《Nature》11月最受關注的十篇論文
英國著名雜志《Nature》周刊是世界上最早的國際性科技期刊，自從1869年創刊以來，始終如一地報道和評論全球科技領域里最重要的突破。其辦刊宗旨是“將科學發現的重要結果介紹給公眾，讓公眾盡早知道全世界自然知識的每一分支中取得的所有進展”。近期《Nature》下載論文最多的十篇文章(2012年10月17日 ～ 2012年11月16日)： Ndi1的X-射線晶體結構被確定 Nature 491 (2012年11月15日) 電子傳遞鏈的“復合物-I”催化來自NADH的兩個電子向“泛醌”的轉移，啟動細胞用來合成ATP的過程。有若干種“單成分II-型NADH脫氫酶”可以起“多亞單元呼吸復合物-I”的替代物的作用。本文作者確定了從酵母分離出的這些較簡單的NADH脫氫酶(或稱之為Ndi1s)的其中之一的X- 射線晶體結構。從無基質狀態、與NADH結合狀態、與“泛醌”結合狀態和與NADH結合/與“泛醌”結合狀態獲得......閱讀全文
RNA聚合酶的結構
為什么細菌的RNA聚合酶需要這么大和復雜的分子結構呢?而某些噬菌體特有的RNA聚合酶則要小得多，僅由一條多肽鏈組成。這證明RNA合成所需的機構可以遠比宿主的酶小。這種情況說明，噬菌體內的轉錄僅需一條"最小"的機構。然而這種酶只能識別噬菌體本身所有的少數幾個啟動子；它們不能識別其他啟動子。例如噬菌
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料 測序級膜蛋白酶試劑、試劑盒 二硫蘇糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯儀器、耗材 螯合瓊脂糖凝膠層析介質實驗步驟 這里所述的方法概括為下列幾個步驟：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性組分中的蛋白質（見 24. 3.1 )；固相金屬螯合親和層析（IMAC) 富集磷酸肽（見 24. 3. 2 )；用串
蛋白質磷酸化
Tyrosine Kinase Assay Using Synthetic Peptides?(T. Miller)Small synthetic peptide substrates are especially well suited for applications such as assay
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料測序級膜蛋白酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒二硫蘇糖醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?碘代乙酰
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料測序級膜蛋白酶試劑、試劑盒二硫蘇糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯儀器、耗材螯合瓊脂糖凝膠層析介質實驗步驟這里所述的方法概括為下列幾個步驟：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性組分中的蛋白質（見 24. 3.1 )；固相金屬螯合親和層析（IMAC) 富集磷酸肽（見 24. 3. 2 )；用串聯質譜對磷酸
磷酸化蛋白指的是什么
買能夠區分磷酸化構型和未磷酸化構型的兩種不同抗體沒有聽過磷酸化因子的概念。你說的兩種都是蛋白質，都是細胞分子信號通路中的重要元素。JAK是一種磷酸激酶，可以將STAT磷酸化。沒有聽說過JAK自身被磷酸化。所以需要區分是否磷酸化的只有STAT。
磷酸化蛋白檢測小妙招
蛋白質磷酸化是一種非常重要且廣泛存在于原核生物和真核生物中的翻譯后修飾調控方式,參與細胞的增殖、發育、分化、凋亡,細胞骨架調控、神經活動、肌肉收縮、新陳代謝及腫瘤發生等,對許多生物的細胞功能起著生物“開/關”作用。蛋白質磷酸化指由蛋白質激酶催化的把ATP的磷酸基轉移到底物蛋白質氨基酸殘基（絲氨酸、蘇
使用Azurespot分析軟件定量非磷酸化與磷酸化蛋白
??背景去除背景扣除對于有效定量是必不可少的。?例如，AzureSpot有五個自動后臺選項和三個手動選項。>?如果背景不均勻，請使用?Rolling Ball。 類似指定半徑的圓盤在泳道輪廓下“滾動”，對信號求平均，從而產生平滑小的變化。 半徑越大，滾動越平滑。>?如果輪廓的末端與輪廓的其余部分沒有
使用Azurespot分析軟件定量非磷酸化與磷酸化蛋白
在上期我們回顧了使用多重來成像磷酸化蛋白的技巧，在這部分中，我們將介紹使用Azurespot分析軟件進行定量。 背景去除 背景扣除對于有效定量是必不可少的。 例如，AzureSpot有五個自動后臺選項和三個手動選項。 > 如果背景不均勻，請使用 Rolling Bal
蛋白質結構在結構基因組學中的應用介紹
已經測定了釀酒酵母（Saccharomyces cereuisiae）、線蟲（Caenorhabditis elegans）、果蠅（Drosophilamelanogaster）、擬南芥（Arabidopsis thaliana）等模式生物的基因組序列.。特別值得一提的是，隨著人類基因310福建
滲透細胞蛋白磷酸化實驗
基本方案 帶分析 備擇方案1 制備用于SDS-PAGE的天然細胞樣品 備擇方案2 制備用于等電聚焦的天然細胞樣品 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 檢測出目標
磷酸化蛋白做WB小妙招
1、一定要在Lysis Buffer中加入蛋白酶抑制劑，還要加入一定量的磷酸酶抑制劑；2、加一抗后最好4度過夜，保證抗體有充分的結合時間，因為磷酸化的蛋白只占總蛋白量的極少部分；3、選擇優質的磷酸化抗體，所以要選好的廠商，Novus為全球高端抗體品牌，其磷酸化抗體效果不錯；4、抗體的稀釋倍數要優化，
滲透細胞蛋白磷酸化實驗
實驗方法原理 檢測出目標蛋白是磷蛋白后，可將這個蛋白質的磷酸化過程在無細胞系統或天然細胞系統中進行研究。大多數蛋白激酶除了在細胞內還可在胞外進行許多底物的磷酸化。天然細胞的滲透化處理為得到滿意結果提供了一個有效的實驗方法，通過使用一些不同的試劑可以使細胞處于短暫的滲透狀態。這個過程使反應發生在細胞內
DNA結合蛋白的磷酸化研究
磷酸化化學計量的確定及磷蛋白形成動力學的測定l??????磷酸化作用化學計量的確定1．在冰上建立下列反應混合液：Tris-HCl（50mmol/L；pH8.0）/MgCl2（10mmol/L）????????250μlATP（10mmol/L）????????????????????????????
tau蛋白抗體可以檢測－磷酸化tau蛋白嗎
但是我不能確定293T細胞是否能符合您研究目的細胞模型；如果要研究tau蛋白磷酸化與功能方面的聯系需要用細胞模型。因為人為高表達的模型里得到的結果不一定就是正常條件下的結果。293T細胞是很好的基因轉染表達模型，因為是人腎上皮細胞系。但是我不能確定293T細胞是否能符合您研究目的細胞模型；如果要研究
磷酸化蛋白組學需要多少蛋白
蛋白質磷酸化發揮作用的途徑：（信號傳導）2. 真核細胞蛋白質磷酸化位點一般位于（絲氨酸）、（蘇氨酸）、（賴氨酸）3. 蛋白激酶在細胞信號轉導途徑主要作用：（調節細胞活性）、（放大傳導信號）4. 目前常用的磷酸肽富集方式（TiO2）、（IMAC）5. 磷酸化蛋白組定性分析包括（單一磷酸化位點鑒定）、（
病毒蛋白與基因組RNA－構筑DNA蛋白復合結構多級可控構筑
生物大分子在自然進化中發展出一套獨特的“自下而上”自組裝方式進行各種復合結構的可控裝配，為多功能生物納米材料的加工制備提供了絕佳范例。其中，核酸-蛋白質納米復合體系的可控構筑，不僅將實現生物學上兩種基本組裝模式的有效結合，以提供愈加復雜的生物結構模板，還有助于體內生物大分子相互作用的深入理解，對
磷酸化和非磷酸化蛋白分子量一樣嗎
理論上講是不一樣的，磷酸基圖大概9.9KD左右，磷酸化后條帶按道理應該發生遷移
蛋白質磷酸化的測定實驗
代謝標記 X射線片放射自顯影檢測32P標記的蛋白質 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
分析磷酸化蛋白的新方法
蛋白磷酸化是重要的翻譯后修飾，在調控基因表達和細胞功能方面起著關鍵作用。檢測磷酸化時一般使用磷酸化抗體。近幾年，市場上也出現了一些新的技術和產品，可實現磷酸化的靈敏檢測。 Phos-tag?便是其中的一種。它最初由日本廣島大學醫藥分子功能科學研究室開發，后由Wako公司商業化。P
關于麻疹病毒的形態與結構介紹
麻疹病毒為球形或絲形，直徑約120nm～250nm，核心為單負鏈RNA，不分節段，基因組全長約16kb，基因組有N、P、M、F、H、L 6個基因，分別編碼6個結構和功能蛋白：核蛋白（nucleoprotein，NP）、磷酸化蛋白（phosphoprotein，P）、M蛋白（membrane pr
高能磷酸化合物化學結構分類
從化學結構上含高能磷酸鍵的化合物分為：1、磷酸酐，如焦磷酸，核苷酸；2、羧酸和磷酸合成的混合酸酐，如乙酰磷酸，1，3-二磷酸甘油酸，氨基酰-AMP；3、烯醇磷酸，如磷酸烯醇式丙酮酸；4、磷氨酸衍生物（R-NH-PO3H2），如磷酸肌酸。
Science：利用宏基因組數據預測之前未知的蛋白結構
根據一項新的研究，從多種環境中收集的DNA序列數據有助研究人員構建出600多種蛋白家族的三維結構模型，而在此之前，它們的結構是未知的。這些宏基因組數據能夠讓人們在多種物種之間進行蛋白序列比較，從而允許利用統計學力量預測這些之前不可能預測的蛋白結構。相關研究結果發表在2017年1月20日那期Sci
蛋白質磷酸化位點怎么確定
鑒定了磷酸化肽后,還要進一步確定磷酸化肽中修飾了磷酸化位點的哪個殘基.用于確定磷酸化肽中磷酸化位點的質譜方法基于兩種不同原理,第一種方法取決于磷酸酯鍵的化學穩定性,如在ESI質譜儀的碰撞室或離子源中,或在MALDI-MS的PSD過程中.磷酸化肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的碎片離子鑒定.第二種方法基于肽段
大鼠磷酸化AKT蛋白(AKT)ELISA檢測法
大鼠磷酸化AKT蛋白(AKT)ELISA試劑盒?(用于血清、血漿、細胞培養上清液和其它生物體液內)?原理本實驗采用雙抗體夾心?ABC-ELISA法。用抗大鼠?AKT?單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的AKT與單抗結合，加入生物素化的抗大鼠AKT，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Str
酪氨酸磷酸化相關蛋白western－blot條帶
1.首先裂解液中應該有去污劑之類的如SDS、NP-40等2.為了防止蛋白降解，還要加入蛋白酶抑制劑之類的PMSF以及胰蛋白酶抑制劑等3.為了防止磷酸化蛋白的去磷酸化，還要加入磷酸酶抑制劑之類的如氟化鈉、釩酸鈉之類等
Western－Blot蛋白質磷酸化操作小貼士
WB 是檢測和定量磷酸化蛋白質的重要實驗方法，然而大家一直都說磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出條帶的時候，會特別沮喪。 Azure君在此給大家列出幾點小建議，希望能幫助您改善一下實驗結果。 1、樣本是否表達： 查閱資料或通過預實驗確定。 2、對照設置：
蛋白質磷酸化最重要的機制
蛋白質磷酸化是調節和控制蛋白質活力和功能的最基本、最普遍，也是最重要的機制。蛋白質磷酸化主要發生在兩種氨基酸上，一種是絲氨酸(包括蘇氨酸)，另一種是酪氨酸。這兩類酸磷酸化的酶不一樣，功能也不一樣，但也有少數雙功能的酶可以同時作用于這兩類氨基酸，如MEK(促絲裂原活化蛋白激酶激酶mitogen-a
滲透細胞蛋白磷酸化實驗——帶分析
本實驗討論用三磷酸核苷在可滲透細胞和分離的細胞組分體外標記蛋白的策略。這類實驗在大多數情況下還是以 [γ-32P] ATP 作為外源性磷酸供體。盡管在特殊情況下[γ-32P] GTP 也能被用于蛋白質標記。實驗方法原理檢測出目標蛋白是磷蛋白后，可將這個蛋白質的磷酸化過程在無細胞系統或天然細胞系統中進
蛋白磷酸化檢測的注意事項
1、樣本準備過程中防止蛋白質降解和保留翻譯后修飾? ? ?樣本準備過程中，細胞會釋放蛋白酶和/或去磷酸化酶，為了減少這些酶的活性，處理樣本的過程應在冰上進行，并預先冷卻所有緩沖液，并且建議用含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液。2、磷酸化特異性抗體的選擇? ? ?選擇磷酸化特異性抗體時，選擇所要檢測位