實驗方法原理熒光,又作“螢光”,是指一種光致發光的冷發光現象。當某種常溫物質經某種波長的入射光(通常是紫外線或X射線)照射,吸收光能后進入激發態,并且立即退激發并發出比入射光的的波長長的出射光(通常波長在可見光波段);而且一旦停止入射光,發光現象也隨之立即消失。具有這種性質的出射光就被稱之為熒光。在日常生活中,人們通常廣義地把各種微弱的光亮都稱為熒光,而不去仔細追究和區分其發光原理。利用熒光染料與被研究對象(蛋白、多肽等)吸附或共價結合后其熒光特性發生改變,從而反映有關研究對象性能的信息。實驗材料人單核細胞系U937試劑、試劑盒胎牛血清TRIzol試劑Fluoro DD試劑盒Supersript Ⅱ逆轉錄酶Ampli Taq DNA聚合酶儀器、耗材手術刀片PCR儀凝膠成像儀離心管移液槍水浴鍋實驗步驟一、材料 1. 標本人單核細胞系U937,細胞密度2×108/L,分對照組(N)、處理Ⅰ組(T1)、處理Ⅱ組(......閱讀全文
免疫熒光細胞化學技術免疫熒光細胞化學是現代生物學和醫學中廣泛應用的技術之一,是由Coons等(1950)建立,經過近43年的發展,免疫熒光技術與形態學技術相結合發展成免疫熒光細胞(或組織)化學。它與親合化學技術如葡萄球菌A蛋白(SPA)、生物素與卵白素、植物血凝素(ConA等)相結合拓寬了領域;與激
一、樣品的預處理 樣品的預處理包括給藥、切片或細胞標本的制備。其中給藥過程要根據實驗目的來進行,在這里主要介紹切片和細胞標本的制備。 1、組織切片樣品的處理 其制作過程主要包括組織樣品固定、切片制作。組織切片的優點是能夠完好地保存細胞間的相互關系和結構,因此是生物醫學實驗中應用
流式細胞儀常用的幾種檢測方法一、測定用乙醇固定的DNA的含量1、培養細胞的DNA含量的測定制備單細胞懸液于200μl的PBS緩沖液中;加入2ml預冷的70%乙醇,4℃保存; 附:細胞固定的一般步驟1) 取單
熒光免疫技術是標記免疫技術中發展最早的一種。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術(fluorescentantibod
熒光免疫技術是標記免疫技術中發展最早的一種。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術(fluorescentantib
芯片實驗操作流程包括樣本DNA或RNA制備、標記、雜交及洗滌等步驟基因芯片實驗操作流程圖 1.樣本DNA或RNA制備 芯片實驗中核酸的抽提沒有特殊之處,參照常規的分子生物學實驗手冊
一、前言近百年來,“特效試劑”一直是分析化學家追求的目標。所謂“特效試劑”,就是指的是只與一種待測物質反應的試劑。事實上,目前使用的所謂的“銅試劑”、“鐵試劑”、“硝酸試劑”等等,都是“盛名之下,其實難副”的。20世紀40-50年代追求合成特效試劑的狂熱,早已降溫。正在分析化學家心灰意冷之際,人們從
直接測定法應用于測定許多有機芳族化合物和生物物質具有內在的熒光性質。間接測定法用于測定本身不發熒光或者因熒光量子產率很低而無法進行直接測定的物質的熒光性質。同步熒光分析法是提高分析選擇性,解決多組分熒光物質同時測定的良好手段之一[17,33]。最早發展起來的恒波長同步熒光法在一般的熒光光譜儀上均可方
免疫熒光組織化學是根據抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有標記的熒光素,熒光素受激發光的照射,由低能態進入高能態,而高能態的電子是不穩定的,以輻射光量子的形式釋放能量后,
所有的生物芯片技術都包含四個基本要點:芯片的制作、雜交或反應、測定或掃描、數據處理。生物芯片的技術核心是芯片的制備及反應信號的檢測。 1、芯片制備技術 目前制備芯片的方法基本上可分為兩大類:一類是原位合成(in situ Synthesis);一類是合成后交聯(post-synthesis at
免疫熒光技術(Immunofluorescence technique)又稱熒光抗體技術,根據抗原抗體反應的原理,將熒光素偶聯到已知的抗原或抗體上制成熒光探針,與血清或體液、細胞、組織中存在的相應抗體(或抗原)結合,從而對這些組織中存在的抗原或抗體進行定性、定量和(或)定位的檢測。抗體的選擇
一、免疫層析技術 圖1 薄層色譜法 二、免疫標記技術 (1)膠體金法膠體金是指膠體狀的一種金顆粒,是氯金酸(HAuCl4)在還原劑作用下聚合成納米尺寸的金顆粒,由于靜電作用而形成穩定的膠體狀態。 膠體金在弱堿環境下帶負電荷,可以與蛋白質分子的正電荷
圖3 單細胞耗氧率動態代謝檢測及分析 一步染色法檢測細胞對藥物的敏感性 應用ImageXpress?
一、芯片制備基因芯片的制備主要有兩種基本方法,一是在片合成法,另一種方法是點樣法。在片合成法是基于組合化學的合成原理,它通過一組定位模板來決定基片表面上不同化學單體的偶聯位點和次序。在片合成法制備DNA芯片的關鍵是高空間分辨率的模板定位技術和固相合成化學技術的精巧結合。目前,已有多種模板技術用于基因
一、芯片制備基因芯片的制備主要有兩種基本方法,一是在片合成法,另一種方法是點樣法。在片合成法是基于組合化學的合成原理,它通過一組定位模板來決定基片表面上不同化學單體的偶聯位點和次序。在片合成法制備DNA芯片的關鍵是高空間分辨率的模板定位技術和固相合成化學技術的精巧結合。目前,已有多種模板技術用于基因
實驗概要生物芯片是將生命科學研究中所涉及的不連續的分析過程(如樣品制備、化學反應和分析檢測),利用微電子、微機械、化學、物理技術、計算機技術在固體芯片表面構建的微流體分析單元和系統,使之連續化、集成化、微型化。生物芯片技術主要包括四個基本要點:芯片方陣的構建、樣品的制備、生物分子反應和信號的檢測。1
一、 實驗準備1. 標本制備:2. zui小化非特異性結合: 二、凋亡1.凋亡的檢測方法:網站和其它2.PI染色法3.Annexin V 法4.TUNNEL法 三、細胞因子1.激活的細胞因子2.CBA 四、血小板
【薄層色譜法】 1.薄層層析(TLC)法 TLC法是測定黃曲霉毒素的經典方法,在薄層板展開后,在365 nm紫外燈下,黃曲霉毒素B1,B2,G1和G2分別顯示紫色、藍紫色、綠色和綠色熒光。TLC法的特異性較差,靈敏度相對較差,且測定黃曲霉毒
第1代測序技術——熒光標記的Sanger法 在第一臺全自動測序儀出現之前,使用最為廣泛的測序方法就是 Sanger 在 20 世紀 70 年代中期發明的末端終止法測序技術。 Sanger 也因此獲得 1980年的諾貝爾化學獎。 他的發明第一次為科研人員開啟了深入研究生命遺傳密碼的大門。G1.1&nb
流式細胞儀在生物學中的應用 耿慧霞 ,王 來 ,王 強 (河南大學生命科學學院 ,河南開封 475001) 摘 要 :簡要論述了流式細胞儀(flow cytometry ,FCM) 的工作原理 ,并對其在生物學基礎科學研究中的應用進行闡述 ,包括 對細胞凋亡、細胞周期、免疫細胞、細胞受體的研
用于流式細胞儀檢測的常用熒光素有FITC、TRITC、Cy3、Cy5,PE和PI,在以上各種熒光染料中,PE熒光最強,適用于弱表達抗原;FITC最便宜,適用于強表達抗原,適用范圍廣。 1.直接免疫熒光標記法 取一定量的細胞懸液(濃度約l×l06個/m1),直接加
2、流式細胞標記法 (1)PE-mAb/FITC-annexin V 熒光標記法 正常細胞的磷酯酰絲氨(phosphatidylserine,PS)位于細胞膜內表面,細胞凋亡時翻轉露于膜外側,可與annexinV高親合力結合。研究發現PS外翻為細胞凋亡的早期事件,先于膜通透性增加
6月30日,國家食品藥品監督管理總局在網站上發布新聞,表示以2014年第30號公告形式頒布了《子宮刮匙》等120項推薦性醫療器械行業標準。這是今年6月1日起新修訂的《醫療器械監督管理條例》施行后頒布的第一批醫療器械行業標準。標準的正式頒布將推動醫療器械監督管理,對保障醫療器械安全有效、促進醫療器
免疫熒光技術(Immunofluorescence technique) 1941年,Coons等于首次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術(fluorescent antibody technique)。該技術的主要特點是:特異性強、敏
當下我國正處于新型冠狀病毒2019-nCoV疫情發展階段,該病毒感染主要會造成的新型的急性肺炎癥狀(WHO已將其名為NCOVID19),疫情已在全國范圍內肆虐超過20天,對我國民生健康和經濟造成極大影響。目前網上涌現多篇關于新型冠狀病毒2019-nCoV實驗室檢測技術的文章,文章質量水平千差萬別
當下我國正處于新型冠狀病毒2019-nCoV疫情發展階段,該病毒感染主要會造成的新型的急性肺炎癥狀(WHO已將其名為NCOVID19),疫情已在全國范圍內肆虐超過20天,對我國民生健康和經濟造成極大影響。目前網上涌現多篇關于新型冠狀病毒2019-nCoV實驗室檢測技術的文章,文章質量水平千差萬別
一、血液學檢查 病毒感染相關的血液學檢查主要包括血常規、血生化以及其他針對性的檢測項目,相關指標為臨床常用的病毒感染診斷指標,為疾病的輔助診斷提供依據。 1、血常規 血常規中的許多項具體指標都是一些常用的敏感指標,對機體內許多病理改變都有敏感反映,其中又以白細胞計數、紅細胞計數、血紅蛋白和
1.特點熒光分子所處的外部化學環境對熒光強度有直接影響.選擇合適的條件不但可以使熒光加強.提高測定的靈敏度.同時.還可以控制干擾物質的熒光產生.改善分析的選擇性。分了熒光分析法具有如下特點:(l)靈敏度高.山于是在黑背景下測定熒光發射強度一般而言,分子熒光分析法的靈敏度比紫外一可見吸收光洪分析法高2
一、免疫標記法及其分類1.熒光免疫法原理是應用一對單克隆抗體的夾心法。底物用磷酸-4-甲基傘形酮,檢測產物發出的熒光,熒光強度與Mb濃度呈正比,可在8min內得出結果。結果以 Mb每小時釋放的速率表示(△Mb)表示。該法重復性好,線性范圍寬,具有快速、敏感、準確的特點。以雙抗夾心法為例,首先將特異性
免疫熒光細胞化學染色方法 一、標本制作 可制作涂片、印片、細胞單層培養物、組織切片,經適當固定或不固定,作免疫熒光染色用。 二、熒光抗體染色方法 (一)直接法 1.染色 切片經固定后,滴加經稀釋至染色效價如1:8或1:16的熒光抗體(如兔抗人γ-球蛋白熒光 抗體或兔抗人 IgG 或 IgA 熒光抗體