免疫電鏡相關技術實驗——酶標記免疫電鏡技術
實驗方法原理該技術是以酶為抗原—抗體反應的標記物，在不改變抗原抗體的免疫反應特異性，亦不降低酶活性條件下，與相應底物作用后形成不溶性的反應物。在電鏡下形成為電子散射力強的終末產物。用于免疫電鏡標記的酶有辣根過氧化物酶 (HRP)堿性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的是 HRP 。實驗材料病毒試劑、試劑盒酶標抗體儀器、耗材電子顯微鏡實驗步驟（一）在酶標記免疫電鏡檢查中較常碰到的非特異性染色及其清除方法：1. 基底染色：某些組織、細胞常帶正電荷，而抗體分子則帶負電荷。由于靜電吸引作用，在組織和細胞中會出現非特異性抗原所在部位的抗原抗體復合物，造成非特異性染色，稱為基底染色。最易造成基底染色的有膠原纖維、結締組織和變性壞死的細胞等。防止出現基底染色的方法是在用第一抗體孵育前，先用20%制備第二抗體的同種動物正常血清或2%牛血清白蛋白溶液對待檢的組織或細胞孵育30 min。這樣可明顯地減少基底染色。用于......閱讀全文
鐵蛋白免疫電鏡技術原理和操作步驟
實驗概要本文介紹了鐵蛋白免疫電鏡技術的原理、材料試劑和操作方法等。實驗原理免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體，再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查，觀察到鐵蛋白抗體所在的位置，即抗原所在。主要試劑1．馬脾鐵蛋白2．硫酸銨3．硫酸鎘4．雙異氰酸鎘二甲苯(Metaxylene dlisocyante
鐵蛋白免疫電鏡技術原理和操作步驟
實驗概要本文介紹了鐵蛋白免疫電鏡技術的原理、材料試劑和操作方法等。實驗原理免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體，再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查，觀察到鐵蛋白抗體所在的位置，即抗原所在。主要試劑1．馬脾鐵蛋白2．硫酸銨3．硫酸鎘4．雙異氰酸鎘二甲苯(Metaxylene dlisocyante
免疫電鏡術
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色，再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
免疫酶細胞化學實驗技術
免疫酶細胞化學免疫酶細胞化學是免疫細胞化學（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗體特異反應存在的前提條件下，借助于酶細胞化學的手段，檢測某種物質（抗原/抗體）在組織細胞內存在部位的一門新技術：即預先將抗體與酶連結，再使其與組織內特異抗原反應，經細胞化學染色
免疫標記技術介紹
免疫標記技術是指將抗原抗體反應與標記技術相結合，將已知的抗體或抗原標記上示蹤物質，通過檢測標記物，間接測定抗原-抗體復合物的一類實驗方法。常用的標記物有酶，熒光素，放射性核素，化學發光物質及膠體金等。
標記免疫分析技術概述
一、概要 定義：應用廣泛、先進的免疫分析技術，是生物活性物質分析方法的新領域；基本技術是將多種標記示蹤技術和高度靈敏性和醫學免疫學抗原抗體反應的高度特異性相結合的分析技術。 特點：靈敏度高，特異性強，重復性好，準確性高，操作簡便，易于自動化商品化。 發展：放射免疫分析，免疫放射分析，
標記免疫分析技術2
四、發光免疫分析：發光免疫分析：直接用發光物質標記抗原或抗體生物的發光劑：熒火蟲熒光素（酶催化發光）化學的發光劑：魯米那、吖啶脂等在有過氧化氫的弱堿溶液中即可迅速發光。美國CHIRON公司生產的ACS-180使用類均相的包被抗體的磁性微粒，擴大了反應面，加速了免疫反應，又應用吖啶脂作標記的化學發光分
標記免疫分析技術概述
一、概要?定義：應用廣泛、先進的免疫分析技術，是生物活性物質分析方法的新領域；基本技術是將多種標記示蹤技術和高度靈敏性和醫學免疫學抗原抗體反應的高度特異性相結合的分析技術。?特點：靈敏度高，特異性強，重復性好，準確性高，操作簡便，易于自動化商品化。?發展：放射免疫分析，免疫放射分析，酶標記免疫分析，
概述標記的免疫技術
免疫技術是利用抗原抗體反應進行的檢測方法，即應用制備好的特異性抗原或抗體作為試劑，以檢測標本中的相應抗體或抗原。它的特點是具有高度的特異性和敏感性。如將試劑抗原或試劑抗體用可以微量檢測的標記物（例如放射性核素、熒光素、酶等）進行標記，則在與標本中的相應抗體或抗原反應后，可以不必測定抗原抗體復合物
標記免疫分析技術1
一、標記分析技術概述1959年，美國學者Yalow和Berson建立了放射免疫分析技術，這種技術以免疫反應的特異性，和放射性同位素標記的靈敏性顯示了其在微量檢測方面的優勢，吸引著各國的生物醫學工作者。標記免疫分析技術進入了一個嶄新的時期。從而使免疫分析，從定性分析和半定量分析走向了定量分析。醫學檢測
免疫電鏡膠體金標記法（簡稱金標法）
1、 包埋后染色 (超薄切片的金標記法)（1）超薄切片厚50～70nm左右，載于200～300網孔的鎳網上；（2）滴1%的H2O2液1滴于蠟板上，將網的載片面輕浮于液滴上10min至1h；（3）雙蒸水洗3次，每次10分鐘。第1、2次洗法如（2），浮于液面上，第3次以盛雙蒸水的注射器沿鎳網面沖洗，水流
電鏡原位雜交技術實驗
實驗方法原理?從理論上講，前包埋原位雜交技術的敏感性高于后包埋原位雜交技術，因為前者可觀察到來自整個切片厚度的信號。但是，探針并不一定能穿透整個切片厚度，特別是用較長的探針。為了增加穿透性，經常應用凍融法或者蛋白酶和去污劑處理，而這樣做會導致一些胞內成分如核糖體的丟失，嚴重時會造成超微結構的形態改變
電鏡原位雜交技術實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 從理論上講，前包埋原位雜交技術的敏感性高于后包埋原位雜交技術，因為前者可觀察到來自整個切片厚度的信號。但是，探針并不一定能穿透整個切片厚度，特別是用較長的探針。為了增加穿透性，經常應用凍融法或者蛋白酶和去污劑處理，而這樣做會導致
電鏡原位雜交技術實驗
電鏡原位雜交實驗可以用于：（1）研究特定核苷酸序列的亞細胞定位；（2）許多研究者已經從光學顯微觀察擴展到對超微結構的觀察。（3）特別是利用地高辛或生物素作為報告分子的非放射性探針，不必像放射性探針那樣需要長時間暴露，因此整個過程可以在 24 h 內完成。實驗方法原理從理論上講，前包埋原位雜交技術的敏
酶免疫標記技術（ELISA）基本原理
酶免疫標記技術（ELISA）基本原理：指酶標記抗體或酶標記抗體進行的抗原抗體反應，然后通過酶與底物產生顏色反應，用于定量測定。
免疫酶細胞化學實驗技術4
三、ICC在細胞功能研究中的應用 形態學研究目的之一是揭示組織細胞結構特征及其功能意義。利用ICC顯示給與細胞增殖標記物，是組織細胞學研究中形態和功能相結合的重要手段之一。目前常用的細胞增殖標記物有4種，Brdu (5—bromo—2--deoxyuridine), DNA polymerase
免疫酶細胞化學實驗技術3
一、對照實驗 1．吸收實驗 應用尚無文獻報告的抗血清/自己制備的抗血清進行ICC染色時，需用相應的抗原吸收抗血清后，再孵育標本，判斷結果的可信性（結果應為陰性）。常用的吸收實驗分固相吸收和液相吸收兩種（見本書第一章 ），對于不能形成沉淀，難以用離心沉降法分離的一些小分子多肽類抗原，以固相吸收為佳
免疫酶細胞化學實驗技術2
（四）染色原理及步驟 1．基本原理 酶標抗體與熒光色素標記抗體的染色相同，亦分直接法和間接法。直接法是將酶直接標記在每一抗體上，間接法是將酶標記在第二抗體上，檢測組織細胞內的特定抗原物質。間接法所用的第一抗體是對組織細胞內某種抗原的特異性抗體（80%～90%的抗血清系由家兔制得，而絕大數單克隆
標記免疫分析技術的種類
免疫標記分析技術主要包括：放射物標記、酶標記、發光標記、熒光標記和金標記方法。1 放射物標記分析：用放射物標記抗原或抗體發展的放射免疫分析(radio immunoassay, RIA)是美國科學Yalow和Berson于1959年創立的一種微量分析法,它是將具有高靈敏度的放射性核素示蹤技術和特異性
免疫金標記技術原理
免疫金標記技術原理：膠體金顆粒表面負電荷與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。膠體金對蛋白質有很強的吸附功能，蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面，無共價鍵形成，標記后大分子物質活性不發生改變。金顆粒具有高電子密度的特性。金標蛋白在相應的配體處大量聚集時，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒或肉眼可見紅
放射免疫標記技術
一、放射免疫標記技術放射免疫標記技術是將同位素分析的高靈敏度與抗原抗體反應的特異性相結合，以放射性同位素作為示蹤物的標記免疫測定方法，由于此項技術具有靈敏度高 (可檢測出毫微克(ng)至微微克(pg)，甚至毫微微克(fg)的超微量物質，特異性強(可分辨結構類似的抗原)、重復性強、樣品及試劑用量少
免疫標記技術及其應用
近二十幾年來，免疫學檢測的方法發展很快，特別是在使用標記了的抗原和抗體的分析技術以后，使檢測的敏感性和特異性都大大提高。繼20世紀50年代的免疫熒光(1FA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技術之后，在70年代初期又建立了用酶來標記抗原或抗體的分析技術。 標記免疫技術是將某種可微量測定或超微量
免疫酶標技術
1） 直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色
免疫酶技術介紹
免疫酶技術(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫測定，是通過酶標記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法，其應用范圍極廣。顯示方法是用酶的特殊底物來處理反應后的標本，通過酶催化底物的顯色反應來測定抗原或抗體的存在，以酶標作定量或定性分析。標記酶有辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷
免疫酶標技術
中文名稱免疫酶標技術英文名稱immunoenzymatic technique定 義以酶標記抗體（或抗原），通過相應底物被酶解后的顯色反應，對細胞和組織標本中的抗原-抗體復合體進行定位、定性分析和鑒定的方法。也可根據酶催化底物顯色的深淺程度，定量測定體液標本中待測抗原或抗體的含量。應用學科細胞生物
酶免疫技術分類
酶免疫技術一般分成酶免疫組化技術和酶免疫測定兩大類。酶免疫組化技術與熒光抗體技術相似，酶標記抗體與組織切片上的抗原起反應，然后與酶底物作用，形成有色沉淀物，可以在普通光學顯微鏡下觀察。如酶作用的產物電子密度發生一定的改變，則可用電子顯微鏡觀察，稱為酶免疫電鏡技術。 酶免疫測定根據抗原抗體反應后
免疫酶標技術
免疫酶標技術1）??直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％?H2O2（或1％?H2O2?甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘
免疫酶標技術
實驗方法原理 先將酶與抗體結合形成酶標抗體，然后和相應的抗原反應，使抗原抗體復合物上帶有酶分子，再與酶的底物H2O2—DAB（3’3—二胺荃聯苯胺）發生顯色反應，在顯微鏡下觀察，根據顏色產物檢測相應抗原。實驗材料 抗體試劑、試劑盒 PBSH2O2血清儀器、耗材 顯微鏡實驗步驟 1. ?標本固定；2.
免疫酶技術介紹
免疫酶技術(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫測定，是通過酶標記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法，其應用范圍極廣。顯示方法是用酶的特殊底物來處理反應后的標本，通過酶催化底物的顯色反應來測定抗原或抗體的存在，以酶標作定量或定性分析。標記酶有辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷
免疫酶技術的技術原理
免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性與酶的高效催化作用有機結合的一種方法。它以酶作為標記物，與抗體或抗原聯結，與相應的抗原或抗體作用后，通過底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量，亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學技術。目前應用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗（ELISA），它是使抗