實用哺乳動物細胞培養手冊（六）
緩沖系統大多數細胞所需 pH 在 7.2 - 7.4。但是，細胞培養最適 pH 值隨培養的細胞種類不同而 不同。成纖維細胞喜歡較高 pH (7.4 - 7.7), 而傳代轉化細胞系則需要偏酸 pH (7.0 - 7.4)。 由于多數培養液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與 CO2 體系進行緩沖，因此，氣相中的 CO2 濃度 應與培養液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養箱空氣中 CO2 濃度設定在 5％，培養液中 NaHCO3 的加入量為 1.97g/L；如果 CO2 濃度維持在 10％，培養液中 NaHCO3 的加入量為 3.95g/L。細胞培養瓶蓋不應擰得太緊，以保證氣體交換。HEPES 是一種非離子緩沖液，在 pH 7.2 - 7.4 范圍內具有較好的緩沖能力，但是非 常昂貴，在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES 緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34g/L） 共用，以抵消因額外加入 HEPES 引起的滲......閱讀全文
哺乳動物細胞的細胞培養
實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，而洗刷消毒
實用哺乳動物細胞培養手冊（下）
細胞培養所用玻璃及塑料制品的清洗與消毒 清洗 在組織細胞培養中，體外細胞對任何有害物質都非常敏感。微生物產品附帶雜物，上次細胞殘留物及非營養成分的化學物質，均能影響培養細胞的生長。因此對新使用玻璃器 皿和重新使用的培養器皿都要嚴格徹底的清洗，且要根據器皿的組成材料不同，選擇不同 的清
實用哺乳動物細胞培養手冊（中）
細胞培養環境 1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受 其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響， 要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌 操作區設在室內較少走動的內側，常規操作
實用哺乳動物細胞培養手冊（三）
細胞培養環境1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受 其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響， 要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌 操作區設在室內較少走動的內側，常規操作
實用哺乳動物細胞培養手冊（下）
細胞培養所用玻璃及塑料制品的清洗與消毒清洗在組織細胞培養中，體外細胞對任何有害物質都非常敏感。微生物產品附帶雜物，上次細胞殘留物及非營養成分的化學物質，均能影響培養細胞的生長。因此對新使用玻璃器 皿和重新使用的培養器皿都要嚴格徹底的清洗，且要根據器皿的組成材料不同，選擇不同 的清洗方法。玻璃器皿的清
實用哺乳動物細胞培養手冊（五）
細胞培養基本概念細胞培養是指從體內組織取出細胞在體外模擬體內環境下，使其生長繁殖，并維持其結 構和功能的一種培養技術。細胞培養的培養物可以是單個細胞，也可以是細胞群。細胞培養目的與用途1、科學研究：藥物研究開發與基礎研究 藥物研究與開發(1) 新藥篩選：如化學合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定
哺乳動物細胞的細胞培養溫度
維持培養細胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度；不同種類的細胞對培養溫度要求也不同。人體細胞培養的標準溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能
實用哺乳動物細胞培養手冊（一）
細胞培養所用玻璃及塑料制品的清洗與消毒清洗在組織細胞培養中，體外細胞對任何有害物質都非常敏感。微生物產品附帶雜物，上次細胞殘留物及非營養成分的化學物質，均能影響培養細胞的生長。因此對新使用玻璃器 皿和重新使用的培養器皿都要嚴格徹底的清洗，且要根據器皿的組成材料不同，選擇不同 的清洗方法。玻璃器皿的清
哺乳動物細胞培養過程－－培養條件
哺乳動物細胞培養過程 & 培養條件導語：哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取，原代培養，傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分為細胞株培養和細胞系培養。哺乳動物細胞培養過程哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取，原代培養，傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分為細胞株培養和細胞系培養。如下對各
實用哺乳動物細胞培養手冊（中）
細胞培養環境1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受 其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響， 要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌 操作區設在室內較少走動的內側，常規
實用哺乳動物細胞培養手冊（上）
細胞培養基本概念細胞培養是指從體內組織取出細胞在體外模擬體內環境下，使其生長繁殖，并維持其結 構和功能的一種培養技術。細胞培養的培養物可以是單個細胞，也可以是細胞群。細胞培養目的與用途1、科學研究：藥物研究開發與基礎研究 藥物研究與開發(1) 新藥篩選：如化學合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定
實用哺乳動物細胞培養手冊（六）
緩沖系統大多數細胞所需 pH 在 7.2 - 7.4。但是，細胞培養最適 pH 值隨培養的細胞種類不同而 不同。成纖維細胞喜歡較高 pH (7.4 - 7.7), 而傳代轉化細胞系則需要偏酸 pH (7.0 - 7.4)。 由于多數培養液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與 CO2 體系進行緩沖，因
哺乳動物細胞培養過程－－培養條件
哺乳動物細胞培養過程哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取，原代培養，傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分為細胞株培養和細胞系培養。如下對各個過程進行簡述：原代培養：從動物機體取出組織后切碎，經過各種酶（常用胰蛋白酶），螯合劑（常用EDTA）結合機械方法（吸液管反復吸吹）處理，分散成單細胞，置于
實用哺乳動物細胞培養手冊（中）
細胞培養環境1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受 其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響， 要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌 操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于
實用哺乳動物細胞培養手冊（二）
消化液：分離組織和分散細胞。常用的有胰蛋白酶和二乙胺四乙酸二鈉 (EDTA) 兩種溶液。可以 單獨使用，也可以混合使用。（1）胰蛋白酶溶液胰蛋白酶（簡稱胰酶）是一種黃白色粉末，易潮解，應放置冷暗干燥處保存。目前應用的胰蛋白酶主要來自牛或豬的胰腺。胰酶的主要作用是使細胞間的蛋白質水解，使細胞相
實用哺乳動物細胞培養手冊（四）
細胞培養無菌操作基本技術無菌操作技術分為三個部分：工作環境及表面的處理，細胞培養所用玻璃及塑料制品的處理及培養液與培養細胞的處理。工作環境的處理 使用層流超凈工作臺是最經濟有效的手段。超凈工作臺正常工作時，向下的氣流可阻擋外界空氣污染物進入超凈臺。（1）實驗前，無菌室及無菌操作臺用紫外燈照射 30-
哺乳動物細胞培養有沒有厭氧的
哪有厭氧的哺乳動物啊開放培養時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中,此濃度的CO2與培養液PH緩沖體系中的NaHCO3濃度相平衡,二氧化碳既是細胞代謝產物,也是細胞生長繁殖所需成分,它在細胞培養中的主要作用在于維持培養基的pH值
哺乳動物原代細胞培養的β半乳糖苷酶（熒光測定）
β半乳糖苷酶：β半乳糖苷酶由大腸桿菌lacZ基因編碼，可催化半乳糖苷水解。最大優勢是易于用免疫組織化學法觀測其原位表達，是最常用的監測轉染率的報道基因之一。以鄰—硝基苯—β—D—半乳吡喃糖苷(ONPG)為底物可用標準的比色法檢測酶活性，其檢測動力學范圍為6個數量級。氯酚紅—β—D—半乳吡喃糖苷(CP
哺乳動物原代細胞培養的β半乳糖苷酶（分光光度測定）
試劑和器材：?1.反應緩沖液：5g/L聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）、0.05mol/L檸檬酸鈉-磷酸鹽緩沖液，pH4.3；2.終止液：0.25%甘氨酸-NaOH，pH10；3.底物：6mmol/L對硝基苯基-β-半乳呋喃糖苷溶于緩沖溶液中；4.微量離心機，帶1.5—2.0ml小管；
細胞培養實驗——懸浮細胞培養
實驗材料凍存 HeLa S3 細胞試劑、試劑盒70% 乙醇完全 MEM-10胰酶／EDTA儀器、耗材旋轉瓶完全培養基-525 cm2 組織培養瓶C02 培養箱Sorvall H-6000A 轉子100 ml 或 200 ml 通氣旋轉瓶和帶濾膜的瓶蓋實驗步驟1. 將含有凍存 HeLa S3 細胞的安
航運激增威脅北極哺乳動物
研究人員希望，他們的發現將促成破壞性更小的航線。圖片來源：PNAS ?對于鯨和北極熊來說，融化的海冰絕不僅僅意味著簡單的棲息地喪失。一項最新研究表明，開放水域季節變長導致的北極航運量劇增，可能使在北極棲息的眾多海洋哺乳動物處于危險境地。 隨著夏季海冰覆蓋量減少，諸如西北航道等航線在較溫
哺乳動物可通過腸道吸氧
? ?近日，美國辛辛那提兒童醫院研究人員證明，通過直腸提供氧氣或含氧液體，能夠幫助小鼠等實驗動物在低氧條件下存活。研究人員認為，該方法可能提供一個挽救呼吸衰竭的危重患者的新范式。相關研究結果發表于5月14日《醫學》。 未參與該研究的美國科羅拉多大學胃腸病學家Sean Colgan表示：“這看起來
哺乳動物－DNA－的快速分離
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 根據本方案制備的哺乳動物 DNA 約 20~50 kb，適于作 PCR 反應的模板。DNA 產量在 0.5 到 3.0 μg/mg 組織之間變化，或者是 5~15 μg/300μl 全血。
哺乳動物組織的勻漿實驗
基本方案 附加方案：從組織勻漿液中去除黏蛋白 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 對于細胞內蛋白的純化和特性分析，重要的是選擇一種有效的方法來破碎細胞或組織，使蛋白迅速地
哺乳動物－DNA－的快速分離
實驗方法原理 根據本方案制備的哺乳動物 DNA 約 20~50 kb，適于作 PCR 反應的模板。DNA 產量在 0.5 到 3.0 μg/mg 組織之間變化，或者是 5~15 μg/300μl 全血。實驗材料 無 DNase 的 RNase蛋白酶 K哺乳動物組織或全血試劑、試劑盒 細胞裂解緩沖液乙
哺乳動物組織的勻漿實驗
實驗方法原理 對于細胞內蛋白的純化和特性分析，重要的是選擇一種有效的方法來破碎細胞或組織，使蛋白迅速地從胞內相對隔離的空間中釋放到緩沖液中，而該緩沖液應對所研究的蛋白的生物活性沒有影響。廣泛使用的破碎軟組織的方法之一是勻漿。蛋白酶從其他的細胞區隔中釋放出來的風險很小。可以通過在勻漿緩沖液中加人蛋白酶
哺乳動物－DNA－的快速分離
根據本方案制備的哺乳動物 DNA 約 20~50 kb，適于作 PCR 反應的模板。DNA 產量在 0.5 到 3.0 μg/mg 組織之間變化，或者是 5~15 μg/300μl 全血。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理根據本方案制備的哺乳動物 DNA 約 20~50 k
細胞培養技術的細胞培養方式
高等生物是由多細胞構成的整體，在整體條件下要研究單個細胞或某一群細胞在體內（in vivo）的功能活動是十分困難的。但是如果把活細胞拿到體外（in vitro）培養進行觀察和研究，則要方便得多。活細胞離體后要在一定的生理條件下才能存活和進行生理活動，特別是高等動植物細胞要求的生存條件極其嚴格，稍有不
細胞培養實驗——貼壁細胞培養
實驗材料凍存細胞試劑、試劑盒70% 乙醇PBS胰酶／EDTA儀器、耗材25 cm2 和 150 cm2 組織培養瓶CO2 培養箱實驗步驟1. 將含有凍存細胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解凍。2. 用 70% 乙醇對安瓿的頂端進行消毒，打開安瓿，用吸管將細胞轉移到含有 5 ml 起始培養基的 25 cm
動物細胞培養——細胞培養介紹
實驗方法原理目的細胞培養的評判性檢查。應用檢查常規維持的一致性；在復蘇、傳代、凍存前培養狀況的評估；對新的或實驗性情形反應的評估；確認明顯的污染物。訓練目標熟悉不同類型和不同密度的細胞培養的外觀；數碼或膠片相機的使用；滅菌物品和污染物間的區別，健康的和不健康的培養物間的區別；培養物生長階段的評估。監