細胞周期測定實驗——流式細胞儀測定法
實驗方法原理流式細胞儀的工作原理是將待測細胞放入樣品管中,在氣體的壓力下進入充滿鞘液的流動室。在鞘液的約束下細胞排成單列由流動室的噴嘴噴出,形成細胞柱。通過對流動液體中排列成單列的細胞進行逐個檢測,得到該細胞的光散射和熒光指標,分析出其體積、內部結構、DNA、RNA、蛋白質、抗原等物理及化學特征。 細胞內的DNA含量隨細胞周期進程發生周期性變化,如G0/G1期的DNA含量為2C,而G2期的DNA含量是4C。利用PI標記的方法,通過流式細胞儀對細胞內DNA的相對含量進行測定,可分析細胞周期各時相的百分比。實驗材料HeLa細胞試劑、試劑盒乙醇RNase-APIPBS儀器、耗材流式細胞儀細胞培養設備離心機水浴冰箱注射器離心管封口膜微量移液器實驗步驟一、取對數生長期細胞,倒去培養液,胰酶適度消化細胞,用培養液吹打,800 rpm,離心 15 min去上清。 二、PBS洗2次,加0.5 mL PBS吹勻,務必吹散。&n......閱讀全文
流式細胞儀細胞周期結果判斷QA
請幫忙分析一下第一張是未轉染的第12代,第二章是轉染后的第22代。能說明轉染后的細胞增值能力強了嗎,怎么看出來的。據此分析兩者的增值沒有明顯的差別。雖然第二張圖比第一張圖的S期有所增高,但G2期下降了。細胞周期是基于細胞處于不同分裂時期具有不同的DNA含量而分析細胞處于不同的時期的方法。確切的說結果
餾程測定法
餾程系指一種液體照下述方法蒸餾,校正到標準壓力[101.3kPa(760mmHg)]下,自開始餾出第5滴算起,至供試品僅剩3~4ml或一定比例的容積餾出時的溫度范圍。某些液體藥品具有一定的餾程,測定餾程可以區別或檢查藥品的純雜程度。用國產19標準磨口蒸餾裝置一套。A為蒸餾瓶;B為冷凝管,餾程在130
余氯測定法
沉淀滴定法(氯離子的測定)1、所用試劑氯化鈉標準溶液:(1毫升=1毫克Clˉ):取基準試劑或優級純氯化3—4克至于瓷坩堝中,于高溫爐升溫至500℃灼燒10分鐘,然后在干燥器內內冷卻至室溫;準確稱取1.649克氯化鈉,現用少量蒸餾水溶解,再用蒸餾水稀釋至1000毫升。硝酸銀標準溶液(1毫升=1毫克Cl
熔點測定法
依照待測物質的性質不同,測定法分為下列3種。各品種項下未注明時,均系指第一法。折疊第一法測定易粉碎的固體藥品取供試品適量,研成細粉,除另有規定外,應按照各藥品項下干燥失重的條件進行干燥。若該藥品為不檢查干燥失重、熔點范圍低限在135℃以上、受熱不分解的供試品,可采用105℃干燥;熔點在135℃以下或
細胞周期的測定
一、原理細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法,但它不能代表細胞群體的周期,故現多采用其他方法測群體周期。測定細胞周期的方法很多,有同位素標記法、細胞計數法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測
流式細胞儀測細胞周期圖怎樣分析
(1)細胞培養取對數生長期的細胞,按1X106個/mL以1mL體積接種于6孔板內。培養24h后,加入不同濃度樣品。在37 ℃、5 % 的CO2恒溫箱中培養24h后終止。(2)細胞固定胰酶消化并離心收集細胞(800rpm/min),棄上清,用預冷PBS洗細胞兩次,加入預冷70%乙醇, -20℃固定保存
熔點測定法的測定原理
熔點是指一種物質按照規定的方法測定,由固相熔化成液相(有時會伴隨分解)時的溫度范圍,是物質的一種物理常數。依法測定熔點可以鑒別藥物,也可以檢查藥物的純雜程度。根據被測物質的不同性質,《中國藥典》二部附錄“熔點測定法”項下列有3種不同的測定方法:第一法,用于測定易粉碎的固體藥物;第二法,用于測定不易粉
利福平的測定法
臨用新制或存放于2~8℃條件下6小時內使用。取本品適量,精密稱定,加乙腈溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液;精密量取適量,用乙腈-水(1:1)定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液,作為供試品溶液,精密量取10μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另取利福平對照品適量,精密稱定,同法測定。按
旋光測定法
動調節旋光測定儀的面市,使測定結果有一定的精確度和再現性,因此常被研究單位和生產廠家用作旋光性產品的含量分析,即用旋光儀測定樣品的旋光度α,計算比旋光度[α]D20,再換算成樣品光學純度ee值。旋光測定法需要的樣品較多,通常需0.2-2g純樣品,5-25ml待測溶液;與色譜法相比,方法的準確度﹑精密
旋光測定法
動調節旋光測定儀的面市,使測定結果有一定的度和再現性,因此常被研究單位和生產廠家用作旋光性產品的含量分析,即用旋光儀測定樣品的旋光度α,計算比旋光度[α]D20,再換算成樣品光學純度ee值。旋光測定法需要的樣品較多,通常需0.2-2g純樣品,5-25ml待測溶液;與色譜法相比,方法的準確度﹑精密度較
簡述灰分測定法
灰分測定法,測定用的供試品須粉碎,使能通過二號篩,混合均勻后,取供試品2~3g(如須測定酸不溶性灰分,可取供試品3~5g),置熾灼至恒重的坩堝中,稱定重量(準確至0.01g),緩緩熾熱,注意避免燃燒,至完全炭化時,逐漸升高溫度至500~600℃,使完全灰化并至恒重。1.總灰分測定法 測定用的供試品須
谷物灰分測定法
本標準適用于谷物灰分含量的測定。1 方法原理將一定重量粉碎的谷物,裝入已知重量的坩堝中,經高溫電爐灼燒(550±10℃)至恒重后,減去坩堝重,即為所測谷物灰分含量。2 儀器、設備2.1 分析天平:感量0.1 mg。2.2 粉碎機:實驗室用。2.3 篩子:實驗室用。2.4 600W電爐:具有調壓變壓器
如何測定細胞周期?其實驗方法又是怎樣的?
如何測定細胞周期?其實驗方法又是怎樣的?這兩個問題可以算做一個問題來回答,要解析這個問題一共要操作五個步驟:1、消化細胞 ,將細胞 懸液接至內含蓋玻片的培養皿中。2、CO2培養箱中培養48小時,使細胞長在蓋片上。3、取出蓋片,按下列順序操作:PBS漂洗3分鐘→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘
細胞周期該如何測定?
一、原理細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法,但它不能代表細胞群體的周期,故現多采用其他方法測群體周期。測定細胞周期的方法很多,有同位素標記法、細胞計數法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測
實驗室水分活度值的測定法其它測定水分方法
1、化學干燥法化學干燥法就是將某種對于水蒸汽具有強烈吸附作用的化學藥品與含水樣品同裝入一個干燥器(玻璃或真空干燥器),通過等溫擴散及吸附作用而使樣品達到干燥恒重,然后根據干燥前后樣品的失重即可計算出其水分含量,此法在室溫下干燥,需要較長時間,幾天、幾十天甚至幾個月。干燥劑有五氧化二磷、氧化鋇、高氯酸
實驗室水分測定方法卡爾費休測定法的操作步驟
步驟對于固體樣,如糖果必須預先粉碎,稱0.30~0.50g樣于稱樣瓶中取50ml甲醇→于反應器中,所加甲醇要能淹沒電極,用KF試劑滴定50ml甲醇中痕量水→滴至指針與標定時相當并且保持1min不變時→打開加料口→將稱好的試樣立即加入→塞上皮塞→攪拌→用KF試劑滴至終點保持1min不變→記錄計算:水分
甲氧基測定法的測定方法
取干燥的供試品(相當于甲氧基10mg),精密稱定,置燒瓶中,加熔融的苯酚2.5ml與氫碘酸5ml,連接上述裝置;另在兩個接受容器內,分別加入10%醋酸鉀的冰醋酸溶液6ml與4ml,再各加溴0.2ml;通過支管將CO2或N2氣流緩慢而均衡地(每秒鐘1~2個氣泡為宜)通入燒瓶,緩緩加熱使溫度控制在恰
熔點測定法測定方法介紹
1.第一法 測定易粉碎的固體藥物取供試品適量,研成細粉,除另有規定外應按照品種項下干燥失重的條件進行干燥。若供試品不檢查干燥失重、熔點范圍低限在135℃以上且受熱不分解,可采用105℃干燥;熔點在135℃以下或受熱分解的供試品,可在五氧化二磷干燥器中干燥過夜或用其他適宜的干燥方法干燥,如恒溫減壓干燥
旋光度測定法的測定方法
旋光度測定法的測定方法主要包括以下幾個方面:1、儀器旋光計:《中國藥典》規定,應使用讀數至0.01。并經過檢定的旋光計。旋光計的檢定:可用標準石英旋光管進行校正,讀數誤差應符合規定。2、測定方法將測定管用供試液體或固體物質的溶液(取固體供試品,按各藥品項下的方法制成)沖洗數次,緩緩注入供試液或溶液適
brdu細胞周期實驗步驟
1、細胞生長至指數期時,向培養液中加入BrdU,使最終濃度為10μg/ml。 2、44小時加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。 3、48小時后常規消化細胞至離心管中,注意培養上清的漂浮細胞也要收集到離心管中。 4、常規染色體制片(見第三部分:染色體技術)。 5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋
濁度計測定法
使用濁度計時,需要兩個參照標準物質:濁度標準可用來設定電流ii的靈敏度,空白標準(蒸餾水或未接種的培養基)可用來對儀器調零。濁度計使用的磨砂有機玻璃濁度標 準或磨砂玻璃濁度標淮可以從生產廠商處購得。 濁度計靈敏度的測定極限約為105/mL個微生物(實際的數字取決于微生物的 種類)。 一些濁度
熔點測定法所需儀器
儀器包括熔點測定儀、溫度計和毛細管。熔點測定儀由加熱用容器和攪拌器組成。溫度計為具有0.5刻度的分浸型溫度計,應經熔點測定用標準品校正,其分浸線的高度宜在5-80mm,溫度計的汞球宜短,汞球的直徑宜與溫度計柱身的粗細接近。毛細管是用潔凈的中性硬質玻璃管制成,內徑為0.9~1.1mm,壁厚為0.10~
濁度測定法的定義
比濁法又稱濁度測定法。為測量透過懸浮質點介質的光強度來確定懸浮物質濃度的方法,這是一種光散射測量技術。
微生物測定法
微生物測定法是指在規定條件下選用適當微生物測定某物質含量的方法。被測定的物質可以是某些生物生長所必需的維生素、氨基酸等,也可以是抑制某些微生物生長的抗生素、農藥等。常使用的有液體稀釋法和固體平板擴散法
口蹄疫疫苗的測定法
取1瓶疫苗恢復至室溫,在3個1.5ml離心管中分別精確加入100μl疫苗和900μl丙酮,充分混勻,室溫放置10分鐘,在4℃條件下,以15000g離心15分鐘。吸棄液相,沉淀物用400μl丙酮洗滌2次,室溫干燥約15分鐘,加50μl去離子水復溶后,按附注進行檢驗。每毫升疫苗總蛋白含量應不高于50
水分測定法的分類
??水分測定方法—般可分為兩大類,即物理分析這和化學分析法。目前市場上主要有露點水分儀、紅外水分儀、庫侖水分儀、卡爾·費休水分測定儀、微波水分儀,以及一些水分儀。這些儀器測定方法操作簡便、靈敏度高、再現性好,并能連續測定,自動顯示數據。?? ??露點水分測定儀操作簡便,儀器不復雜,所測結果一般令人滿
面粉粘度簡易測定法
1儀器和用具1.1?磁力攪拌加熱器1.2?1000ml燒杯1.3?200ml量筒1.4?感量0.1g天平1.5?涂-4粘度計1.6?量程為200℃的水銀溫度計2方法原理一定濃度的谷物粉或淀粉的水懸浮液,按一定的升溫速率加熱,使淀粉糊化,由于淀粉吸水膨脹使懸浮液逐漸變成粘狀物,粘度不斷增高,隨著溫度增
復鈣時間測定法
【原理】 在去鈣離子的抗凝血漿中,重新加入適量的鈣后,血漿就發生凝固,這一過程所經歷的時間即為復鈣時間(recalcification time,RT)。 【方法學評價】通常有兩種方法: ①表面玻璃皿法:本法比試管法敏感,但不如試管法簡便。 ②試管法:僅用試管替代玻璃皿作試驗醫|學教育網搜集整理。
免疫酶測定法簡介
免疫酶測定法是一種用酶標記一抗或二抗檢測特異性抗原或抗體的方法。本法將抗原抗體反應的高度特異性與酶對底物高效催化作用結合起來,根據酶作用底物后顯色,以顏色變化判斷實驗結果。目前常用的方法有酶免疫組化技術和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。前者測定細胞表面抗原和組織內的抗原,后者主要測定可溶性抗原或抗體
瀝青灰分測定法
?瀝青經燃燒和煅燒后,所余無機物質即為灰分,以質量百分數表示。瀝青的灰分是瀝青中無機礦物質的含量。含有微量金屬的分子燃燒煅燒后形成的無機物和灰分的測定可以檢查瀝青中礦物質的含量。另外,在回收瀝青時對回收的瀝青要先進行灰分的測定,以確定是否因礦粉的存在影響了回收瀝青的分析測定結果。蟸?二、設備2.1?