免疫電鏡相關技術實驗——酶標記免疫電鏡技術
實驗方法原理該技術是以酶為抗原—抗體反應的標記物，在不改變抗原抗體的免疫反應特異性，亦不降低酶活性條件下，與相應底物作用后形成不溶性的反應物。在電鏡下形成為電子散射力強的終末產物。用于免疫電鏡標記的酶有辣根過氧化物酶 (HRP)堿性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的是 HRP 。實驗材料病毒試劑、試劑盒酶標抗體儀器、耗材電子顯微鏡實驗步驟（一）在酶標記免疫電鏡檢查中較常碰到的非特異性染色及其清除方法：1. 基底染色：某些組織、細胞常帶正電荷，而抗體分子則帶負電荷。由于靜電吸引作用，在組織和細胞中會出現非特異性抗原所在部位的抗原抗體復合物，造成非特異性染色，稱為基底染色。最易造成基底染色的有膠原纖維、結締組織和變性壞死的細胞等。防止出現基底染色的方法是在用第一抗體孵育前，先用20%制備第二抗體的同種動物正常血清或2%牛血清白蛋白溶液對待檢的組織或細胞孵育30 min。這樣可明顯地減少基底染色。用于......閱讀全文
酶免疫電鏡試劑
1．PBS液 取NaCl 8.5g，Na2HPO40.85g，KH2PO40.54g，加水至1 000ml即可。 2．DAB溶液 取5mgDAB(3、3二氨基聯苯胺)加入10mlTris－HCl緩沖液(0.05mMol/L pH 7.6)，加1%H2O20.5ml～1ml。配制時，避光進行，
鐵蛋白免疫電鏡技術
（一）??原理?免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體，再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查，觀察到鐵蛋白抗體所在的位置，即抗原所在。（二）材料與試劑1．馬脾鐵蛋白2．硫酸銨3．硫酸鎘4．雙異氰酸鎘二甲苯(Metaxylene dlisocyante? XC)以0.30Mol/L pH 9.5硼酸鹽
鐵蛋白免疫電鏡技術
一、 原理 免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體，再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查，觀察到鐵蛋白抗體所在的位置，即抗原所在。 二、材料與試劑 1．馬脾鐵蛋白 2．硫酸銨 3．硫酸鎘 4．雙異氰酸鎘二甲苯(Metaxylene dlisocyante? XC)以0.30Mol/L pH 9.5
免疫鐵蛋白電鏡技術
1．基本原理 鐵蛋白的分子量460kD，為一種含鐵(約占23%)的蛋白質。直徑10―12nm。目前常用的間接免疫染色技術是應用低分子量的雙功能試劑將第二抗體與鐵蛋白相連，制備標記抗體。此復合物既保留了抗體的免疫活性，又因鐵蛋白含有2000―3000個鐵原子的致密鐵離子核心，形成四個圓形致密區，所以
酶免疫電鏡技術原理、材料和操作方法
（一）原理酶免疫電鏡技術是利用酶的高效率的催化作用對其底物的反應形成不同的電子密度，借助于電子顯微鏡觀察，證明酶的存在，從而對抗原進行定位。（二）材料與試劑1．PBS液取NaCl 8.5g，Na2HPO40.85g，KH2PO40.54g，加水至1 000ml即可。2．DAB溶液取5mgDAB(3、
非標記抗體免疫電鏡技術原理、材料和操作方法
（一） 原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
非標記抗體免疫電鏡操作步驟
1．經典法（1）將被檢病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀釋的特異性免疫血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃過夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min離心90min。（4）吸去上清，將離心管口倒置于濾紙上，吸去殘留液體。（5）沉淀物中加少量H2?
免疫電鏡膠體金標記法
第四節 免疫電鏡膠體金標記法 金標法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質，使其與抗體相吸附，從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時，在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色，不需加外進行染色。在電鏡水平，金顆粒具有很高的電子密度，
免疫電鏡術的技術特點
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色，再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
免疫電鏡術的技術特點
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色，再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
免疫電鏡術的技術特點
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色，再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
免疫電鏡技術（immunoelectronmicroscopy）的染色方法
免疫電鏡技術與光鏡免疫細胞化學染色方法的基本原理和試劑準備基本相同，相關內容可參考本書第四章，這里僅介紹免疫電鏡的幾種染色方法，包括包埋前染色、包埋后染色和冰凍超薄切片免疫染色三種。1．包埋前染色 包埋前染色即在進行常規電鏡包埋處理前先行免疫組織化學染色，然后于解剖顯微鏡下將免疫反應陽性部位取出
免疫電鏡標本固定實驗
實驗步驟1. 血管灌注固定固定效果最好，能使超微結構得到很好的保存。灌注裝置由加壓氣球、壓力表、三通接頭和連接管道組成。不同的組織器官必須選擇合適的灌注壓力，詳見有關書籍。灌注固定一般維持 10～15 min。然后用相同的固定液繼續浸泡固定 2～4 h。2. 浸泡固定組織塊切小后立即投入到固定液中，
免疫電鏡標本固定實驗
實驗方法原理 實驗步驟 1. 血管灌注固定固定效果最好，能使超微結構得到很好的保存。灌注裝置由加壓氣球、壓力表、三通接頭和連接管道組成。不同的組織器官必須選擇合適的灌注壓力，詳見有關書籍。灌注固定一般維持 10～15 min。然后用相同的固定液繼續浸泡固定 2～4 h。2. 浸泡固定組織塊切小后立即
酶免疫技術抗體的酶標記方法
用于酶免疫技術的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩定;反應產物易于顯現;能商品化生產。目前酶免疫技術檢測中常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和堿性磷酸酶(AP),其次還有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和蘋果酸脫氫酶等。由于辣根過氧化
非標記抗體免疫電鏡的操作步驟
1．經典法?（1）將被檢病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀釋的特異性免疫?血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃過夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min離心90min。（4）吸去上清，將離心管口倒置于濾紙上，吸去殘留液體。（5）沉淀物中加少量H
免疫電鏡膠體金標記法2
（4）膠體金與蛋白A的結合和純化，依上法測得所需的比例超過10%，即每30ml膠體中加入2mg蛋白A，5min后，加入0.3ml PEG作為穩定劑，然后以15000r/min離心45min（不同方法制備的金離心速度不同），略帶紅色的松散的復合物沉淀即為PAg復合物。小心棄去上清液，加入PBS沖洗
免疫電鏡膠體金標記法1
金標法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質，使其與抗體相吸附，從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時，在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色，不需加外進行染色。在電鏡水平，金顆粒具有很高的電子密度，清晰可辨。因此，免疫電鏡膠體金標
免疫電鏡術的技術方法介紹
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色，再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
免疫電鏡技術關鍵的幾個問題
免疫電鏡技術關鍵的幾個問題免疫電鏡集電子顯微技術與免疫細胞化學技術于一體，能顯示抗原或抗體在細胞超微結構水平的位置，已成為當今生物醫學領域的一項重要研究手段。由于免疫電鏡制作過程長，操作程序煩鎖，因此，要得到滿意的免疫金染色切片，必須在關鍵環節上給予注意，以下我們就免疫電鏡染色技術中的幾個問題進行探
免疫電鏡技術關鍵的幾個問題
免疫電鏡技術關鍵的幾個問題 免疫電鏡集電子顯微技術與免疫細胞化學技術于一體，能顯示抗原或抗體在細胞超微結構水平的位置，已成為當今生物醫學領域的一項重要研究手段。由于免疫電鏡制作過程長，操作程序煩鎖，因此，要得到滿意的免疫金染色切片，必須在關鍵環節上給予注意，以下我們就免疫電鏡染色技術中的幾
非標記抗體免疫電鏡實驗——快速法(瓊脂擴散法)
實驗方法原理標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織
標記的免疫技術
免疫技術是利用抗原抗體反應進行的檢測方法，即應用制備好的特異性抗原或抗體作為試劑，以檢測標本中的相應抗體或抗原。它的特點是具有高度的特異性和敏感性。如將試劑抗原或試劑抗體用可以微量檢測的標記物（例如放射性核素、熒光素、酶等）進行標記，則在與標本中的相應抗體或抗原反應后，可以不必測定抗原抗體復合物
標記的免疫技術
免疫技術是利用抗原抗體反應進行的檢測方法，即應用制備好的特異性抗原或抗體作為試劑，以檢測標本中的相應抗體或抗原。它的特點是具有高度的特異性和敏感性。如將試劑抗原或試劑抗體用可以微量檢測的標記物（例如放射性核素、熒光素、酶等）進行標記，則在與標本中的相應抗體或抗原反應后，可以不必測定抗原抗體復合物
鐵蛋白免疫電鏡實驗
鐵蛋白免疫可應用于：（1）檢測抗原；（2）定位細胞內鐵蛋白抗體位置。實驗方法原理免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體，再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查，觀察到鐵蛋白抗體所在的位置，即抗原所在。實驗材料馬脾鐵蛋白試劑、試劑盒硫酸銨硫酸鎘雙異氰酸鎘二甲苯硼鹽酸緩沖液硫酸銨液?PBS蒸餾水儀器、耗材
鐵蛋白免疫電鏡實驗
實驗方法原理 免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體，再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查，觀察到鐵蛋白抗體所在的位置，即抗原所在。實驗材料 馬脾鐵蛋白試劑、試劑盒 硫酸銨硫酸鎘雙異氰酸鎘二甲苯硼鹽酸緩沖液硫酸銨液 PBS蒸餾水儀器、耗材 離心機顯微鏡微孔濾膜實驗步驟 一、材料與試劑準備?1. ?馬
免疫球蛋白標記技術_酶標記抗體
免疫標記技術是用特定的物質標記抗原或抗體進行的抗原抗體反應。可借助各種儀器觀察結果或進行自動化測定，可在細胞、亞細胞、超微結構及分子水平上，對抗原抗體反應進行定性和定位研究；或應用各種液相和固相免疫分析方法，對液體中的抗原、半抗原或抗體進行定性和定量測定。實驗方法原理酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗
免疫電鏡膠體金標記法操作大全
金標法是Faulk和Taylor(1971)提出的，并首先用于免疫電鏡。它是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質，使其與抗體相吸附，從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原?反應時，在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色，不需加外進行染色。在電鏡水平，金顆粒具有很高的電子密度，清晰可辨。因此，免疫電鏡膠體金
電鏡免疫膠體金―銀法染色技術
免疫膠體金―銀染色(immunogold-sliverstaining)技術系20世紀80年代Holgate將免疫 金染色和銀顯影方法結合而建立的一種新型檢測技術，亦可用于電鏡包埋前染色。其基本原理是先進行免疫膠體金染色標記抗原，使其結合在組織細胞抗原所在位置，然后進行物理顯影，當顯影劑中的對
關于免疫電鏡法的相關介紹
免疫電鏡法是指可在分子水平對細胞器等超微結構中的抗原組分進行定位的一種電子顯微鏡檢測技術。電子顯微鏡，簡稱電鏡或電顯，是使用電子來展示物件的內部或表面的顯微鏡。高速的電子的波長比可見光的波長短（波粒二象性），而顯微鏡的分辨率受其使用的波長的限制，因此電子顯微鏡的分辨率（約0.2納米）遠高于光學顯