RNA免疫沉淀rPCR方法進行體內分離核糖核蛋白復合體實驗
RNA 免疫沉淀-隨機聚合鏈反應方法可用來鑒定細胞內 RNP 復合物中的 RNA 組分。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理RNA 免疫沉淀-隨機聚合鏈反應方法可用來鑒定細胞內 RNP 復合物中的 RNA 組分。實驗材料載體酵母 tRNARQ1 DNA 酶糖原小牛腸堿性磷酸酶T4 DNA 連接酶JMJ09 感受態細菌試劑、試劑盒PBSNET-2 緩沖液RNase 抑制劑酚氯仿異戊醇乙酸鈉乙醇M-MLV 反轉錄酶反轉錄緩沖液通用引物-dN6RNase H電泳緩沖液非變性瓊脂糖凝膠上樣緩沖液EcoR Ⅰ限制性內切核酸酶EDTA儀器、耗材蛋白 A 瓊脂糖凝膠無 RNA 酶離心柱PCR 擴增體系Promega PCR 試劑盒pGEM-7Z 質粒載體Falcon 2059 聚丙烯管SOC 培養基LB 平板培養基fmol DNA 循環測序系統微型凝膠水平電泳儀紫外透射儀PCR 擴增儀高速低溫離心機低溫微型離心機臺式低......閱讀全文
RNA干涉(RNA－Interference，RNAi)（2）
早期的 RNAi 技術可用在研究與胚胎發育相關基因的功能上，但是由于細胞分裂造成 dsRNA 的稀釋，使得這種方法在研究成體的基因功能時有一定的局限性。為彌補早期 RNAi 技術的不足，Tavernarakis 等將 RNAi 技術做了一些改進及更動，將目的基因之標的序列以反向重復的方式，由
RNA干擾技術(RNA－interference，RNAi)
1995年，康乃爾大學的Su Guo博士在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲（C. elegans）中的par-1基因時，發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義RNA技術特異性地阻斷上述基因的表達，而同時在對照實驗中給線蟲注射正義RNA（sense RNA）以期觀察到基因表達的增強。但得到的結果
RNA干涉(RNA－Interference，RNAi)（1）
基因沉默（gene silencing）是生物體內特定基因由于種種原因不表達的遺傳現象。一方面，基因沉默是生物遺傳操作創造新的遺傳修飾生物（genetically modified organisms）的障礙，另一方面，它又是植物抵抗外來核酸入侵（如病毒）的一種反應，為植物抗病毒的遺傳育
RNA提取時RNA降解原因
1 ) 新鮮細胞： 裂解液的量不足，使得裂解不充分。 2 ) 新鮮組織： 某些含有內源性核酸酶的樣品，很難避免RNA酶的降解，建議采用的方法為在液氮條件下將組織研碎，并且，勻漿時采用更多的裂解液。 3 ) 冷凍樣品： 樣品取材后應該迅速置于液氮中冷凍存放，然后轉移到-70℃冰箱存
RNA提取心得（組織RNA提取和培養細胞的RNA提取）
一.組織RNA提取 1.最好新鮮組織，這樣RNA提取的效果比較好，這是肯定的。 2. 如果不是新鮮的（最好在半年之內，-80℃或者液氮中凍存的）組織，注意不要反復凍融，從冰凍狀態拿到0-4℃，注意不要拿到常溫，待組織解凍后，用 DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織，稱重后，放到預冷的勻漿器中，然后
RNA干擾相關知識RNARITS）
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing（RITS）：是一種組織染色質變型的復合物。RITS復合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白質，通過結合到異染色質的基因池上來促使異染色質上基因的沉默。
RNA干擾相關知識RNARISC
RNA-induced silencing complex（RISC）：一種RNA-蛋白質復合物，通過與目標mRNA完全或者部分的互補配對來實施切割或者翻譯抑制功能。SiRNA組裝siRISC，miRNA組裝miRISC。RISCs（無論siRISC還是miRISC）包括兩種類型：切割型和不切割型。
反義技術——RNA干擾（RNA－interference，RNAi）
最近由于RNA干擾（RNA interference，RNAi）的發現使反義領域的研究增多。這種自然發生的現象最早是在秀麗線蟲中發現的（1），是序列特異性地使轉錄后的基因沉默的有力機制。由于最近兩年在RNAi領域取得的進步，已經有許多這方面的綜述發表（2-4）。RNA干擾是由長的雙鏈 RNA
RNA分離與分析實驗_分離RNA
實驗材料標記細胞試劑、試劑盒乙酸緩沖液儀器、耗材漩渦器實驗步驟1. 收獲標記細胞。2. 小心處置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸緩沖液懸浮細胞沉淀，每 1 ml 壓積細胞用 10 ml 緩沖液。3. 于室溫用漩渦器振蕩裂解細胞。4. 加等體積的水飽和酚，充分混勻，于 60
RNA標記
RNA labeling?(Amersham Pharmacia)For the generation of radiolabelled, single stranded RNA for use as hybridization probes??32P-pCp 3' End-labeling
RNA－Electrophoresis
Electrophoresis through agarose or polyacrylamide gels is the standard way to separate, identify and purify nucleic acid fragments. The location of th
Quantitating－RNA
RNA quantitation is an important and necessary step prior to most RNA analysis methods. Here we discuss three common methods used to quantitate RNA an
RNA－剪接
中文名稱RNA 剪接英文名稱RNA splicing定 義在真核細胞核中從RNA初始轉錄物切除內含子，連接外顯子形成成熟的mRNA的過程。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞遺傳（二級學科）
RNA提取
RNA提取（主要內容如下）Tips for Handing RNA?Total RNA IsolationmRNA IsolationrRNA IsolationOthersQ & A posted in the Method Forum??Basic Procedures for Handing
RNA電泳
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RNA電泳
RNA Gel (Crawford Lab)Gel Electrophoresis of RNA (Beverly Faulkner-Jones)great tips on RNA gel electrophoresis.Northern Gel and ?TransferUsing glyoxal
RNA－電泳
①電泳RNA 所用器械如制膠的模具、梳子、電泳槽等用肥皂粉洗干凈后用雙蒸水沖洗二遍后在室溫晾干備用。②用新的1XTBE 配制1. 2 %瓊脂糖凝膠,倒膠時溴化乙錠(E直接加入凝膠中。③制備好的瓊脂糖凝膠板放入電泳槽后再加入經高壓滅菌過的1XTBE ,液面只能剛好同膠面平齊,緩沖液不要淹過膠面。④點樣
指導RNA
中文名稱指導RNA英文名稱guide RNA;gRNA定 義一種小分子RNA，約含60～80個核苷酸，在RNA編輯中起模板作用。其功能是提供核苷酸插入或刪除的信息。由小環DNA及大環DNA編碼的指導RNA均帶有編輯區的序列信息，可介導編輯過程。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），基因表達與調
RNA標記
RNA標記是將標記物（如放射性同位素、熒光素或酶）共價地連接到RNA，通過檢測標記物，進而實現對RNA鑒別和檢測的目的。RNA標記在分子探針領域應用廣泛，在疾病診斷方面也很有前景。 理想的RNA標記方法應符合以下要求： 1. ?操作簡單，靈敏度高 2. ?不影響堿基配對的特異性 3. ?不影響RN
RNA降解
新鮮細胞：如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如? 果將裂解液直接加入培養皿中裂解細胞，一定要使裂解液能覆蓋住細胞。 2. 新鮮組織：某些富含內源核酸酶的樣品(如肝臟，胸腺等)，即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是：在液氮條件下將組織
RNA干擾相關知識Small－interfering－RNA（siRNA）
Small interfering RNA（siRNA）：是一種小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成員，激發與之互補的目標mRNA的沉默。
關于小干擾RNA的RNA激活介紹
已經發現dsRNA還可以激活基因表達，這種機制被稱為“小RNA誘導的基因激活”或RNAa。已經顯示靶向基因啟動子的dsRNA誘導相關基因的有效轉錄激活。使用合成的dsRNA在人細胞中證明RNAa，稱為“小活化RNA”（saRNA）。尚不清楚RNAa是否在其他生物體中是保守的。
純化RNA實驗——從組織中純化總RNA
實驗材料組織試劑、試劑盒RNA 抽提緩沖液氯仿實驗步驟1. 從動物取下組織，直接進行第 2 步或在液氮中快速冷凍新鮮解剖的組織。冷凍后的組織可以貯存在 -70℃。2. 組織（0.05~0.3 g）在 2.0 ml RNA 抽提緩沖液中勻漿。3. 每管加 200 μl 氯仿，混合均勻，冰浴 15 分鐘
RNA干擾（RNA－interference，RNAi）基礎知識(3)
SiRNASmall interfering RNA (siRNA)：是一種小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成員，激發與之互補的目標mRNA的沉默。ShRNAshRNA 短發夾RNAshRNA
Science聚焦：球形RNA讓RNA療法重獲新生
幾十年來，RNA療法在治療遺傳疾病的道路上走得并不順遂。不過，隨著新型RNA（球形核酸SNA）在人體試驗中取得成功，這一領域似乎煥發出新的活力。Science網站特別撰文介紹了這項重要突破。 RNA療法一般是用反義RNA破壞疾病相關蛋白的生產。在美國化學學會(ACS)上周的一次會議上，研究人員
什么是RNA？RNA的作用是什么？
核糖核酸（縮寫為RNA，即Ribonucleic Acid），存在于生物細胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和堿基構成。RNA的堿基主要有4種，即A（腺嘌呤）、G（鳥嘌呤）、C（胞嘧啶）、U（尿嘧啶），其中，U（尿
RNA干擾（RNA－interference，RNAi）基礎知識(2)
1RNA i的發現RNA i是在研究秀麗新小桿線蟲（C. elegans）反義RNA （antisenseRNA ）的過程中發現的，由dsRNA 介導的同源RNA 降解過程。1995年，Guo等發現注射正義RNA （senseRNA ）和反義RNA 均能有效并特異性地抑制秀麗新小桿線蟲par
RNA干擾（RNA－interference，RNAi）基礎知識(1)
Rnai最近由于RNA 干擾（RNA interference，RNA i）的發現使反義領域的研究增多。這種自然發生的現象最早是在秀麗線蟲中發現的（1），是序列特異性地使轉錄后的基因沉默的有力機制。由于最近兩年在 RNA i領域取得的進步，已經有許多這方面的綜述發表（2-4）。RNA 干擾是
什么叫做外源性RNA和內源性RNA
核糖核酸（縮寫為RNA，即RibonucleicAcid），存在于生物細胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和堿基構成。RNA的堿基主要有4種，即A腺嘌呤、G鳥嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶，其中，U（尿嘧啶）取代了DNA
RNA－Isolation－Protocol
RNA Isolation Protocol(Revised 5-15-2003)Stabilize RNAStart with 15 ml E. coli Culture containing 7.5* 109?cells (OD600= 0.2 Dilute cells or scale up)