方案6MALDIMS確定酪氨酸磷酸化位點實驗
實驗材料在聚丙烯酰胺凝膠中的放射性標記的目標磷酸化蛋白試劑、試劑盒乙腈基質溶液NH4HCO3三氯乙酸KH2P04儀器、耗材超聲儀離心干燥器HPLC柱HPLC 系統MALDI 板試管UV 檢測器死體積T-分流器實驗步驟一、SDS-PAGE 分離的 Gab-I 蛋白的消化1.把通過自顯影確定的含有磷酸化蛋白的條帶切下來。2.將凝膠切成 1mm2 的條帶，把它們放到檢測管中。用特定的不含 Na+、K+的試管消化，否則 Na+、K+的化合物會在 MS 中出現。3.用消化緩沖液 A 洗凝膠條，37°C，lOmin。4.用消化緩沖液 B 洗凝膠條，37°C，lOmin。5.重復③、④步兩次以上。6.室溫下加乙腈使凝膠條帶脫水，直到膠條變白（約 3 min)。7.加蛋白酶溶液，37°C，20 min，使凝膠膨脹。酶解溫度取決于所用的蛋白酶（例如，Glu-C 需要在 25°C，而胰蛋白酶需要在 37°C)。8.在凝膠塊上加消化緩沖液 A 防止其......閱讀全文
方案6 MALDI-MS確定酪氨酸磷酸化位點實驗
實驗材料在聚丙烯酰胺凝膠中的放射性標記的目標磷酸化蛋白試劑、試劑盒乙腈基質溶液NH4HCO3三氯乙酸KH2P04儀器、耗材超聲儀離心干燥器HPLC柱HPLC 系統MALDI 板試管UV 檢測器死體積T-分流器實驗步驟一、SDS-PAGE 分離的 Gab-I 蛋白的消化1.把通過自顯影確定的含有磷酸化
磷酸化位點分析實驗-磷酸化位點的確定
磷酸肽的化學測序 磷酸肽的質譜分析 源后衰變 用酶和化學方法去磷酸化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 磷酸化位點的確定也使用一
磷酸化位點分析實驗-磷酸化位點的確定
實驗方法原理 磷酸化位點的確定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白質被純化，如果可能蛋白質要均一；磷蛋白被特異性的化學或酶反應切斷、產生肽混合物，其中含有一到兩個磷酸肽不同之處在干其分離磷酸肽的策略是為了確定氨基酸序列，定位肽段內磷酸化的殘基。上面所述的分離方法， 2D-PP 作圖、 HPLC 或 l
方案8 用 ESI-MS 確定組氨酸磷酸化位點實驗
實驗材料目標磷酸化蛋白混合物試劑、試劑盒nano-RP-HPLC 緩沖液NH4HCO3三氟乙酸儀器、耗材μC18預柱HPLC 系統質譜儀nano-HPLC 柱子預柱分流器SEQUEST 軟件UV 檢測器實驗步驟一、多肽的消化和濃縮二、用 SEQUEST 法則進行數據自動化分析展開
磷酸化位點分析實驗-確定磷酸化氨基酸類型
實驗材料蛋白樣品實驗步驟了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型，可以限定可能的磷酸化位點，并因此簡化(對多肽鏈中磷酸化殘基的確認。磷酸化殘基類型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特異性免疫檢測確定。磷酸氨基酸分析是對肽鍵進行氣相或液相水解，此水解條件下要至少保留一段磷酸酯鍵完整。?32p標記的磷酸蛋白質或
磷酸化位點分析實驗-確定磷酸化氨基酸類型
了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型，可以限定可能的磷酸化位點，并因此簡化(對多肽鏈中磷酸化殘基的確認。磷酸化殘基類型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特異性免疫檢測確定。磷酸氨基酸分析是對肽鍵進行氣相或液相水解，此水解條件下要至少保留一段磷酸酯鍵完整。?32p標記的磷酸蛋白質或磷酸肽的水解產物與磷酸氨
磷酸化位點分析實驗-確定磷酸化氨基酸類型
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 蛋白樣品 實驗步驟 了解肽或蛋白質中磷酸化氨基酸的類型
方案7 用 ESI-MS 確定絲氨酸、蘇氨酸的磷酸化位點實驗
實驗材料丙烯酰胺凝膠條中放射性標記的目標磷酸化蛋白試劑、試劑盒乙腈烷化劑甲酸β-巰基乙醇nano-RP-HPLC 緩沖液蛋白酶溶液還原劑三氟乙酸儀器、耗材超聲儀HPLC 泵HPLC 系統質譜儀、帶有納噴離子源的ESI-MSnano-HPLC 柱預柱預柱分流器SEQUEST 軟件試管實驗步驟一、磷酸化
蛋白質磷酸化位點怎么確定
鑒定了磷酸化肽后,還要進一步確定磷酸化肽中修飾了磷酸化位點的哪個殘基.用于確定磷酸化肽中磷酸化位點的質譜方法基于兩種不同原理,第一種方法取決于磷酸酯鍵的化學穩定性,如在ESI質譜儀的碰撞室或離子源中,或在MALDI-MS的PSD過程中.磷酸化肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的碎片離子鑒定.第二種方法基于肽段
蛋白質磷酸化位點怎么確定
鑒定了磷酸化肽后,還要進一步確定磷酸化肽中修飾了磷酸化位點的哪個殘基.用于確定磷酸化肽中磷酸化位點的質譜方法基于兩種不同原理,第一種方法取決于磷酸酯鍵的化學穩定性,如在ESI質譜儀的碰撞室或離子源中,或在MALDI-MS的PSD過程中.磷酸化肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的碎片離子鑒定.第二種方法基于肽段
蛋白質磷酸化位點怎么確定
鑒定了磷酸化肽后,還要進一步確定磷酸化肽中修飾了磷酸化位點的哪個殘基.用于確定磷酸化肽中磷酸化位點的質譜方法基于兩種不同原理,第一種方法取決于磷酸酯鍵的化學穩定性,如在ESI質譜儀的碰撞室或離子源中,或在MALDI-MS的PSD過程中.磷酸化肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的碎片離子鑒定.第二種方法基于肽段
用蛋白質組學方法繪制磷酸化位點圖譜
方案1 用帶有 Fe(Ⅲ) 和 Ga(Ⅲ)的 IMAC 純化磷酸化多肽 方案2 在 MALDI 分析之前或之后對磷酸化多肽進行堿性磷酸酶處理 方案3 結合固定化金屬離子親和介質和 MALDI-TOF-MS 直接分析方法對磷酸化多肽進行特征分析實驗 方
一文了解質譜確定磷酸化位點
電噴霧質譜儀為英國Micromass公司的電噴霧四極桿正交加速飛行時間串聯質譜儀Q-TOF2。配備毛細管液相色譜和納升噴霧源。鍍金屬鈀的硼硅酸鹽電噴霧針（palladiμm-coated borosilicate electrospray needle）(Protana, Odense, Den
磷酸化位點分析實驗-源后衰變
驗材料蛋白樣品儀器、耗材質譜儀實驗步驟這種實驗在 MALDI-TOF質譜儀上進行。在 single-stage型儀器中．通過觀察亞穩裂解提供肽段序列信息。這一方法已成功用于磷酸肽的序列分析。
磷酸化位點分析實驗-用酶和化學方法去磷酸化
實驗材料蛋白樣品實驗步驟這種方法得到特別關注、但它能提供磷酸肽中磷酸化氨基酸的定位，可以在非磷酸肽占主導地位的混合物中鑒別磷酸肽，此方法使用的是磷酸酶 。用簡單的 MALDI-TOF儀器就可以得到磷酸化蛋白水解后產生肽段的質量，同樣的樣品用磷酸酶處理后，除去了絲氨酸，蘇氨酸和酪氨酸上的磷酸，再分析其
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離
2D-PP 分離磷酸肽 RP-HPLC 分離磷酸肽 高分辨凝膠電泳分離磷酸肽 IMAC 分離／富集磷酸肽 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離
實驗方法原理 即使納噴 MS/MS 技術已經成功用于直接分析蛋白酶解產生的磷酸肽但是出于以下一些原因，通常建議在質譜分析前作一些分離：(1) 磷酸肽在蛋白酶切產物中通常只占少數因此容易淹沒在低率度離子產生的總背景中，肽分離技術可濃縮分析物，因此會提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性標記并具有相同比
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 磷酸化分析的原理研究的最常見的磷酸化類型是絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知發生的磷酸化還有精氨酸、組氨酸和賴氨酸的亞酰胺化，以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。這些修飾中的其中一些是化學不穩定的，通常觀察不到，除非采取特殊的保護措
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的分離
實驗方法原理磷酸化分析的原理研究的最常見的磷酸化類型是絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知發生的磷酸化還有精氨酸、組氨酸和賴氨酸的亞酰胺化，以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。這些修飾中的其中一些是化學不穩定的，通常觀察不到，除非采取特殊的保護措施防止他們在蛋內質分離過程中消失。舉例來說，組氨酸磷酸化是一
磷酸化位點分析實驗_磷酸肽的化學測序
實驗方法原理磷酸化位點的確定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白質被純化，如果可能蛋白質要均一；磷蛋白被特異性的化學或酶反應切斷、產生肽混合物，其中含有一到兩個磷酸肽不同之處在干其分離磷酸肽的策略是為了確定氨基酸序列，定位肽段內磷酸化的殘基。上面所述的分離方法， 2D-PP 作圖、 HPLC 或 lMAC
磷酸化位點分析實驗_磷酸肽的化學測序
實驗方法原理磷酸化位點的確定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白質被純化，如果可能蛋白質要均一；磷蛋白被特異性的化學或酶反應切斷、產生肽混合物，其中含有一到兩個磷酸肽不同之處在干其分離磷酸肽的策略是為了確定氨基酸序列，定位肽段內磷酸化的殘基。上面所述的分離方法， 2D-PP 作圖、 HPLC 或 lMAC
磷酸化位點分析實驗-磷酸肽的質譜分析
實驗方法原理用于確定磷酸肽中磷酸化位點的壓譜方法有兩種不同的基本原理。第一種方法依賴于在質譜儀條件下，如在 ESI 質譜儀的碰撞室或離子源中，或MALDI-MS 的 PSD 過程中，磷酸酯鍵的化學穩定性。因此，磷酸肽可通過磷酸酯鍵斷裂產生的診斷離子鑒定。第二種方式依靠檢測磷酸酯基團使肽段增加的質量數
為什么蛋白質保守絲氨酸位點是其磷酸化位點
磷酸化位點一般有絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸。其中，絲氨酸和蘇氨酸是最常見的磷酸化位點，因為其結構末端含有羥基，羥基很活潑，可以與磷酸基團結合。磷酸化的過程就是傳遞磷酸基團。所以說，蛋白質中如果某個絲氨酸很保守的話，很大程度上就是磷酸化位點。
為什么蛋白質保守絲氨酸位點是其磷酸化位點
磷酸化位點一般有絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸。其中，絲氨酸和蘇氨酸是最常見的磷酸化位點，因為其結構末端含有羥基，羥基很活潑，可以與磷酸基團結合。磷酸化的過程就是傳遞磷酸基團。所以說，蛋白質中如果某個絲氨酸很保守的話，很大程度上就是磷酸化位點。
如何確定細胞群是否抗體a結合位點
如何確定細胞群是否抗體a結合位點A、抗體是由體液免疫中的漿細胞產生的，能與抗原發生特異性結合，A錯誤；B、漿細胞可以產生抗體與抗原發生特異性結合，B正確；C、記憶細胞是在特異性免疫反應即體液免疫和細胞免疫過程中產生的，C錯誤；D、與靶細胞接觸使其裂解死亡是效應T細胞，D錯誤．A、T細胞能分泌淋巴因子
怎么確定小分子與蛋白的活性位點
1 A:對接的時候，小分子與蛋白的活性位點是怎么選呢?參照文獻么?選擇的時候，活性位點有很多，是選擇什么樣的位點對接呢? B:先分析你的化合物和已知底物的相似性關系，再選擇合適位點。 A:我剛剛開始接觸這些，不太懂，相似性關系是分析哪方面呢? B:拓撲結構相似性，電荷分
怎么確定小分子與蛋白的活性位點？
1A:對接的時候，小分子與蛋白的活性位點是怎么選呢?參照文獻么?選擇的時候，活性位點有很多，是選擇什么樣的位點對接呢?B:先分析你的化合物和已知底物的相似性關系，再選擇合適位點。A:我剛剛開始接觸這些，不太懂，相似性關系是分析哪方面呢?B:拓撲結構相似性，電荷分部的相似性。一類化合物能結合多個口袋的
磷酸化位點分析實驗——高分辨凝膠電泳分離磷酸肽
實驗材料蛋白樣品儀器、耗材質譜儀實驗步驟在聚丙烯酰胺凝膠上用?2-DE?純化磷酸肽是最近發表的制備技術，其結果與?2D-PP?結果相似。非變性凝膠等電聚焦結合堿性?40%PAGE?膠用于磷酸肽分離及比較分析。?32p?標記樣品用放射自顯影或磷儲屏檢測。用?Edman?測序方法鑒定蛋白質并確定磷酸化位
陰離子位點顯示實驗
實驗方法原理 實驗材料 組織樣品試劑、試劑盒 磷酸緩沖液陽離子化鐵蛋白液體戊二醛鋨酸實驗步驟 1. 0.1 mol/L磷酸緩沖液配制陽離子化鐵蛋白，濃度為0.2～0.5 mg/ml。2. 組織樣品懸浮于陽離子化鐵蛋白液體中，室溫下反應30 min。3. 0.1 mol/L磷酸緩沖液充分漂洗。4. 3
研究人員利用“機器學習”幫助鑒定磷酸化位點
EMBL的歐洲生物信息學研究所（EMBL-EBI）的研究人員創建了迄今為止最大的參考磷酸化蛋白質組，將近120000個人類磷酸化位點。為了識別最重要的成員，他們使用了一種機器學習方法，能夠根據功能重要性對其進行排名。 蛋白質是細胞的核心分子機器，可以通過類似于分子開關的蛋白質修飾來調節。磷酸化