菌的檢測方法、不同標準限量值的差異。介紹了國內外李斯特菌快速檢測技術的應用及存在的問題，對我國微生物快速檢測的現狀進行了概述，探討了李斯特菌快速檢測技術的未來發展方向，對李斯特菌檢驗方法探索及快速檢測技術的發展具有一定的借鑒意義。 李斯特菌(Listeria
所謂Real-time Q-PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在real-time技術的發展過程中，兩個重要的發現起著關鍵的作用：在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發現，它能降解
一般來講，進行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高，所以每個樣品至少要做3個平行孔，以防在后面的數據分析中，由于Ct相差較多或者SD太大，無法進行統計分析。通常來講，反應體系的引物終濃度為100-400
Real Time PCR實時熒光定量PCR 其定量的基本原理是在 PCR 反應體系中加入非特異性的熒光染料（如： SYBR GREEN I ）或特異性的熒光探針（如： Taqman 探針），實時檢測熒光量的變化，獲得不同樣品達到一定的熒光信號（閾值）時所
提起 PCR，在生物及其相關行業內可謂如雷貫耳，無人不知無人不曉，其影響之深，應用之廣可見一斑。 1985 年，美國 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人發明了聚合酶鏈反應（PCR），實現了在試管中模擬細胞內的 DNA 復制。然而，采用 E-
提起 PCR，在生物及其相關行業內可謂如雷貫耳，無人不知無人不曉，其影響之深，應用之廣可見一斑。 1985 年，美國 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人發明了聚合酶鏈反應（PCR），實現了在試管中模擬細胞內的 DNA 復制。然而，采用 E-coli D
Real-time PCR實驗注意事項實驗中的一些好習慣加入試劑之前,把它混勻一下,以免放置時間長了濃度不均移液槍用完之后要歸到zui大計量的位置，防止久而久之彈簧失去彈性一定要記著關水浴箱，切記切記多和大家討論，同時多關注別人討論的經驗，這幾乎是zui快提高的捷徑了所有的試劑都自己配，出了問題才好
隨著人類基因組計劃（human genome project ）在2003年順利完成，基因組測序技術取得了長足的進步，這直接導致了每兆基因組成本的大幅下降以及檢測的基因組數量越來越多。人們對基因組的復雜性深感震驚，這也引導著測序技術的進一步發展。最近的一些突破性技術使得測序技術在更短的時間內可以
隨著人類基因組計劃（human genome project ）在2003年順利完成，基因組測序技術取得了長足的進步，這直接導致了每兆基因組成本的大幅下降以及檢測的基因組數量越來越多。人們對基因組的復雜性深感震驚，這也引導著測序技術的進一步發展。最近的一些突破性技術使得測序技術在更短的時間內可以