頑拗性植物組織的蛋白質組學研究(苯酚法提取蛋白質)
1. 前言提取蛋白質是蛋白質組學研究的第一步。植物組織的蛋白質含量較低,并且存在多種非蛋白質成分,如細胞壁及貯藏多糖、脂質和酚類化合物,使蛋白質的提取難度增大 。植物蛋白質的可溶性與它們的細胞內定位關系密切,傳統的蛋白質提取方法是用水合緩沖液、去垢劑或直接沉淀法 [1] 。除了普遍使用的 TCA/丙酮沉淀法, Hurkman 和 Tanaka 在 1986 年報道了一種先用苯酚提取然后用甲醇/乙酸銨沉淀的蛋白質提取方法,能有效去除核酸干擾,因為核酸可以與蛋白質相互作用,使雙向電泳背景深,分辨率低。苯酚提取法首先是應用于純化碳水化合物(去除蛋白質),然后是用于純化核酸。對于分子生物學家來講,酚抽提是一種從核酸溶液中去除蛋白質的首選方法。苯酚是最簡單的芳香醇,芳香環上帶有一個極性羥基,弱酸性,并且有腐蝕性和毒性。苯酚與水部分混溶:當達到飽和時,水相含有大約 7% 的苯酚,有機相含有大約 28% 的水。苯酚主要是通過氫鍵和蛋白......閱讀全文
頑拗性植物組織的蛋白質組學研究(苯酚法提取蛋白質)
實驗材料植物組織試劑、試劑盒苯酚提取緩沖液沉淀液等電聚焦緩沖液儀器、耗材低溫粉碎機實驗步驟3.1 蛋白質提取( 1 ) 新鮮植物組織在液氮中冷凍,然后在自動低溫粉碎機中預先冷卻的鋼杯中將材料研磨成細碎的粉末(見注釋 4) 。( 2 ) 在一個 15 ml 的離心管(falcon? tube) 中加入
頑拗性植物組織的蛋白質組學研究(苯酚法提取蛋白質...
頑拗性植物組織的蛋白質組學研究(苯酚法提取蛋白質)實驗實驗材料?植物組織試劑、試劑盒?苯酚提取緩沖液沉淀液等電聚焦緩沖液儀器、耗材?低溫粉碎機實驗步驟 3.1 蛋白質提取( 1 ) 新鮮植物組織在液氮中冷凍,然后在自動低溫粉碎機中預先冷卻的鋼杯中將材料研磨成細碎的粉末(見注釋 4) 。( 2 ) 在
頑拗性植物組織的蛋白質組學研究(苯酚法提取蛋白質)
1. 前言提取蛋白質是蛋白質組學研究的第一步。植物組織的蛋白質含量較低,并且存在多種非蛋白質成分,如細胞壁及貯藏多糖、脂質和酚類化合物,使蛋白質的提取難度增大 。植物蛋白質的可溶性與它們的細胞內定位關系密切,傳統的蛋白質提取方法是用水合緩沖液、去垢劑或直接沉淀法 [1] 。除了普遍使用的 TCA
頑拗性植物組織的蛋白質組學研究實驗
頑拗性植物組織的蛋白質組學研究(苯酚法提取蛋白質)實驗材料植物組織 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒苯酚 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
版納植物園頑拗性種子生物學研究獲綜合進展
龍腦香科瀕危植物多毛坡壘(Hopea mollissima C. Y. Wu)的頑拗性種子萌發 西雙版納是我國少有的幾個熱帶地區之一,同時又是我國植物種類最多、種植資源最豐富的地區,豐富的植物資源使其享有“植物王國”的美譽。然而,由于數十年來不合理的開發利用, 物種受
植物組織蛋白質提取方法
1、植物組織蛋白質提取方法(summer)1、根據樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,可根據材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時)。3、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清
骨組織的蛋白質組學研究成果
??? 鄒漢法近年來廣泛開展了蛋白質組學和多肽組學新技術新方法的研究,近兩年來相關研究成果已在Mol.? Cel.? Proteomics(IF? 9.876),Angew.? Chem.? Int.? Ed.(IF? 9.596),Nucleic? Acids? Research(IF? 7.
植物組織蛋白質提取用什么方法
一、植物組織蛋白質提取方法1、根據樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,可根據材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時)。3、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液,樣品制備完成
植物組織蛋白質用什么方法提取
植物組織蛋白質提取方法三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨葉片2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過夜,然后離心(4℃8000rpm以上1小時)棄上清。3、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上1小時),然后真空干燥沉淀,備用。
蛋白質組,蛋白質組學及研究技術路線
基因組(genome)包含的遺傳信息經轉錄產生mRNA,一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的mRNA稱為轉錄子組(transcriptome)。很顯然,不同細胞在不同生理或病理狀態下轉錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經翻譯產生蛋白質,一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類
蛋白質組,蛋白質組學及研究技術路線
基因組(genome)包含的遺傳信息經轉錄產生mRNA,一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的mRNA稱為轉錄子組(transcriptome)。很顯然,不同細胞在不同生理或病理狀態下轉錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經翻譯產生蛋白質,一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類
蛋白質組學研究技術
可以說,蛋白質組學的發展既是技術所推動的也是受技術限制的。蛋白質組學研究成功與否,很大程度上取決于其技術方法水平的高低。蛋白質研究技術遠比基因技術復雜和困難。不僅氨基酸殘基種類遠多于核苷酸殘基(20/ 4), 而且蛋白質有著復雜的翻譯后修飾,如磷酸化和糖基化等,給分離和分析蛋白質帶來很多困難。此外,
蛋白質組學的研究內容
主要有兩方面,一是結構蛋白質組學,二是功能蛋白質組學。其研究前沿大致分為三個方面: ①針對有關基因組或轉錄組數據庫的生物體或組織細胞,建立其蛋白質組或亞蛋白質組及其蛋白質組連鎖群,即組成性蛋白質組學。 ②以重要生命過程或人類重大疾病為對象,進行重要生理病理體系或過程的局部蛋白質組或比較蛋白質組學
離心機用于植物組織蛋白質的提取
一、植物組織蛋白質提取方法(summer) 1、根據樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,可根據材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。 2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時)。 3、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm
蛋白質組學在植物科學研究中的應用
1 植物群體遺傳蛋白質組學 1.l 遺傳多樣性蛋白質研究基于基因組學的一些遺傳標記,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen
定量蛋白質組學的研究內容
1.蛋白質鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結合Western等技術,利用蛋白質芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術對蛋白質進行鑒定研究。 2.翻譯后修飾:很多mRNA表達產生的蛋白質要經歷翻譯后修飾如磷酸化,糖基化,酶原激活等。翻譯后修飾是蛋白質調節功能的重要方式,因此對蛋白質翻譯后修飾的研究對
蛋白質組學研究的研究意義和背景
隨著人類基因組計劃的實施和推進,生命科學研究已進入了后基因組時代。在這個時代,生命科學的主要研究對象是功能基因組學,包括結構基因組研究和蛋白質組研究等。盡管已有多個物種的基因組被測序,但在這些基因組中通常有一半以上基因的功能是未知的。功能基因組中所采用的策略,如基因芯片、基因表達序列分析(Seria
蛋白質組學研究-可投哪些期刊?
????蛋白質作為功能的直接行使者,已經被科研工作這廣泛應用于不同領域中,目前蛋白組學有很多優秀的科研成果,在各個領域及期刊上發表,其中也不乏CNS在內的頂級期刊。那我們的蛋白組學文章可以投哪些期刊呢?了解已發表文章的情況可以幫助我們很好的解決這個問題。這里,我們以“Proteomics”為關鍵詞,
蛋白質組與蛋白質組學簡介1
一、蛋白質組概念:一個細胞、一個組織或一個機體全部基因所表達的全部蛋白質。 二、蛋白質組學研究范疇 1.蛋白質和蛋白質間 2.蛋白質和核酸之間 3.蛋白質及其組成質點的分離、分析、鑒定 4.蛋白質結構分析 5.生理、病理或不同發育狀態下蛋白質組表
蛋白質組與蛋白質組學簡介2
3 甲基化干擾實驗用來檢測蛋白質的結合位點。甲基化修飾的DNA探針可以干擾蛋白質的結合。結合位點上未被修飾的DNA片段才能與蛋白結合,然后將DNA從被修飾的堿基處切割,電泳分離,結合蛋白的DNA在結合位點上不能被修飾,不能切斷,可確定結合位點的位置。 4 Dnase I 足紋分析 蛋白
蛋白質組學研究的策略和范圍
蛋白質組學一經出現,就有兩種研究策略。一種可稱為“竭澤法”,即采用高通量的蛋白質組研究技術分析生物體內盡可能多乃至接近所有的蛋白質,這種觀點從大規模、系統性的角度來看待蛋白質組學,也更符合蛋白質組學的本質。但是,由于蛋白質表達隨空間和時間不斷變化,要分析生物體內所有的蛋白質是一個難以實現的目標。另一
蛋白質組學揭示植物干旱脅迫的分子機制
?Significant and unique changes in phosphorylation levels of four leaf phosphoproteins in two apple rootstock genotypes under drought stress.干旱脅迫對
植物蛋白質的提取方法
植物蛋白質的提取方法基本上有這幾種:鹽析法、有機溶劑法和等電點法。1、鹽析法原理:鹽析法是指在藥物溶液中加入大量的無機鹽,使某些高分子物質的溶解度降低沉淀析出,而與其他成分分離的方法。鹽析法主要用于蛋白質的分離純化。常作鹽析的無機鹽有硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。2、有機溶劑法原理:機溶劑引起蛋白質沉淀
安捷倫科技資助定量蛋白質組學研究
安捷倫科技通過都柏林國立大學 Newman 獎學金計劃 資助定量蛋白質組學研究 2010 年 5 月 12 日,加利福尼亞州圣克拉拉市和愛爾蘭都柏林市 — 安捷倫科技公司(紐約證交所:A)和都柏林國立大學(University College Dublin, UCD)今日宣布 Ben
大連化物所蛋白質組學研究取得進展
蛋白質甲基化是一種非常重要的翻譯后修飾現象,其甲基供體為S-腺苷甲硫氨酸(SAM)。由于甲基化可發生在氨基酸殘基的N-,O-和S-中心,并且N-中心甲基化還存在不同狀態,同時甲基化對分離行為影響非常細微,限制了對蛋白質甲基化組的解析。常規基于抗體的研究策略僅捕獲了部分N-中心甲基化的信息。中國科
外泌體及其蛋白質組學研究
外泌體是什么? 外泌體(Exosome),是一種能被大多數細胞分泌的微小膜泡,具有脂質雙層膜結構,直徑大約40-200 nm。外泌體存在于體液中,包括血液、唾液、尿液和母乳等,不同組織來源的外泌體在內容物組成和功能方面存在差異,這種差異受到細胞外基質和微環境的動態調控。越來越多的證據表明,宿主
蛋白質組學研究系列儀器及軟件
人體內真正發揮作用的是蛋白質,蛋白質扮演著構筑生命大廈的“磚塊”角色,隨著破譯生命密碼的人類基因組計劃進入尾聲,一個以蛋白質和藥物基因學為研究重點的后基因組時代已經拉開序幕,蛋白質將是今后的重點研究方向之一。然而,蛋白質的分離和鑒定非常費時,目前測定蛋白質的技術遠遠落后于破譯基因組的工具,最好的實驗
植物蛋白質組學和糖基化(二)
4. 注釋( 1 ) 每個實驗均使用新鮮的 3 mol/L 甲醇- HCl 和硅烷化試劑。( 2 ) 要仔細識別蛋白質印跡,因為 WGA 既能識別 N-糖苷的 GlcNAc,也能識別 O-GlcNAc。( 3 ) 用于在硝酸纖維素印跡膜上封閉結合位點的溶液應避免糖蛋白污染。所以我們建議在這一步驟中使
植物蛋白質組學和糖基化實驗
實驗材料鏈霉親和素-過氧化物酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? 牛胰核糖核酸酶 B ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
植物蛋白質組學和糖基化(一)
?1. 前言與其他真核細胞一樣,植物細胞中,糖基化通常發生在分泌蛋白質上,雖然在細胞質蛋白和核蛋白上也發現一些糖基化反應。根據寡糖部分和蛋白質骨架之間的連接方式,可將糖基化分為兩種類型:N -糖基化和 O-糖基化。植物中 N-糖基化研究最多。1.1 N-糖基化與其他真核細胞一樣,在植物細胞中,N-糖