熒光原位雜交實驗步驟1)探針變性將探針在75oC恒溫水浴中溫育5min,立即置0oC,5~10min,使雙鏈DNA探針變性。2)標本變性①將制備好的染色體玻片標本于50oC培養箱中烤片2~3h。(經Giemsa染色的標本需預先在固定液中退色后再烤片)。 ②取出玻片標本,將其浸在70~75oC的體積分數70%甲酰胺/2×SSC的變性液中變性2~3min。 ③立即按順序將標本經體積分數70%、體積分數90%和體積分數100%冰乙醇系列脫水,每次5min,然后空氣干燥。3)雜交將已變性或預退火的DNA探針10μL 滴于已變性并脫水的玻片標本上,蓋上18×18蓋玻片,用Parafilm封片,置于潮濕暗盒中37oC雜交(約15~17h)。由于雜交液較少,而且雜交溫度較高,持續時間又長,因......閱讀全文
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究,其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩定的雙鏈區,形成雜交的雙鏈。自此以后,由于分子生物學技術的迅猛發展,特別是70年代末到80年代初,分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功,核酸自動
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究,其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩定的雙鏈區,形成雜交的雙鏈。自此以后,由于分子生物學技術的迅猛發展,特別是70年代末到80年代初,分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功,核酸自動
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展,新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上,一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展,新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上,一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN
一、目的本實驗的目的是學會原位雜交的使用方法。了解各種原位雜交的基本原理和優缺點。二、原理原位雜交組化(簡稱原位雜交,in situ hybridization histochemistry;ISHH)屬于分子雜交的一種,是一種應用標記探針與組織細胞中的待測核酸雜交,再應用標記物相關的
DNA合成儀的誕生使制造寡核苷酸探針成為可能,與上述探針不同的是寡核苷酸探針不是克隆性DNA探針,它是由DNA合成儀依照所需雜交的靶核苷酸序列合成的。具有制造方便,價格低廉的優點,也可進行放射性與非放射性標記,但其特異性不如克隆性探針強,亦不如其雜交信號高。 原位雜交組織化學技術在近20年的發展
一、Southern雜交 Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟: (1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。 (2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。&
六、核酸分子雜交實驗因素的優化 (一)探針的選擇 根據不同的雜交實驗要求,應選擇不同的核酸探針。在大多數情況下,可以選擇克隆的DNA或cDNA雙鏈探針。但是在有些情況下,必須選用其它類型的探針如寡核苷酸探針和RNA探針。例如,在檢測靶序列上的單個堿基改變時應選用寡核苷酸探針,在檢測單鏈靶序列時應
六、核酸分子雜交實驗因素的優化 (一)探針的選擇 根據不同的雜交實驗要求,應選擇不同的核酸探針。在大多數情況下,可以選擇克隆的DNA或cDNA雙鏈探針。但是在有些情況下,必須選用其它類型的探針如寡核苷酸探針和RNA探針。例如,在檢測靶序列上的單個堿基改變時應選用寡核苷酸探針,在檢測單鏈靶序列時應
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究,其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩定的雙鏈區,形成雜交的雙鏈。自此以后,由于分子生物學技術的迅猛發展,特別是70年代末到80年代初,分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功,核酸自動
一、雜交通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
一、目的 本實驗的目的是學會原位雜交的使用方法。了解各種原位雜交的基本原理和優缺點。 二、原理 原位雜交組化(簡稱原位雜交,in situ hybridization histochemistry;ISHH)屬于分子雜交的一種,是一種應用標記探針與組織細胞中的待測核酸雜交,再應用標記物相關
2013年10月17日,袁隆平一行來到湖南省永州市零陵區富家橋鎮,查看萬畝示范田超級雜交稻的生長情況。 10月16日是第33個“世界糧食日”。據統計,目前全球仍有8.42億人長期處于饑餓之中,相當于每8個人中就有1個人在遭受饑餓的威脅。 與此同時,相關數據顯示,目前全世界種植水
如前所述,雜交前的準備只是為雜交的成功奠定基礎,要獲得滿意的實驗結果,在雜交這一實驗過程中還須注意以下的環節。1.探針的濃度 很難事先確定每一種實驗探針的濃度,但要掌握一個原則,即探針濃度必須給予該實驗zui大的信/噪比值。背景染色的高低也與探針濃度有關。根據國內外實驗工作者的經驗,認為zui佳原
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中最常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
原位雜交技術應用于染色體、細胞和組織切片等樣品中進行核酸特異性檢測,與免疫組化技術的結合應用,能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓撲信息結合起來。1969年Pardue和Gall將放射性標記的探針直接應用于純化核酸的雜交,此后得益于分子克隆技術的發展,及不同探針標記系統和檢測系統
原位雜交技術應用于染色體、細胞和組織切片等樣品中進行核酸特異性檢測,與免疫組化技術的結合應用,能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓撲信息結合起來。1969年Pardue和Gall將放射性標記的探針直接應用于純化核酸的雜交,此后得益于分子克隆技術的發展,及不同探針標記系統和檢測系統
定義 四維核酸雜交技術[ 1 ](4DH),即在傳統核酸雜交三維空間(XYZ:表征DNA片段的長度、堿基組成和堿基的排列)的基礎上引入溫度作為第四位參數所構成的四維溫度空間平臺上建立的核酸雜交技術。 背景 基因組(genome)是指人類細胞中所有遺傳信息的總和。基因組信息
Southern 雜交獲得的信號強度取決于若干因素,包括固定的 DNA 與探針互補的比例、探針的大小及特異活性以及轉移到膜上的基因組 DNA 的數量。在最佳條件下,這種方法的敏感度足以檢測到與 32P 標記的高度特異(>109 cpm/μg)的探針互補的<0.1 pg
定義 四維核酸雜交技術[ 1 ](4DH),即在傳統核酸雜交三維空間(XYZ:表征DNA片段的長度、堿基組成和堿基的排列)的基礎上引入溫度作為第四位參數所構成的四維溫度空間平臺上建立的核酸雜交技術。 背景 基因組(genome)是指人類細胞中所有遺傳信息的總和。基因組信息是由脫氧
定義 四維核酸雜交技術[ 1 ](4DH),即在傳統核酸雜交三維空間(XYZ:表征DNA片段的長度、堿基組成和堿基的排列)的基礎上引入溫度作為第四位參數所構成的四維溫度空間平臺上建立的核酸雜交技術。 背景 基因組(genome)是指人類細胞中所有遺傳信息的總和。基因組信息
實驗方法原理 Southern 雜交獲得的信號強度取決于若干因素,包括固定的 DNA 與探針互補的比例、探針的大小及特異活性以及轉移到膜上的基因組 DNA 的數量。在最佳條件下,這種
實驗方法原理 Southern 雜交獲得的信號強度取決于若干因素,包括固定的 DNA 與探針互補的比例、探針的大小及特異活性以及轉移到膜上的基因組 DNA 的數量。在最佳條件下,這種方法的敏感度足以檢測到與 32P 標記的高度特異(>109 cpm/μg)的探針互補的 <0.1
四維核酸雜交技術[ 1 ](4DH),即在傳統核酸雜交三維空間(XYZ:表征DNA片段的長度、堿基組成和堿基的排列)的基礎上引入溫度作為第四位參數所構成的四維溫度空間平臺上建立的核酸雜交技術。背景 基因組(genome)是指人類細胞中所有遺傳信息的總和。基因組信息是由脫氧核糖核酸
實驗概要本實驗介紹了動物細胞基因組DNA中小衛星多態性Southern blot檢測的原理和操作步驟。掌握核酸雜交檢測技術(Southern blotting技術)、核酸探針的標記技術、小衛星DNA多態性檢測分析技術(DNA 指紋圖譜技術)和化學發光檢測技術。實驗原理Southern印跡雜交技術包括
一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH) 是用標記的核酸探針,使用非放射檢測系統或放射自顯影系統,在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法,具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一,廣泛應
原位雜交組織(或細胞)化學 (In situ Hybridization Histochemistry, ISHH) 簡稱原位雜交(In Situ Hybridization),屬于固相分子雜交的范疇,它是用標記的DNA或RNA為探針,在原位檢測組織細胞內特定核酸序列的方法。根據所用探針和靶核酸的不