將基因轉移至未分化ES細胞實驗—將ES克隆挑取到96孔板
儀器、耗材ES 生長培養基neoR-MEF 滋養板96 孔 U-底板無菌吸頭微量移液器實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：ES 生長培養基，含 300 μg/ml G418 和青霉素/鏈霉素96 孔平底 neoR-MEF 滋養板96 孔 U-底板細而圓的無菌吸頭微量移液器（10~100 μl）8 道移液器無菌多道移液器容器2. 在有 neoR-MEF 滋養層的平底 96 孔板的每孔中加 150 μl 含 G418 和青霉素/鏈霉素的 ES 培養基。置溫箱待用。3. 在生物安全柜內的倒置顯微鏡下挑取克隆。4. 用多道微量移液器在 96 孔 U 底板每孔加 25 μl 胰酶溶液。5. PBS 沖洗含 ES 克隆的 100 mm 培養板兩次。加 PBS，恰好沒過培養板的底。6. 在顯微鏡下，用裝有無菌超細吸頭的微量移液器挑取 ES 克隆。破壞 ES 克隆周圍的 MEF 細胞，將克隆吸入吸頭，體積不要超過 20 μl。7. 克隆放入含胰酶......閱讀全文
將基因轉移至未分化ES細胞實驗—將ES克隆挑取到96孔板
儀器、耗材ES 生長培養基neoR-MEF 滋養板96 孔 U-底板無菌吸頭微量移液器實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：ES 生長培養基，含 300 μg/ml G418 和青霉素/鏈霉素96 孔平底 neoR-MEF 滋養板96 孔 U-底板細而圓的無菌吸頭微量移液器（10~100 μl）8 道移
將基因轉移至未分化ES細胞實驗
ES細胞電穿孔 將ES克隆挑取到96孔板 分配96孔板上細胞用于凍存和體外分化 融化96孔板上的細胞 ? ? ? ? ? ?
將基因轉移至未分化ES細胞實驗
分配96孔板上細胞用于凍存和體外分化 試劑、試劑盒 DMSOPBS胰酶溶液凍存液 儀器、耗材 平底 96 孔板移液器ES 生長培養基ES 分化培養基 實驗步驟 1. 準備下列試劑和材料： DMSO（組織培養級） 平底 96 孔板 多道移液器 無菌多道
將基因轉移至未分化ES細胞實驗
ES細胞電穿孔 將ES克隆挑取到96孔板 分配96孔板上細胞用于凍存和體外分化 融化96孔板上的細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗材料
將基因轉移至未分化ES細胞實驗——ES細胞電穿孔
實驗材料線性化轉移基因 DNA未分化 ES 細胞儀器、耗材電穿孔儀和電穿孔杯neoR-MEF 滋養板ES 生長培養基實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：線性化轉移基因 DNA（1 mg/ml，溶于無菌 TE）未分化 ES 細胞Bio-Rad 電穿孔儀和電穿孔杯100 mm neoR-MEF 滋養板ES
將基因轉移至未分化ES細胞實驗—融化96孔板上的細胞
儀器、耗材ES 細胞凍存板MEF 滋養板塑料盒ES 生長培養基微量移液器實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：96 孔 ES 細胞凍存板24 孔 MEF 滋養板塑料盒ES 生長培養基微量移液器2. 在塑料盒內裝入無菌水，置溫箱中預熱。3. 從 -80℃ 冰箱中取出 96 孔 ES 細胞板。4. 欲融化的
ES細胞分化培養實驗
實驗材料單一胚胎樣體儀器、耗材組織培養板巴斯德吸管玻璃蓋玻片無菌鑷子ES 分化培養基實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：培養懸液中的單一胚胎樣體6 孔組織培養板帶棉塞巴斯德吸管明膠包被的玻璃蓋玻片無菌鑷子ES 分化培養基2. 準備明膠包被的玻璃蓋玻片3. 用無菌鑷子在 6 孔組織培養板的每孔中放一塊明
ES細胞分化培養實驗
實驗材料 未分化 ES 細胞試劑、試劑盒 PBS儀器、耗材 ES 分化培養基移液器實驗步驟 1. 準備下列試劑和材料：未分化 ES 細胞無 Ca2+ 和 Mg2+ PBSES 分化培養基8 道微量移液器無菌多道移液器容器2. 收獲未分化 ES 細胞。3. 在 100 mm 組織培養皿中加 10 ml
ES細胞分化培養實驗
懸滴培養 培養皿ES細胞集落 附著ES細胞分化培養 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 未分化 ES 細胞
ES細胞分化培養實驗——培養皿ES細胞集落
實驗材料ES 細胞單一胚胎樣體儀器、耗材細菌培養皿ES 分化培養基實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：懸滴培養的 ES 細胞單一胚胎樣體100 mm 細菌培養皿ES 分化培養基2. 在 100 mm 細菌培養皿中加 10 ml 預熱的分化培養基。3. 從溫箱中取出培養 2 天的懸滴培養物。小心翻轉培養
ES細胞分化培養實驗——懸滴培養
實驗材料未分化 ES 細胞試劑、試劑盒PBS儀器、耗材ES 分化培養基移液器實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：未分化 ES 細胞無 Ca2+?和 Mg2+?PBSES 分化培養基8 道微量移液器無菌多道移液器容器2. 收獲未分化 ES 細胞。3. 在 100 mm 組織培養皿中加 10 ml PBS
ES細胞打靶技術介紹
你聽說過喀邁拉獸（chimera）嗎？沒錯，就是古希臘神話故事中一只會噴火的怪獸，這種怪獸擁有獅頭、羊身、蛇尾，像是由幾種動物拼成的。或許你知道喀邁拉獸，但你是否知道在生物遺傳學中也有一種名為喀邁拉的動物嗎？那這神奇的怪獸與我們生物領域中的ES細胞基因打靶到底有什么關系呢？本期話題，咱們就一起來聊聊
小鼠多能ES細胞的增殖實驗
試劑、試劑盒 PBS胰酶溶液 儀器、耗材 MEF 滋養板巴斯德吸管ES 生長培養基 實驗步驟 1. 準備下列試劑和材料： 60 mm MEF 滋養板（接種不能超過 7 天） 帶棉塞無菌巴斯德吸管 無 Ca2+?和 Mg2+?PBS ES 生長培養基 胰酶
小鼠多能ES細胞的增殖實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PBS 胰酶溶液 儀器、耗材 MEF 滋養板 巴斯德吸管 ES 生
小鼠多能ES細胞的增殖實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PBS 胰酶溶液 儀器、耗材 MEF 滋養板 巴斯德吸管 ES 生
大鼠ES細胞的實驗相關介紹
IannacconePM等從大鼠PVG近交系分離克隆大鼠ES細胞系-RESC-01，該細胞系對SSEA-1和AKP呈陽性，在大鼠胎兒成纖維細胞飼養層上能很好的增殖，在體內環境能分化形成多種細胞類型。RESC-01細胞系在體外懸浮培養時形成的胚體出現有節律的收縮運動，將其注入囊胚并移植假孕母鼠能生
Electroporation of ES cells
Cells are routinely passaged two days prior to electroporating. Usually one 10 cm plate at approximately 80% confluency will provide enough cells for
KARYOTYPING ES CELLS
An actively growing culture of cells is required, i e 2 - 3 d ES cell culture. The total number of cells needs to be between 106 - 107 cells. N B Re
Human Embryonic Stem (ES) Cell Protocols——Freezing Human ES Cells
? Collagenase cells for approximately 7 minutes at 37 °C (until edges of colonies are curling up). With a 5 ml pipet, gently pipet and scrape colon
Human Embryonic Stem (ES) Cell Protocols——Thawing Human ES cells
Remove Human ES cells from liquid nitrogen storage tank. Fill out a freeze/thaw form.Thaw cryovial by gently swirling in waterbath until only a small
胚胎干細胞的生物特性
特征 ES細胞具有與早期胚胎細胞相似的形態結構，細胞核大，有一個或幾個核仁，胞核中多為常染色質，胞質胞漿少，結構簡單。體外培養時，細胞排列緊密，呈集落狀生長。用堿性磷酸酶染色，ES細胞呈棕紅色，而周圍的成纖維細胞呈淡黃色。細胞克隆和周圍存在明顯界限，形成的克隆細胞彼此界限不清，細胞表面有折光較
Human Embryonic Stem (ES) Cell Protocols——General notes on ES cell culture
hES media has a two week shelf life. hES cells should be cultured in 4, 6, 24, 48, 96 well plates. Growing cells in flasks is not recommended be
Human Embryonic Stem (ES) Cell Protocols—Splitting Human ES cells onMatrige
based on splitting onto on plateWarm collagenase media to 37°C in a water bath.Aspirate media off of cell culture plate.Add the following amount of co
Human Embryonic Stem (ES) Cell Protocols——Splitting Human ES cells on MEFs
based on splitting onto one plateWarm collagenase IV split media to 37 °C in a water bath.Aspirate media off of cell culture plate.Add the following a
ES細胞的主要用途
（1）可用于研究哺乳動物個體發生和發育的規律，也是在體外條件下研究細胞分化的理想材料。（2）ES細胞通過誘導分化可產生新的組織細胞，用于治療人類的組織損傷和某些頑癥。（3）可通過ES細胞的體外誘導分化，定向培育人造組織器官，用于器官移植，解決供體器官不足和移植后免疫排斥的問題。
Counting ES cell Chromosomes
(original reference: "tissue culture made easy" by Christian LaMantia from the Magnuson lab) 1) Plate cells onto gelatinized plates (35 or 60 mm) wi
Routine Culturing of ES Cells
Cell are normally passaged every 2-3 days, this is important to avoid differentiation.Signs of differentiation are:-i) colonies are surrounded by flat
ES Cell Culture and Manipulation
MediaHigh glucose DMEM (-pyruvate, -glutamine)20% Heat-inactivated Fetal calf serum (can vary by cell type, be sure!!)1X l-glutamine1X Penicillin/stre
FACS Analysis of ES Cells
Isolate cells and dissociate to single cell suspension (can use Gibco Cell Dissociation Buffer, Accutase or Trypsin)Wash with 10% FBS/DMEM:F12For surf
牛ES細胞的分離培養相關介紹
Saito等在加有LIF的培養基中對牛ICM進行培養，分離得到牛ES細胞并進行傳代。Sims等使用與一般ES細胞分離完全不同的低密度培養法，使用BRL(buffaloratliver)條件培養基并添加亞硒酸鈉、胰島素、運鐵蛋白和50mL/L胎牛血清，培養6d～10d，得到15個ES細胞系，將其作