方案10定量蛋白質組學的體內蛋白質同位素標記實驗

方案10 定量蛋白質組學的體內蛋白質同位素標記實驗

實驗材料釀酒酵母試劑、試劑盒丙酮乙腈NH4HCO3細胞生長培養基干冰冰水2-巰基乙醇甲醇鐵氰化鉀蛋白提取試劑組合蛋白酶抑制劑硫代硫酸鈉儀器、耗材離心蒸發儀離心管血細胞計數器孵育器MALDI- TOF 質譜儀和 LC-MS MS 系統超聲波破碎儀分光光度計實驗步驟一、培養細胞二、提取蛋白的細胞準備三、

定量蛋白質組學的誕生

　　在現代研究技術，如熒光顯微鏡，流式細胞儀和蛋白質芯片技術中，抗體仍然扮演著非常重要的角色。但依賴于抗體的蛋白質檢測存在一些缺點，其中最大的限制就是，抗體的可用性和質量差別很大。一些大規模項目，比如人類蛋白質圖譜（Human Protein Atlas），Antibodypedia，以及美國NIH

定量蛋白質組學方法分類

1 背景和意義從生命活動的直接執行者——蛋白質的角度研究生命現象和規律（特別是疾病防治和病理研究）已成為研究生命科學的主要手段。而這些研究往往離不開對細胞、組織或器官中含有蛋白質種類和表達量的研究。對處不同時期、不同條件下蛋白質表達水平變化的研究，識別功能模塊和路徑，監控疾病的生物標志物，這些研究都

定量蛋白質組學的研究內容

　　1.蛋白質鑒定：可以利用一維電泳和二維電泳并結合Western等技術，利用蛋白質芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術對蛋白質進行鑒定研究。　　2.翻譯后修飾：很多mRNA表達產生的蛋白質要經歷翻譯后修飾如磷酸化，糖基化，酶原激活等。翻譯后修飾是蛋白質調節功能的重要方式，因此對蛋白質翻譯后修飾的研究對

定量蛋白質組學方法分類介紹

　　【蛋白研究系列專題】-4丨定量蛋白質組學方法，您值得擁有 　　1 背景和意義 　　 從生命活動的直接執行者——蛋白質的角度研究生命現象和規律（特別是疾病防治和病理研究）已成為研究生命科學的主要手段。而這些研究往往離不開對細胞、組織或器官中含有蛋白質種類和表達量的研究。對處不同時期、不同條件下

定量蛋白質組學的技術發展

　　以質譜為基礎的定向蛋白質組學研究領域的發展歷程并不短，早在上個世紀70年，三重四極桿質譜儀就已經出現，并在80年代首次在發表的文章中，證明可以被用來檢測肽段。　　過去幾年間，更廣泛的范圍內定向質譜技術的應用迅速攀升，而且新方法，新工具，新資源和新一代方法，也令更多研究領域的科學家們能利用到這項技

定量蛋白質組學的優勢有哪些？

　　質譜方法比抗體方法更先進的一個原因，就是已經開發出了一種新的定向分析技術，比生產一個新的抗體要快得多，并大大減少了檢測特異性方面的問題（抗體方法存在交叉反應的問題）。　　雖然抗體方法在低豐度蛋白的檢測方面更加靈敏，但是質譜技術的一個明顯優勢就是能在單個實驗中檢測多種蛋白，比如說，系統生物學研究人

安捷倫科技資助定量蛋白質組學研究

　　安捷倫科技通過都柏林國立大學 Newman 獎學金計劃 　　資助定量蛋白質組學研究　　2010 年 5 月 12 日，加利福尼亞州圣克拉拉市和愛爾蘭都柏林市 — 安捷倫科技公司(紐約證交所：A)和都柏林國立大學(University College Dublin, UCD)今日宣布 Ben

蛋白質組學幾種定量方法的案例解讀

　　 上期分享的蛋白組學內容，是不是有些小伙伴還繞在云里霧里呀？這次，小編用實例說話，幫您梳理清楚。 　　一、Label-free定量 　　 Label-free定量，顧名思義就是不需要對比較樣本做特定標記處理，只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化

蛋白質組學實驗技術大全

每一個領域的發展都是基于技術的進步和革新，蛋白質組學亦然。蛋白質的可變性和多樣性等特殊性質導致了蛋白質研究技術遠遠比核酸技術要復雜和困難得多，但正是這些特性參與和影響著整個生命過程。在開始實驗之前，先看看這篇技術簡介吧。一?蛋白質與DNA相互作用在許多的細胞生命活動中，例如DNA復制、mRNA轉錄與

蛋白質組學研究的完整解決方案

人體內真正發揮作用的是蛋白質，蛋白質扮演著構筑生命大廈的“磚塊”角色，隨著破譯生命密碼的人類基因組計劃進入尾聲，一個以蛋白質和藥物基因學為研究重點的后基因組時代已經拉開序幕，蛋白質將是今后的重點研究方向之一。然而，蛋白質的分離和鑒定非常費時，目前測定蛋白質的技術遠遠落后于破譯基因組的工具，最好的實驗

蛋白質組實驗全套流程方案-2

聚丙烯酰胺凝膠的配制表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳分離膠所用溶液溶液成分不同體積（ml）凝膠液中各成分所需體積（ml）5101520253040506%?? 水2.65.37.910.613.215.921.226.5?? 30%丙烯酰胺溶液123456810?? 1.

蛋白質組實驗全套流程方案-1

?蛋白質組實驗流程雙向電泳的樣品的制備樣品制備原則樣品制備是雙向電泳中最關鍵的一步，將直接影響2-DE結果好壞。目前并沒有一個通用的樣品制備方法，盡管處理方法多種多樣，但都遵循幾個基本的原則：1）盡可能的提高樣品蛋白的溶解度，抽提最大量的總蛋白，減少蛋白質的損失；2）減少對蛋白質的人為修飾；3）破壞

wkh：label free定量蛋白質組學研究要點

定量定性蛋白質組學新工具亮相ASMS

賽默飛世爾科技在ASMS 2010展示定量定性蛋白質組學工具 　　美國猶他州鹽湖城(2010年5月25日)– 全球服務科學領域的領導者賽默飛世爾科技，今日公布了其在蛋白質組學工具方面的重大進步，并表示這些進步將推動定量和定性蛋白質組學研究取得突破性的進展。這些新產品與賽默飛世爾科技其它的試劑和耗材

“鳥槍法(shotgun)”定量蛋白質組學技術

　　1999年，Yates研究組提出“鳥槍法”(shotgun)，其基本技術路線是針對液體或SDS-PAGE條帶的復雜混合物用酶(Trypsin)酶解成肽段混合物，然后對肽混合物進行多維毛細管液相色譜分離和串聯質譜分析以及數據庫檢索，從而確定蛋白質的種類，可同時鑒定成百上千種蛋白質。他們把這種思路稱

蛋白質組學幾種定量方法的案例解讀（三）

經典案例題目：Proteome-wide Mapping of Cholesterol-Interacting Proteins in Mammalian Cells（采用甾醇探針結合SILAC定量技術在哺乳動物細胞中分析膽固醇-蛋白質相互作用）期刊：Nat Methods主要技術：SILAC定量文

定量蛋白質組學揭開巨噬細胞活化的秘密

巨噬細胞活化是許多疾病發展過程中的關鍵步驟，包括動脈疾病。最近，布萊根婦女醫院和哈佛醫學院的研究人員通過蛋白質組學及其他分析，強調了PARP9和PARP14在調節巨噬細胞活化中的作用。這項成果發表在《Nature Communications》上。布萊根婦女醫院的Masanori Aikawa及其同

蛋白質組學幾種定量方法的案例解讀（一）

一、Label-free定量Label-free定量，顧名思義就是不需要對比較樣本做特定標記處理，只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化，通常用于分析大規模蛋白鑒定和定量時所產生的質譜數據。Label-free技術又可分為基于譜圖數（Spectra Co

蛋白質組學幾種定量方法的案例解讀（二）

經典案例題目：A tumour suppressor network relying on the polyamine-hypusine axis（一種基于多胺Hypusine軸（Polyamine-hypusine axis）的新型腫瘤抑制網絡）期刊：Nature主要技術：iTRAQ定量文章摘要：

蛋白質組與蛋白質組學簡介-2

3 甲基化干擾實驗用來檢測蛋白質的結合位點。甲基化修飾的DNA探針可以干擾蛋白質的結合。結合位點上未被修飾的DNA片段才能與蛋白結合，然后將DNA從被修飾的堿基處切割，電泳分離，結合蛋白的DNA在結合位點上不能被修飾，不能切斷，可確定結合位點的位置。 4 Dnase I 足紋分析 蛋白

蛋白質組與蛋白質組學簡介-1

一、蛋白質組概念：一個細胞、一個組織或一個機體全部基因所表達的全部蛋白質。 二、蛋白質組學研究范疇 1.蛋白質和蛋白質間 2.蛋白質和核酸之間 3.蛋白質及其組成質點的分離、分析、鑒定 4.蛋白質結構分析 5.生理、病理或不同發育狀態下蛋白質組表

蛋白質定量實驗

考馬斯亮藍蛋白質濃度分析法 堿性銅還原分析法 胺衍生法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蛋白質分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基，其化學結構中

蛋白質定量實驗

試劑、試劑盒 考馬斯亮藍 G250乙醇磷酸實驗步驟 (1) 準備 100~1500 ug/ml 的標準品, 溶于 Bradford 法相兼容緩沖液中。對于較稀的樣品，可能通過增加樣品在試劑體積中的比率而擴大靈敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果樣品與染料的比

定量蛋白質組學質譜采集技術進展（四）

無論是相對定量還是絕對定量方法,DIA很好地克服了DDA鳥槍法和SRM目標監測的種種不足, 在定量蛋白質組學中具有良好的應用前景。然而,目前DIA 方法的循環時間仍然較長,只能與納流液相聯用,并使用較長的梯度以獲得足夠的色譜峰寬,限制了DIA 的應用范圍。這也是DIA 技術下一步需要解決

定量蛋白質組學質譜采集技術進展（二）

同步母離子選擇(Synchronous precursor selection, SPS)技術的出現徹底解決了MS3 響應弱的問題。SPS 技術利用多頻切跡的選擇波形電壓(MultiNotch) [27] ,在線性離子阱中實現一次選擇同時獲得多個離子,最多可同時選擇15 個(圖2A)。利用這一原理,

定量蛋白質組學質譜采集技術進展（一）

摘要 質譜是定量蛋白組學的主要工具。近年來隨著定量蛋白質組學研究的深入,傳統質譜定量技術面臨著復雜基質干擾、分析通量限制等諸多問題。而最近一系列質譜新技術的發展,包括同步母離子選擇(SPS)、質量虧損標記、平行反應監測(PRM)、多重累積(MSX)和多種全新數據非依賴性采集(DIA)等,為解決目前蛋

定量蛋白質組學質譜采集技術進展（三）

然而PRM 的分析通量不如SRM。PRM 能同時監測最多10 ~15 個母離子,而SRM 能同時監測上百個離子對,因為高分辨質譜的有效掃描速度通常只有10 ~15 Hz,遠慢于SRM 的有效掃描速度。但是這一問題正逐步得到解決,多重累積(Multiplexing, MSX)技術的發展和使用有

蛋白質組，蛋白質組學及研究技術路線

基因組(genome)包含的遺傳信息經轉錄產生mRNA，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的mRNA稱為轉錄子組(transcriptome)。很顯然，不同細胞在不同生理或病理狀態下轉錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經翻譯產生蛋白質，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類

蛋白質組，蛋白質組學及研究技術路線

基因組(genome)包含的遺傳信息經轉錄產生mRNA，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的mRNA稱為轉錄子組(transcriptome)。很顯然，不同細胞在不同生理或病理狀態下轉錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經翻譯產生蛋白質，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類