腫瘤細胞學上的常用實驗方法
前幾期，我們已經了解了腫瘤細胞的基本特征及培養手法等，接下來我們將會陸續為大家介紹各種常用的細胞實驗技術。對于任何研究，一套系統的邏輯思路似乎比具體實驗方法更重要。所以在介紹之前，我們就從藥物研發的角度，和大家一起簡單聊聊前人們的研究思路以及腫瘤學研究中一些常用方法與技術，歡迎互相討論。 第一部分:以NCI為代表的藥物篩選模式 該篩選模式即NCI基于NCI-60的抗腫瘤藥物篩選模式，自1990年起，業界和學術界利用NCI-60細胞已篩選出10萬余種化合物，這一方法也是目前腫瘤藥物發現領域的中流砥柱。 首先看看它經歷的4個發展階段： 1955-1985年：體內篩選模型（in vivo）。以移植性腫瘤動物模型為基礎，以動物生命延長率和腫瘤生長抑制率為藥物基本評價指標； 1985-1990年：體外篩選模型（in vitro）逐漸取代體內模型。即放棄體內小鼠篩選，以人腫瘤細胞株為基礎的體外抗腫瘤藥物篩......閱讀全文
腫瘤細胞學上的常用實驗方法
前幾期，我們已經了解了腫瘤細胞的基本特征及培養手法等，接下來我們將會陸續為大家介紹各種常用的細胞實驗技術。對于任何研究，一套系統的邏輯思路似乎比具體實驗方法更重要。所以在介紹之前，我們就從藥物研發的角度，和大家一起簡單聊聊前人們的研究思路以及腫瘤學研究中一些常用方法與技術，歡迎互相討論。
分子克隆實驗引入寄主細胞的常用方法
常用兩種方法：①轉化或轉染，方法是將重組質粒DNA或噬菌體DNA(M13)與氯化鈣處理過的宿主細胞混合置于冰上，待DNA被吸收后鋪在平板培養基上，再根據實驗設計使用選擇性培養基篩選重組子，通常重組分子的轉化效率比非重組DNA低，原因是連接效率不高，有許多DNA分子無轉化能力，而且重組后的DNA分子比
實驗室常用哪些細胞破碎方法
一般用物理或者化學方法來使得細胞裂解物理法：（1）反復凍融：將細胞反復放置于-20℃冷凍以及25-30℃環境下，反復冷凍溶解10次-20次。適用于例如血細胞等大部分哺乳動物細胞。（2）煮沸法：與凍融法相反，將細胞放置于100℃沸水煮沸5-10分鐘，適用于大部分微生物細胞。（3）超聲法：將細胞放置于超
腫瘤細胞侵襲實驗
Matrigel 基質膜模型 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯
腫瘤細胞侵襲實驗
Matrigel 基質膜模型 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯
動物實驗的常用方法
在醫學教學、科研和醫學工作中，不論是從事基礎醫學的還是臨床醫學、預防醫學，都需要用實驗動物來進行各種實驗。通過對動物的實驗的觀察和分析，來研究和解決醫學上存在的許多問題，動物實驗方法已成為醫學科學研究和教學工作中必不可少的重要手段。動物實驗方法是多種多樣的，在醫學的各個領域內都有其不同的應用，其中一
普通實驗室最常用的細胞計數的方法
細胞計數板法。步驟1.將計數板及蓋玻片擦拭干凈，并將蓋玻片蓋在計數板上；2.輕輕吹打細胞懸液，使細胞均勻分布；吸出少許細胞懸液滴在細胞入口，使細胞懸液充滿蓋玻片和計數板之間，靜置1-2min，使細胞沉降；注意蓋玻片下不要有氣泡，也避免細胞懸液進入旁邊的槽中；3.在顯微鏡下對A/B/C/D四個大格內的
常用的細胞轉染方法
轉染是將外源性基因導入細胞內的一種技術，是實驗室工作中經常涉及的基本方法。常規轉染技術可分為兩大類：瞬時轉染和穩定轉染（永久轉染）。前者外源 DNA?/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數，產生高水平的表達，但通常只持續幾天，多用于啟動子和其它調控元件的分析；后者外源DNA
腫瘤細胞的培養方法
腫瘤細胞培養成功關鍵在于：取材、成纖維細胞的排除、選用適宜的培養液和培養底物等幾個方面。在具體培養方法方面，腫瘤細胞培養與正常組織細胞培養并無原則差別，初代培養應用組織塊和消化培養法均可。1．取材：人腫瘤細胞來自外科手術或活檢瘤組織。取材部位非常重要，體積較大的腫瘤組織中有退變或壞死區，取材時盡量避
腫瘤細胞培養實驗
腫瘤細胞培養實驗可用于：（1）研究腫瘤的發生機理；（2）研究生物學行為；（3）研究抗腫瘤藥物。實驗方法原理腫瘤組織及細胞在模擬體內生長環境的條件下、與一般組織細胞一樣、也能夠生長發育乃至繁殖、為研究癌變機理、抗癌藥檢測、腫瘤分子生物學提供大量的實驗材料。實驗材料腫瘤組織試劑、試劑盒培養液Hanks胰
腫瘤細胞培養實驗
實驗材料 細胞試劑、試劑盒 培養液Hanks胰蛋白酶EDTA膠原酶儀器、耗材 培養瓶離心管實驗步驟 一、成纖維細胞排除法1. ?機械刮除法?是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭（用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲），或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用（也可用特制電熱燒灼器刮除）。刮除程序為（1）標記鏡下
腫瘤細胞培養實驗
腫瘤細胞培養實驗 提高腫瘤細胞培養存活率和生長率的實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 腫瘤組織及細胞在模擬體內生長環境的條件下、與一般組織細胞一樣、也能夠生長發育乃
目前細胞計數的常用方法
Countstar自動細胞計數儀技術特點：1.寬泛的樣本檢測范圍：測量濃度范圍：1×104—3×107/ml；直徑范圍：5-180μm，可檢測各種傳代細胞及原代細胞，干細胞，藻類，浮游生物，酵母細胞，白細胞等。2.經濟節約的配套耗材成本：每個樣品測量盤可檢測5個樣品，提供實驗結果的平行性及可重復性檢
血細胞常用的染色方法
血細胞常用的染色方法是檢驗技師需要了解的知識，醫學教育網搜索整理如下： 細胞涂片，在用普通光學顯微鏡觀察之前需要固定和染色。固定是將細胞蛋白質和多糖等成分迅速交聯凝固，以保持其原有結構不發生變化。染色的目的是使細胞的主要結構，如細胞質、細胞核、細胞器等染上不同的顏色，便于顯微鏡下觀察。各種細胞涂片
細胞凋亡試驗常用的方法
細胞凋亡試驗常用的方法（MTT法、熒光法、DNA瓊脂糖凝膠電泳法與流式細胞儀檢測法）（一）藥物對腫瘤細胞的抑制效應的MTT法：用培養基將腫瘤細胞調整至2 X108個/L，在96孔板中每孔加入100ul細胞懸液于37℃、5% CO2下培養過夜。次日每孔加入不同濃度的藥物100mg/L作為試驗組，設加完
原代細胞常用純化方法
人工純化是利用人為手段造成對某一細胞生長有利的環境條件，抑制其他細胞的生長從而達到純化細胞的目的。 1、細胞時間差酶消化法： 酶消化法是比較常用的純化方法，不僅對貼壁細胞可行，能利用上皮細胞和成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受性不同，是兩者分開，達到純化的目的；另外對貼壁細胞與半貼壁細胞及黏附細胞
循環腫瘤細胞的檢測方法
近年來隨著現代醫學研究技術的進步和CTC臨床應用價值凸顯，許多研究機構和研發團隊都在推出不同的CTC檢測技術。由于血液中CTC的含量極低，目前主流的檢測方法是先捕獲（富集）后檢測，少量方法是不捕獲（富集）直接檢測。CTC檢測技術包括CTC的富集（分離）和CTC的分析鑒定（識別）。本篇文章將介紹C
細胞生物基本方法：常用轉化細胞
幾種常用轉化細胞和轉化技術1）致癌化學物轉化細胞：轉化敘利亞地鼠胚胎細胞實驗1．取材：妊娠后第13天取材，取數個同窩胚胎，去頭和內臟，在無菌條件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分鐘，濾過、低速離心、吸除消化液、加入營養液、制備成細胞懸液、接種入1875p
腫瘤細胞原代培養實驗
組織塊法 酶消化法 脫落細胞法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 腫瘤細胞的原代培養與正常細胞的原代培養的條件基本相似。一般常用原代細胞的基礎培養基，10%血
腫瘤細胞原代培養實驗
組織塊法 酶消化法 脫落細胞法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 腫瘤細胞的原代培養與正常細胞的原代培養的條件基本相似。一般常用原代細胞的基礎培養基，10%血
腫瘤細胞原代培養實驗
實驗方法原理 腫瘤細胞的原代培養與正常細胞的原代培養的條件基本相似。一般常用原代細胞的基礎培養基，10%血清濃度即可，在原代培養時需加入原代細胞培養的特制添加物，或原患者血清（1%-2%）以利細胞生長。用細胞生長因子如胰島素、氫化可的松、雌激素等等。也可以考慮動物媒介培養。根據細胞種類不同選用
腫瘤細胞培養方法
腫瘤細胞培養成功關鍵在于：取材、成纖維細胞的排除、選用適宜的培養液和培養底物等幾個方面。在具體培養方法方面，腫瘤細胞培養與正常組織細胞培養并無原則差別，初代培養應用組織塊和消化培養法均可。1、取材：人腫瘤細胞來自外科手術或活檢瘤組織。取材部位非常重要，體積較大的腫瘤組織中有退變或壞死區，取材時盡量避
實驗室常用的消解方法
在化學檢驗中，消解處理是為了排除有機物和懸浮物干擾，將各種價態的元素氧化成單一高價態或轉變成易于分離的無機化合物，從而得到清澈透明無沉淀的濃縮溶液用于檢測分析。 消解處理主要應用于鈣、鎂、鈉、鋅、銅、鐵、磷等微量成分的分析。實驗室常用的消解方法主要有：干法消解（灼燒法）、濕法消解和微波消解三種。
實驗動物中常用的麻醉方法
(一)全身麻醉：麻醉藥經呼吸道吸入或靜脈、肌肉注射,產生中樞神經系統抑制,呈現神志消失，全身不感疼痛，肌肉松弛和反射抑制等現象，這種方法稱全身麻醉。其特點為抑制深淺與藥物在血液內的濃度有關,當麻醉藥從體內排出或在體內代謝破壞后,動物逐漸清醒，不留后遺癥。吸入麻醉法 麻醉藥以蒸氣或氣體狀態經呼吸道吸入
常用的細胞染色方法有哪些
常用的細胞染色方法有：1、簡單染色法，常用堿性染料如美藍等進行簡單染色；2、革蘭氏染色法，主要包括結晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脫色以及番紅復染四個過程；3、瑞氏染色法，瑞氏染料溶劑主要是由伊紅美藍組成；4、吉姆薩染色法，吉姆薩染色原理與結果和瑞特染色法基本相同；5、細胞免疫熒光染色法，免疫熒
常用的幾種細胞破碎方法介紹
細胞破碎方法簡述 隨著重組DNA技術得到廣泛應用以來，生物技術發生了質的飛躍。很多基因工程產物都是胞內物質，必須將細胞破壁，使產物得以釋放，才能進一步提取，因此細胞破碎是提取胞內產物的關鍵步驟，破碎方法的得當與否，直接影響到所提取產品的產量、質量和生產成本。現將近年來常用的幾種細胞破碎方法介紹一
實驗室常用滅菌方法
? 實驗醫學微生物學常用的器材一般包括玻璃器材、金屬器械、橡膠制品及塑料制品等，每類器材的處理及消毒措施都有不同。嚴格的消毒滅菌工作極為重要，直接影響著整個實驗能否順利進行。 (一)消毒滅菌方法 目前常用的消毒滅菌方法多采用物理方法(如干熱滅菌法、濕熱滅菌法、過濾除菌法、射線殺
細胞培養常用設備及實驗技巧（一）常用設備
準備室的設備：單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜（放置未消毒物品）、儲品規（放置消毒過的物品）、包裝臺。配液室的設備：扭力天平和電子天平（稱量藥品）、PH計（測量培養用液PH值）、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）。培養室的設備：液氮罐、儲品柜（存放雜物）、日光燈和紫外燈、空氣
常用細胞凋亡檢測方法（四）
五 TUNEL法? 細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3'-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測，這類方法稱為脫氧核
常用細胞凋亡檢測方法（二）
二、磷脂酰絲氨酸外翻分析（Annexin V法）? 磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于細胞膜的內側，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中(圖3)。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，