免疫球蛋白G(IgG)的純化

免－疫－球－蛋－白－M(IgM)和－免－疫－球－蛋－白－D(IgD)－的純化

實驗步驟基 本 方 案 1 用透析和凝膠過濾層析法純化 IgM此 法 純 化 的 IgM 可達到較好純度，可用于酶解、異 硫 氰 酸 鹽 熒 光 素（FITC) 標記 、生物素標記或放射性標記。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)腹 水 或 單 克 隆 抗 體（MAb) 上 清（單 元 1.4)

免－疫－球－蛋－白－M(IgM)和－免－疫－球－蛋－白－D(IgD)－的純化實驗

實驗步驟備 選 方 案 1 硫 酸 銨 沉 淀 法 純 化 IgM此法適用于多數 IgM 抗體，尤其是一些在水中不能形成沉淀的 IgM 抗體。附 加 材 料（其 他 材 料 見 基 本 方 案 1 )飽和硫酸銨（SAS)硫酸銨結晶（CAS)硼酸緩沖液，可選備 選 方 案 2 甘 露 聚 糖 結 合

免－疫－球－蛋－白－融－合－蛋－白－的－構－建

實驗步驟?基 本 方 案 1 免疫球蛋白融合蛋白的構建材 料編碼靶基因的 D N A展開

免－疫－球－蛋－白－G－(IgG)－片－段－的－水－解

一個新的抗體需要片段化的時候往往要進行摸索性的試驗。選擇反應時間的時候寧可保留部分抗體不被完全降解，這樣可以避免蛋白酶過分裂解后導致抗體結合位點的破壞 。實驗步驟木 瓜 蛋 白 酶 水 解 IgG 成 Fab 片段摸索性試驗此 法 適 用 于 小 鼠（任何亞類）、大鼠、人 、山羊、綿羊、馬 、雞 、

免－疫－復－合－物－方－法－檢－測－酪－氨－酸－蛋－白－激－酶

實驗步驟基 本 方案 酪 氨酸 蛋白 激酶 的免 疫 沉淀 和自 身 磷 酸化 檢 測以下步驟可以釆用淋巴或非淋巴細胞、原代細胞或培養的細胞系、活化或非活化的細胞。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)待檢測的細胞 冰預冷的 PBS含蛋白酶抑制劑的 I X 細 胞 裂 解 液（新鮮配置并于冰上保存

蛋白質分離和分析——免－疫－印－跡－和－免－疫－檢－測

實驗步驟基 本 方 案 1 液體容器中的蛋白質印跡材 料待分析樣品標準分子質量蛋白質，預 染 型（Sigma 或 Bio-Rad) 或 生 物 素 化 型（Vector labs 或Sigma)轉移緩沖液無粉手套Scotch-Brite 墊 片（3M ) 或類似海綿Whatman 3M M 濾紙或類

酶－聯－免－疫－吸－附－實－驗2

十 字 交 叉 連 續 稀 釋 分 析 法 （criss-cross serial-dilution analysis) 測定試劑最適濃度實驗步驟展開

抗－體－可－變－區－（－V－區）的克隆、表達和修飾

基于 PCR 的克隆方案利用了可變區中框架區和先導區的保守序列，盡管用框架區中的保守序列可合成引物，用于克隆可變區，但會引起框架區中氨基酸的改變，從而影響抗原結合。因此，用保守的疏水先導序列合成引物是比較好的方案。實驗步驟基本方案 1 通 過 使 用 冗 余 引 物 克 隆 和 表 達 免 疫 球

T－細－胞－中－絲－裂－原－活－化－的－蛋－白－激－酶（MAPK)－活性分析

實驗步驟基 本 方 案 1 免疫復合物蛋白激酶測定此方法可用于測定 E R K 、 J N K 和 p38 M A P K 的活性，也可使用針對每個 M A P K組分的商品化抗體。然而，特定的抗體對各組分內特定的亞型會顯示一定的特異性。材 料基本方案 2 固相蛋白激酶法檢測 J N K 活性這種方

蛋白質分離和分析——免－疫－親－和－層－析

詳細闡述利用親和層析分離蛋白質的過程，進行蛋白質分析時，需將此規模縮小至微量離心管中進行免疫沉淀過程，對于單一的蛋白質或由相同亞基組成的蛋白質，經單向凝膠電泳后檢測到單一的 蛋 白 質 條 帶對熒光染色法進行了闡述，它主要用于磷蛋白和糖蛋白的檢測。為了確定蛋白質是否是特異性抗原，可采用相對應的抗體進

翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗（三）

2.2 糖基化糖 基 化 是 一 種 常 見 的 P T M , 并 且 已 經 證 明 能 夠 影 響 酶 的 活 性 、蛋 白 質 定 位 、穩 定 性 、信 號 轉 導 、細 胞 黏 附 和 蛋 白 質 相 互 作 用 (Spiro, 2002k 目 前 已 經 發 現 在 腫 瘤 惡

白球比例偏低什么原因

　　1、白蛋白降低、球蛋白不變。常見的引起白蛋白偏低的原因主要有營養不良、白蛋白是由肝臟合成的，假如有肝病的話，就會使白蛋白的合成減少，另外還有可能就是有腎源性低蛋白血癥，也會使白球比例偏低。　　2、白蛋白不變、球蛋白的值升高。當患有腎臟疾病或自身免疫性肝炎以及類風濕性關節炎時，會使球蛋白升高，從而

白球比例偏低是什么原因

　　白蛋白是由肝實質性細胞合成的，肝臟受損時，白蛋白的合成、細胞內運輸和釋放會發生障礙，引起血清白蛋白減少。球蛋白是由機體免疫器官制造的，當體內有病毒入侵時，就會產生大量的球蛋白，消滅病毒。　　白球比例偏高的原因是什么？白球比偏高可能是由白蛋白增多、球蛋白減少或者是兩者都有變化，只是其中一者的變化幅

Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測（一）

一、蛋白質印跡法蛋白質印跡 (Western Blotting) 法是在混合的復合物中鑒定和定量特定蛋白質的一種有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。這一技術對固定在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白質樣本進行非直接的檢測。在常規的蛋白質印跡中，

包涵體蛋白溶解后的重折疊實驗（三）

5. 高 分 辨 率 的 離 子 交 換 層 析蛋白質經過重折疊和過濾后，最后一步的高分辨率離子交換層析柱用于完成 下 面 5項重要工作。⑴ 濃 縮 蛋 白 質 ( 如 從 600 m L 濃 縮 到 4? 8 m L )(2) 去除變性劑(在流穿液中）(3) 去除次要的雜質(在流穿液中，或是與

翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗3

三、蛋白質的硝化修飾 酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸側鏈的硝化與亞硝化作用構成了蛋白質硝化PT M 的主要部分。這些加成反應由發育、氧化應激及衰老過程中產生的活性氮介導。活性氮的增加是由一氧化氮和活性氧的過度反應或調控紊亂造成的（Yeo et al.，2008)。活性氮和活性氧能夠靶向于DN

廢棄動植物油生產純生物柴油免消費稅

　　財政部、國家稅務總局聯合下發近日《關于對利用廢棄的動植物油生產純生物柴油免征消費稅的通知》(以下簡稱《通知》)，明確對利用廢棄動植物油脂生產的純生物柴油免征消費稅。　　生物柴油是指由動植物油脂與甲醇(或乙醇)在催化劑作用下制成的可代替石化柴油的再生性柴油燃料。目前，

T－C－R－庫－的－抗－原－譜－/－免－疫－掃－描－技－術－分－析

實驗步驟基 本 方 案 1 人 和 小 鼠TCR受體庫多樣性的免疫掃描技術分析材 料展

干細胞的鑒定實驗——免－疫－電－鏡－膠－體－金－標－記－技－術

實驗步驟免 疫 電 鏡 膠 體 金 標 記 技 術免疫電鏡技術是利用抗原抗體特異性結合的原理，在細胞超微結構水平上定位、定性和定量，原位顯示抗原大分子的技術。 1971 年 Faulk 等將膠體金標記抗體技術應用到電鏡中，開始了免疫電鏡膠體金標記技術。該技術的優點是：膠體金顆粒致密，易于辨認 ；定位

重大新進！Sicence：腎癌驅動的一種新蛋展白

　　在一項新的研究中，來自中國同濟大學、復旦大學、美國北卡羅來納大學、哈佛醫學院、德克薩斯大學MD安德森癌癥中心、范德堡大學醫學中心、新加坡基因組研究所、新加坡細胞與分子生物學研究所、新加坡國立癌癥中心和杜克-新加坡國立大學醫學院的研究人員發現了一種針對具有一種相同遺傳變異的腎癌的潛在治療靶點。科學

Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測（三）

四、化學發光信號4.1 信號捕捉雖然化學發光蛋白質印跡法十分常用，但是對于難于捕獲的信號的捕捉卻很棘手。蛋白質印跡法要用到一系列需要技巧的技術，因此許多因素都會導致無法捕捉到信號。由于變量較多 (表 33. 2)，問題印跡的問題診斷和排除就如同大海撈針一樣困難。傳統的方案在檢測某一個蛋白質時通常

Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測2

四、化學發光信號4.1 信號捕捉雖然化學發光蛋白質印跡法十分常用，但是對于難于捕獲的信號的捕捉卻很棘手。蛋白質印跡法要用到一系列需要技巧的技術，因此許多因素都會導致無法捕捉到信號。由于變量較多 (表 33. 2)，問題印跡的問題診斷和排除就如同大海撈針一樣困難。傳統的方案在檢測某一個蛋白質時通常都是

酶－聯－免－疫－吸－附－實－驗_夾－心－ELISA－法檢測同種型

實驗步驟 展

酶－聯－免－疫－吸－附－實－驗_夾－心－ELISA－法檢測同種型

實驗步驟展

免疫復合物方法檢測酪氨酸蛋白激酶

基 本 方案 酪 氨酸 蛋白 激酶 的免 疫 沉淀 和自 身 磷 酸化 檢 測以下步驟可以釆用淋巴或非淋巴細胞、原代細胞或培養的細胞系、活化或非活化的細胞。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)待檢測的細胞 冰預冷的 PBS含蛋白酶抑制劑的 I X 細 胞 裂 解 液（新鮮配置并于冰上保存）含蛋白

Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測

實驗步驟 一、蛋白質印跡法 蛋白質印跡 (Western Blotting) 法是在混合的復合物中鑒定和定量特定蛋白質的一種有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。這一技術對固定在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯

Western－Blot的過程與優化，著重于化學發光檢測

實驗步驟一、蛋白質印跡法蛋白質印跡 (Western Blotting) 法是在混合的復合物中鑒定和定量特定蛋白質的一種有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。這一技術對固定在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白質樣本進行非直接的檢測。在常規的蛋白質印跡中，蛋白

海洋生命蛋，做“中國好蛋”

　　禽蛋是人們日常生活中重要的營養來源，歷來受到高度認可和廣泛喜愛。我國也是禽蛋生產和消費的第一大國，年人均占有量連續二十多年居世界第一，但是蛋的品質長期以來卻沒有大幅度地提升。　　近日，中國科學院海洋研究所研究員劉建國設計開發了海洋生命蛋。他把海洋生物的活性成分先通過多種生物富集積累起來，再經過禽

翻譯后修飾蛋白質的定性和定量實驗2

二、用 于 鑒 定 P T M 的富 集 技 術2.1 磷酸化絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸殘基的可逆磷酸化也許是研究最為深人的 PT M 。蛋白質磷酸化信號網絡介導細胞對與不同的應激因子、生長因子、細胞因子以及細胞間相互作用作出響應。憐酸化還影響多種細胞進程，如增殖、凋亡 、遷移 、轉錄和蛋白質翻譯（W

一圖了解：標準化戰“疫”舉措