細胞凋亡試驗常用的方法(MTT法、熒光法、DNA瓊脂糖凝膠電泳法與流式細胞儀檢測法)(一)藥物對腫瘤細胞的抑制效應的MTT法:用培養基將腫瘤細胞調整至2 X108個/L,在96孔板中每孔加入100ul細胞懸液于37℃、5% CO2下培養過夜。次日每孔加入不同濃度的藥物100mg/L作為試驗組,設加完全培養基不加藥物的陰性對照,并用功能明確的藥物為陽性對照和0.5%的乙醇溶劑對照。每組均設4-6個復孔(平行孔)、37℃、5% CO2繼續培養。培養至12h、24h、48h、實驗終止前4-6h加入10ulMTT(5g/L),培養4-6h后,陰性對照孔中已形成明顯的藍紫色顆粒結晶時加100ul/孔SDS-HCl終止反應,于37℃存放過夜。用酶標儀在A570波長下測吸光度值,按下式計算抑制率。抑制率(%)=(1-試驗組平均吸光度值/陰性對照組平均吸光度值)x 100%。(二)熒光法:選用上述最佳濃度作用于腫瘤細胞,培養細胞48h后,收貨細......閱讀全文
二、細胞凋亡的細胞化學測定細胞凋亡的細胞化學測定包括細胞表面(細胞膜)的結構和通透性改變的測定和細胞核DNA改變的測定。根據應用的范圍,又可分為細胞群休和單個細胞測定兩種,以下僅介紹其中幾種較為常用的方法。碘化丙啶(propidium iodide,PI)檢測早期死亡細胞膜通透性狀態的不同是區分細胞
細胞凋亡又稱程序性細胞死亡(PCD),是細胞衰老自然死亡的主要方式之一,在機體中承擔著重要的調控作用。它不僅在維持細胞群體數量的穩定、胚胎發育和免疫系統的克隆選擇方面,而且在腫瘤發生、發展、抗腫瘤藥物的治療等方面具有十分重要的作用。細胞凋亡是由基因編程控制的細胞主動參與的自殺過程沒事一種生理性調節機
細胞程序性死亡是正常生理現象,多發生于胚胎發育和維持組織自身平衡。Kerr et al.最早發現有兩種細胞死亡:壞死(Necrosis)和凋亡(Apoptosis)。Apoptosis,希臘文意思是樹葉從樹上“凋落”,這里是指凋亡,是細胞主動參與自身死亡的過程。凋亡程序有一些特殊形態學特征,包括
提 綱 一、化療藥物的發展 二、腫瘤的藥物治療 三、抗腫瘤藥物篩選及評價 四、體外抗腫瘤活性試驗 五、體內抗腫瘤活性試驗 一、化療藥物的發展 ? 近代腫瘤化療學始于20世紀40年代。 ? 50年代通過動物篩選化療藥物發現了5FU、MTX、CTX等,
提 綱 一、化療藥物的發展 二、腫瘤的藥物治療 三、抗腫瘤藥物篩選及評價 四、體外抗腫瘤活性試驗 五、體內抗腫瘤活性試驗 一、化療藥物的發展 ? 近代腫瘤化療學始于20世紀40年代。 ? 50年代通過動物篩選化療藥物發現了5FU、MTX、CTX等,
凋亡細胞的原位末斷轉移酶標記法(TUNEL法) 細胞凋亡的多步驟機制作用的最終環節是;細胞內源性核酸內切酶的激活而導致核染色質DNA雙鏈的斷裂。大量DNA片段暴露出的3羥基在末斷轉移酶(terminaldeoxynucleotidyltransferase,TdT)或DNA多聚酶的作用下,
凋亡細胞的原位末斷轉移酶標記法(TUNEL法) 細胞凋亡的多步驟機制作用的最終環節是;細胞內源性核酸內切酶的激活而導致核染色質DNA雙鏈的斷裂。大量DNA片段暴露出的3 羥基在末斷轉移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT)或DNA多聚酶
凋亡細胞的原位末斷轉移酶標記法(TUNEL法)細胞凋亡的多步驟機制作用的最終環節是;細胞內源性核酸內切酶的激活而導致核染色質DNA雙鏈的斷裂。大量DNA片段暴露出的3 羥基在末斷轉移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT)或DNA多聚酶的作用
一、 實驗準備1. 標本制備:2. zui小化非特異性結合: 二、凋亡1.凋亡的檢測方法:網站和其它2.PI染色法3.Annexin V 法4.TUNNEL法 三、細胞因子1.激活的細胞因子2.CBA 四、血小板
細胞凋亡(apoptosis)是一種由基因控制的細胞自主性死亡方式。其發生誘因及形態學特征均有別于壞死,與人類免疫系統的發生發展、神經組織發育、器官的形成、腫瘤的發生發展等諸多生物學現象之間有著密切聯系,并且是免疫應答過程中免疫細胞的殺傷機制之一。細胞凋亡的檢測技術已成為免疫學檢測的一個重要內容。凋
活體動物體內光學成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA,而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP, Cyt及dyes等)進
腫瘤細胞在組織培養中占有核心的位置,首先癌細胞是比較容易培養的細胞。當前建立的細胞系中癌細胞系是最多的。另外腫瘤對人類是威脅最大的疾病。腫瘤細胞培養是研究癌變機理、抗癌藥檢測、癌分子生物學極其重要的手段。腫瘤細胞培養對闡明和解決癌癥將起著不可估量的作用。一、組織培養腫瘤細胞生物學特性腫瘤細胞與體內正
第一節 概念這里想明確兩個概念,一個是Transwell,另一個是腫瘤細胞侵襲模型。1. Transwell關于Transwell這個詞該如何解釋,查了很多資料也未見準確的注解,我覺得可以這么理解吧,trans-這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思,well有小室的意思,可以從字面上理解,這是一類有通透
誘導性多能干細胞(iPS細胞)最初是日本科學家山中伸彌(Shinya Yamanaka)團隊在2006年利用病毒載體將四個轉錄因子(Oct4, Sox2, Klf4 和c-Myc)的組合轉入到小鼠胚胎或皮膚纖維母細胞中,使其重編程而得到的類似胚胎干細胞的一種細胞類型。這些ips細胞在形態、基因和
2017年8月,全球迎來首款上市的CAR-T療法,美國FDA批準諾華的Kymriah用于25歲以下復發難治性B淋巴細胞急性白血病(B-ALL)患者。這是一個歷史性的里程碑事件。緊接著的10月,吉利德/Kite Pharma的Yescarta獲FDA批準,用于治療復發難治性大B細胞淋巴瘤的成年患者
2017年8月,全球迎來首款上市的CAR-T療法,美國FDA批準諾華的Kymriah用于25歲以下復發難治性B淋巴細胞急性白血病(B-ALL)患者。這是一個歷史性的里程碑事件。緊接著的10月,吉利德/Kite Pharma的Yescarta獲FDA批準,用于治療復發難治性大B細胞淋巴瘤的成年患者
急性淋巴細胞白血病(ALL)是瑞士最常見的兒童癌癥。盡管接受了高強度化療,五分之一的患者病情會復發,通常預后不良。來自蘇黎世大學和蘇黎世兒童醫院的研究人員現在找到一種方法通過程序性壞死(necroptosis)來殺死耐藥白血病細胞。 一切都源于血中的防御細胞——惡性轉化前體淋巴細胞。目前,高強
過繼性細胞免疫治療是目前較為有效的惡性腫瘤的治療方法之一。隨著技術的日趨成熟, 已在多種實體瘤和血液腫瘤的臨床治療中取得較好療效。 摘要: 過繼性細胞免疫治療(adoptive cellular immunotherapy, ACI)是目前較為有效的惡性腫瘤的治療方法之一。隨著技術的日趨成熟,
單細胞凝膠電泳分析(single cell gel eletrophoresis,SCGE)是由Ostling等(1984)首創,后經Singh等(1988)進一步完善并逐漸發展起來的一種快速檢測單細胞 DNA損傷的實驗方法,適用于多種細胞,能夠靈敏地檢測DNA斷裂,在檢測誘變劑、射線等
DNA斷裂是細胞凋亡的重要特征,在凋亡初期,DNA可斷裂形成200-250kb或30-35kb 的大片段;晚期則可進一步在核小體間斷裂,形成180-200bp的DNA斷裂碎片。TUNEL(TdT mediated dUTP Nick End Labeling,末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUT
12. 藥物對蛋白質相互作用的影響Kinetics of regulated protein-protein interactions revealed with firefly luciferase complementation imaging in cells and living anima
第一節 老年癡呆的定義 阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s disease,AD),又稱老年性癡呆,是一種與衰老相關,以認知功能下降為特征的漸進性腦退行性疾病或綜合癥。病人整個大腦彌散性萎縮并出現明顯的病 理組織學改變——老年斑(senile plaque, SP)(或神經炎性斑,ne
第一節 老年癡呆的定義 阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s disease,AD),又稱老年性癡呆,是一種與衰老相關,以認知功能下降為特征的漸進性腦退行性疾病或綜合癥。病人整個大腦彌散性萎縮并出現明顯的病 理組織學改變——老年斑(senile plaque, SP)(或神經炎性斑,ne
基因療法以其“一次給藥,終身受益”的優勢越來越受到醫療市場的青睞。截至目前,歐洲藥品管理局(EMA)、美國食品藥品管理局(FDA)及中國國家食品藥品監督管理總局(NMPA)等機構至少已批準13種基因治療產品上市,同時還有2500多項細胞和基因治療正在進行臨床試驗。2019年8月,國際頂級期刊《新
基因療法以其“一次給藥,終身受益”的優勢越來越受到醫療市場的青睞。截至目前,歐洲藥品管理局(EMA)、美國食品藥品管理局(FDA)及中國國家食品藥品監督管理總局(NMPA)等機構至少已批準13種基因治療產品上市,同時還有2500多項細胞和基因治療正在進行臨床試驗。2019年8月,國際頂級期刊《新
細胞分裂 如果你突然得知一位因病去世了 60 多年的長輩其實還“活著”,并且在全世界的實驗室里被研究,至今繁殖了 18000 代,總重量達到 5000 萬噸,你會作何感想? 一位黑人婦女 67 年前患上宮頸癌去世,她的癌細胞卻流傳了下來用做科學研究。而她的家人與子孫在她死后
維生素E(Vitamin E)是一種脂溶性維生素,其水解產物為生育酚,是最主要的抗氧化劑之一。它是機體許多器官、神經以及肌肉維持正常功能的必要營養物質,而且其也是一種抗凝劑,可以減少凝血。人體不能生成維生素E,只能從油脂、肉類以及其它食物中攝入,但是人們常常攝入維生素E的水平不足,尤其是在低脂飲
小動物活體成像 主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA,而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP, Cyt及dyes等)進行標記。利用一套非常靈敏的光學
小動物活體成像主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA,而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP, Cyt及dyes等)進行標記。利用一套非常靈敏的光學檢測儀器,讓研究人員能夠直
胰腺癌是致死率極高的一種癌癥。每100位胰腺癌患者中,只有3位可以存活5年以上,而且,近40年來,此癌癥的存活率并沒有提高。大多數的胰腺癌患者確診的時間比較晚,80%的患者在術后有復發現象。 Nature:胞外體蛋白或有助診斷早期乳腺癌 目前關于胰腺癌的研究數據表明,早期檢測可以挽救更多的生