毛細管凝膠電泳技術介紹
中文名稱毛細管凝膠電泳英文名稱capillary gel electrophoresis;CGE定 義將凝膠移到毛細管中作支持物進行的一種電泳。由于溶質分子體積不同,在起分子篩作用的聚合物內進行電泳時被分離。適用于生物大分子的分析及PCR產物分析。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)......閱讀全文
毛細管凝膠電泳技術介紹
中文名稱毛細管凝膠電泳英文名稱capillary gel electrophoresis;CGE定 義將凝膠移到毛細管中作支持物進行的一種電泳。由于溶質分子體積不同,在起分子篩作用的聚合物內進行電泳時被分離。適用于生物大分子的分析及PCR產物分析。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技
凝膠電泳技術介紹
一般瓊脂糖凝膠電泳只能分離小于20kb的DNA。這是因為在瓊脂糖凝膠中,DNA分子的有效直徑超過凝膠孔徑時,在電場作用下,迫使DNA變形擠過篩孔,而沿著泳動方向伸直,因而分子大小對遷移率影響不大。如此時改變電場方向,則DNA分子必須改變其構象,沿新的泳動方面伸直,而轉向時間與DNA分子大小關系極為密
瓊脂糖凝膠電泳技術介紹
一、凝膠制備1.微波爐溶解瓊脂糖時,膠液沸騰沖溢出三角錐瓶微波爐加熱時膠液可能發生劇烈沸騰,1)總液體量不宜超過三角錐瓶的?50%?容量,2)2%?以上膠液設置中火加熱3)膠液劇烈沸騰時,停止加熱,移開三角錐瓶,請戴上防熱手套,小心搖動三角錐瓶,然后再次加熱,膠液沸騰直至膠液清澈,保證瓊脂糖完全溶解
雙向凝膠電泳技術
雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上分開。近年來經過多方面改進已成為研究蛋白質組的最有使用價值的核心方法。分離蛋白質組所有蛋白的兩個關鍵參數是其分辨率和可重復性。在目前情況下,雙向凝膠電泳
雙向凝膠電泳技術
雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上分開。近年來經過多方面改進已成為研究蛋白質組的最有使用價值的核心方法。 分離蛋白質組所有蛋白的兩個關鍵參數是其分辨率和可重復性。在目前情況下,
雙向凝膠電泳技術
雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上分開。近年來經過多方面改進已成為研究蛋白質組的最有使用價值的核心方法。 分離蛋白質組所有蛋白的兩個關鍵參數是其分辨率和可重復性。在目前情況下,
毛細管電泳技術缺點
毛細管電泳的缺點是:(1) 由于進樣量少,因而制備能力差;(2) 由于毛細管直徑小,使光路太短,用一些檢測方法(如紫外吸收光譜法)時,靈敏度較低;(3)電滲會因樣品組成而變化,進而影響分離重現性。
凝膠電泳技術的特點
以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質的區帶電泳法稱為凝膠電泳。聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)除了濃縮效應、電荷效應外,還包括分子篩效應,普遍用于分離蛋白質及較小分子核酸。瓊脂糖凝膠電泳適用于分離同工酶及其亞型、大分子核酸等。
雙向凝膠電泳技術應用
凝膠中蛋白的檢測凝膠染色的目的是使其中的蛋白質能夠被觀察到。目前還沒有通用的染色方法,只能在考慮多種因素如需要的靈敏度、線性范圍、方便程度、費用、以及成像設備類型等基礎上,結合實際進行選擇。有時也可以將蛋白轉膜后通過免疫印跡的方法來進行檢測。圖像采集和分析成像設備可以攝人圖像,對凝膠圖像以數字形式保
凝膠電泳技術的特點
以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質的區帶電泳法稱為凝膠電泳。 聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)除了濃縮效應、電荷效應外,還包括分子篩效應,普遍用于分離蛋白質及較小分子核酸。 瓊脂糖凝膠電泳適用于分離同工酶及其亞型、大分子核酸等。
凝膠電泳技術的特點
以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質的區帶電泳法稱為凝膠電泳。聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)除了濃縮效應、電荷效應外,還包括分子篩效應,普遍用于分離蛋白質及較小分子核酸。瓊脂糖凝膠電泳適用于分離同工酶及其亞型、大分子核酸等。
關于單細胞凝膠電泳技術的步驟介紹
1、單細胞凝膠電泳技術— 制備第一層膠:100ml 0.8%正常熔點膠,加蓋蓋玻片,4℃固化10min; 2、單細胞凝膠電泳技術—?制備第二層膠:輕輕地去除蓋玻片,在第一層膠上滴加75ul含1×10000個細胞的0.6%低熔點膠(cell與凝膠比例為1:5),加蓋蓋玻片,4℃固化10min;
毛細管電泳技術的定義
毛細管電泳(capillary electrophoresis,CE)又稱高效毛細管電泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE),是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅動力的新型液相分離技術。毛細管電泳實際上包含電泳、色譜及其交叉內容,
雙向凝膠電泳技術的原理
1、根據蛋白質的等電點(第一向)和分子量(第二向)的不同進行分離。2、電泳后根據蛋白質的上樣量對膠進行考馬斯亮蘭染色、銀染或熒光染色,然后用相關軟件對電泳圖象進行分析。
瓊脂糖凝膠電泳技術
一、瓊脂糖凝膠的特點 天然瓊脂(agar)是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(agarose,約占80%)及瓊脂膠(agaropectin)組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷,而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由于這些基團帶有電荷,在電場作用下能產生較強的電滲現象,
雙向凝膠電泳技術的概念
雙向凝膠電泳由O'Farrel以及Klose和Scheele等人于1975年發明的,原理是第1向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離,具有相同等電點的蛋白質無論其分子大小,在電場的作用下都會用聚焦在某一特定位置即等電點處;第2向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復雜蛋白混合物中的蛋白
蛋白質組的雙向凝膠電泳技術介紹
雙向凝膠電泳技術與質譜技術是目前應用最為廣泛的研究蛋白質組學的方法。雙向凝膠電泳技術利用蛋白質的等電點和分子量差別將各種蛋白質區分開來。雖然二維凝膠電泳難以辨別低豐度蛋白,對操作要求也較高,但其通量高、分辨率和重復性好以及可與質譜聯用的特點,使其成為目前最流行、可靠的蛋白質組研究手段。雙向凝膠電
關于單細胞凝膠電泳技術的實驗舉例介紹
Kizilian(1999)改進了一些單細胞凝膠電泳技術試驗條件,能明顯將細胞調亡和細胞壞死的形象與“彗星”區分。MarkS.Rundell等(2003)報道彗星試驗測行的損傷主要是由致突變劑引起的。RichardD.Bowden等(2003)研究出了一種新的分析試驗結果的彗星尾圖譜,可以更加準
毛細管電泳技術應用生物樣本
生物體內藥物及其代謝物的隨時間與位置分布研究,即藥物動力學分析,在臨床醫學中有重要意義。在非水溶劑中可降低被分析物與管壁的作用,降低由于吸附所引起的峰拓寬并改善拖尾,同時可顯著提高被分析物的回收率,降低用管壁面積較大的毛細管進行分析時被分析物的損失。近年來,用毛細管電泳法進行生物樣本中的藥物及其代謝
毛細管電泳技術的儀器系統
毛細管電泳系統的基本結構包括進樣系統、兩個緩沖液槽、高壓電源、檢測器、控制系統和數據處理系統。1-溫度控制系統;2-高壓電源;3-高壓電極槽;4-毛細管;5-檢測器;6-低壓電極槽;7-鉑絲電極;8-記錄/數據處理由于毛細管內徑的限制,檢測信號是CE系統最突出的問題。紫外可見法(UV)是CE常用的檢
毛細管電泳技術生化檢驗知識
毛細管電泳技術是生化檢驗考試復習需要了解的知識,醫學|教育網搜集整理了相關內容與考生分享。CE是一項迅速發展的分離技術,主要用于生物大分子的分離,如DNA和被十二烷基磺酸鈉 (SDS)飽和的蛋白質,是在一根內徑25~100μm毛細管內進行的,毛細管中充入交聯聚合物,聚合物起到了分子篩的作用,使質量電
毛細管電泳技術的應用特點
毛細管電泳(capillary electrophoresis,CE)又稱高效毛細管電泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE),是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅動力的新型液相分離技術。毛細管電泳實際上包含電泳、色譜及其交叉內容,
毛細管電泳技術的分離因素
緩沖液緩沖試劑的選擇主要由所需的pH決定,在相同的pH下,不同緩沖試劑的分離效果不盡相同,有的可能相差甚遠。CE中常用的緩沖試劑有:磷酸鹽、硼砂或硼酸、醋酸鹽等。緩沖鹽的濃度直接影響到電泳介質的離子強度,從而影響Zeta電勢,而Zeta電勢的變化又會影響到電滲流。緩沖液濃度升高,離子強度增加,雙電層
毛細管電泳技術發展歷程
毛細管電泳(Capillary Electrophoresis,CE),又稱高效毛細管電泳,是一類以毛細管為分離通道、高壓直流電場為驅動力的新型液相分離分析技術 (Fig.1)。自20世紀90年代以來,該技術迅速被各種標準 (包括中國藥典、國標、美國藥典,甚至是歐洲標準) 所收錄,成為現代分析科學中
毛細管電泳技術應用中藥分析
中藥品種繁多、藥材產地各異、成分復雜,無論是藥材還是成藥的分析,都是一項非常艱難的任務。中藥分析工作用現代化儀器設備和科技手段(如薄層色譜、HPLC等)雖取得巨大進展和成就,但往往只是對藥材和成藥成百上千個成分中的一個或幾個成分的分析,實際只是一種象征性的代表式分析,與之起化學和藥理效應的實際組合成
毛細管電泳技術的優缺點
毛細管電泳具備如下優點:(1)高效塔板數目在105-106 片/m 間,當采用CGE 時,塔板數目可達107 片/m 以上;(2)快速一般在十幾分鐘內完成分離;(3)微量進樣所需的樣品體積為nL 級;(4)多模式可根據需要選用不同的分離模式且僅需一臺儀器;(5)經濟實驗消耗不過幾毫升緩沖溶液,維持費
雙向凝膠電泳技術的樣品要求和制備的介紹
樣品要求 1、建議使用的蛋白質溶解體系為8M尿素/4%CHAPS /40mMTris(Base)/65mM DTT; 2、樣品濃度大于2 μg/ μl; 樣品制備 雙向電泳成功的關鍵在于建立一套有效的、可重復的樣品制備方法。樣品制備的影響因素包括蛋白質的溶解性、分子量、電荷數及等電點等。
雙向凝膠電泳技術的第一向分離介紹
蛋白質是兩性分子,在不同的pH環境中可以帶正電荷、負電荷或不帶電荷。對每個蛋白質來說都有一個特定的pH,此時蛋白質的靜電荷為零,此pH值即該蛋白質的等電點(pI)。將蛋白質樣品加載至pH梯度介質上進行電泳時,它會向與其所帶電荷相反的電極方向移動。在移動過程中,蛋白分子可能獲得或失去質子,并且隨著
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術可應用于:(1)蛋白質的分離提純;(2)蛋白質組學研究。實驗方法原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術,等電聚焦中,蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸,在電場中形成正極為酸性,
蛋白等電聚焦凝膠電泳技術
1.原理等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離的技術,等電聚焦中,蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續而穩定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸,在電場中形成正極為酸性,負極為堿性的連續的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷,因此可以在