胞內晶體蛋白基因的釀酒酵母真核表達
實驗概要本實驗將釀酒酵母作為胞內晶體蛋白的攜帶和表達宿主，同時，作為可能的營養體喂養海洋線蟲P. redivivus將所表達的目的蛋白導入線蟲機體，觀察線蟲的生長、發育、繁殖或是死亡情況，探討胞內晶體蛋白對昆蟲病原線蟲以外的線蟲是否具有營養作用。為此，首先構建一種重組大腸桿菌，其所攜帶的重組質粒能夠在大腸桿菌細胞中復制，在酵母細胞中表達，即大腸桿菌－釀酒酵母穿梭載體。本實驗采用了不帶ATG起始位點的pYES2.1/V5-His-TOPO質粒，進行釀酒酵母重組載體的構建，研究非融合目的蛋白在酵母細胞中復制或表達的狀況，為利用該重組釀酒酵母作為餌料飼養海洋線蟲P. redivivus提供材料。主要試劑1. 主要試劑(盒) 1) pYES2.1 TOPO TA Expression Kit，美國Invitrogen公司； 2) S. c. EasyComp Trans......閱讀全文
胞內晶體蛋白基因的釀酒酵母真核表達
實驗概要本實驗將釀酒酵母作為胞內晶體蛋白的攜帶和表達宿主，同時，作為可能的營養體喂養海洋線蟲P. redivivus將所表達的目的蛋白導入線蟲機體，觀察線蟲的生長、發育、繁殖或是死亡情況，探討胞內晶體蛋白對昆蟲病原線蟲以外的線蟲是否具有營養作用。為此，首先構建一種重組大腸桿菌，其所攜帶的重組質粒能夠
真核基因表達載體的構建
提高目的基因在哺乳動物細胞中表達的策略：1、DNA水平：增加基因拷貝數(1)高拷貝載體；（2）基因共擴增；2、轉錄水平：利用強啟動子、增強子，可誘導啟動子，如CMV、Tet；3、翻譯水平：優化翻譯起始序列和非編碼區序列。本篇文章來源于網絡，如有異議請聯系我們，我們將在3個工作日內作出處理。
真原核基因表達的區別
1、原核生物染色體為一個基因連鎖群，而真核為兩個或以上，當一個有缺陷時另一個可以補充；2、原核生物染色體不與組蛋白結合，省去的解聚的步驟；3、原核生物的轉錄與翻譯都在同一區間，而真核是分開的；4、真核生物基因內有內含子，mRNA會有一個自我剪接的修飾過程，原核生物則不會；5、真核生物蛋白質的翻譯后修
釀酒酵母胞內代謝通量調控機制方面獲進展
細胞內的代謝通量受胞內基因表達、轉錄調控、蛋白修飾、別構效應等調控體系共同作用。然而，目前關于細胞內代謝通量的詳細調控機制存在較多未知，例如代謝通量的變化到底在多大程度上依賴基因表達以及有多大程度通過酶活力調控。釀酒酵母的Crabtree效應是重要的代謝調控表型，但該表型下各種調控因子對胞內代謝
畢赤酵母表達系統能在釀酒酵母里表達么
不太可能，Invitrogen的商業化畢赤酵母表達系統屬于甲醇酵母表達系統，用的是畢赤酵母獨有的AOX1啟動子，由甲醇誘導；釀酒酵母用的啟動子大多用的是GAPDH或Gal啟動子等，由葡萄糖和半乳糖誘導。雖然兩種菌株有很多基因具有較高的同源性，但不能通用。建議使用畢赤酵母表達系統，釀酒酵母表達量低，誘
瞬時轉染真核基因表達調控技術
調節瞬時轉染基因的表達l??????四環素作為哺乳動物細胞中可誘導基因表達的調控物階段一：pTet-tTAk穩定轉染成纖維細胞培養和轉染細胞1.??????在DMEM完全培養液中培養貼壁細胞。轉染前一天，把細胞換到含有0.5μg/ml四環素-HCl（四環素）的DMEM完全培養液中。每個10 cm培養
瞬時轉染真核基因表達調控技術
調節瞬時轉染基因的表達*四環素作為哺乳動物細胞中可誘導基因表達的調控物階段一：pTet-tTAk穩定轉染成纖維細胞培養和轉染細胞1.?在DMEM完全培養液中培養貼壁細胞。轉染前一天，把細胞換到含有0.5μg/ml四環素-HCl（四環素）的DMEM完全培養液中。每個10 cm培養皿中加入足量細胞，使轉
關于釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)表達系統的介紹
釀酒酵母(Saecharomycescerevisiae)在釀酒業和面包業的使用已有數千年的歷史，被認為是GRAS(generally recognized as safe)生物，不產生毒素，已被美國FDA確認為安全性生物，但釀酒酵母難于高密度培養，分泌效率低，幾乎不分泌分子量大于30 kD的外
真核生物與原核生物基因表達調控的差異
原核生物同一群體的每個細胞都和外界環境直接接觸，它們主要通過轉錄調控，以開啟或關閉某些基因的表達來適應環境條件（主要是營養水平的變化），故環境因子往往是調控的誘導物。而大多數真核生物，基因表達調控最明顯的特征是能在特定時間和特定的細胞中激活特定的基因，從而實現“預定”的，有序的，不可逆的分化和發育過
真核生物基因表達調控有哪些環節
可分為三種主要途徑環節：1、遺傳調控（轉錄因子與靶標基因的直接相互作用）；2、調控轉錄因子與轉錄機制相互作用，3、表觀遺傳調控（影響轉錄的DNA結構的非序列變化）。轉錄調控通過轉錄因子直接調控靶標DNA表達是最簡單和最直接的轉錄調控改變轉錄水平的方法。基因的編碼區周圍通常都具有幾個蛋白質結合位點，具
目的基因在真核系統中的表達及細胞內的定位實驗
實驗方法原理 將氯化鈣，DNA和磷酸緩沖液混合，形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒（沉淀）。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。實驗材料 真核細胞試劑、試劑盒 HBSCaCl2TE質粒DNA儀器、耗材 CO2培養箱實驗步驟 1. ?轉染的前一天在35 mm培養皿中植入
真核表達系統的特點
真核表達系統的特點是蛋白翻譯后加工機會多，甚至可被改造成人源型；真核細胞易被轉染，具有遺傳穩定性和可重復性；產物可被分泌，提純簡單，成本低。
目的基因在真核系統中的表達及細胞內的定位實驗1
磷酸鈣法瞬時轉染法實驗方法原理將氯化鈣，DNA和磷酸緩沖液混合，形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒（沉淀）。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。實驗材料真核細胞試劑、試劑盒HBSCaCl2TE質粒DNA儀器、耗材CO2培養箱實驗步驟1. ?轉染的前一天在35 mm培養
畢赤酵母表達系統的特點
自從1987年Cregg等首次用巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris）作為宿主表達外源蛋白以來,作為一種新的高效的表達系統，畢赤酵母越來越引起人們的重視，到1995年，已有四十多種外源蛋白在該宿主菌中獲得表達。而最近幾年每年報道的在畢赤酵母中表達的外源基因就有幾十種，且一年比一年多，與其它
目的基因在真核系統的表達及細胞內的定位實驗—熒光法
實驗方法原理綠色熒光蛋白（Green fluorecent protein，GFP）最早是在海洋生物水母（Aequorea victoria）中發現的。GFP 蛋白的多肽鏈中含有特殊的生色團結構，可在紫外光源下發出穩定的綠色熒光，而且這種熒光發射無需外加輔助因子或進行任何特殊處理。GFP 標記分子最
酵母質粒載體的基本信息介紹
酵母質粒載體是基因表達載體的一種,既可以在大腸桿菌中、又可以在酵母系統中進行復制與擴增,所以也稱為穿梭載體。它分為整合載體和自我復制載體兩類。①整合載體：它帶有一個酵母URA3標志基因和大腸桿菌的復制和報告基因。由于質粒DNA與酵母基因組DNA之間發生了同源重組,在轉化的細胞中可以檢測到質粒的整
重組蛋白真核表達系統與原核表達系統的區別
重組蛋白真核表達采用原核表達系統進行研究，主要方法是將已克隆到目的基因DNA的片段的載體轉化到細菌中，通過IPTG誘導和終純化獲得所需的目的蛋白。其優點是可以在短時間內獲得基因表達產物，所需成本相對較低。? 目前的表達系統各有利弊，但一般理想的表達系統滿足以下幾點：一是特異性，不受其他內源性因素
畢赤酵母表達（pichia－pastoris－expression－）實驗手冊（1）
大腸桿菌表達系統最突出的優點是工藝簡單、產量高、周期短、生產成本低。然而，許多蛋白質在翻譯后，需經過翻譯后的修飾加工，如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等過程才能轉化成活性形式。大腸桿菌缺少上述加工機制，不適合用于表達結構復雜的蛋白質。另外，蛋白質的活性還依賴于形成正確的二硫鍵并折疊成高級結構，在
真核生物基因表達調控發生在哪些水平上
真核生物基因表達的調控遠比原核生物復雜，可以發生在DNA水平、轉錄水平、轉錄后的修飾、翻譯水平和翻譯后的修飾等多種不同層次（真核生物基因表達中可能的調控環節）。但是，最經濟、最主要的調控環節仍然是在轉錄水平上。DNA水平上的調控是通過改變基因組中有關基因的數量、結構順序和活性而控制基因的表達。這一類
概述釀酒酵母的基因組序列
1996年6月，在國際互聯網的公共數據庫中公布了釀酒酵母的完整基因組順序，它被稱為遺傳學上的里程碑。因為首先，這是人們第一次獲得真核生物基因組的完整核苷酸序列；其次，這是人們第一次獲得一種易于操作的實驗生物系統的完整基因組。 [10] 在釀酒酵母測序計劃開始之前，人們通過傳統的遺傳學方法已確定
真核生物基因表達的dna水平調控包括什么方式
1、轉錄起始水平。這一環節是調控的最主要環節，由對基因轉錄活性的調控來完成，包括基因的空間結構、折疊狀態、DNA上的調控序列、與調控因子的相互作用等。a.活化染色質：在真核生物體內，RNApol與啟動子的結合受染色質結構的限制，需通過染色質重塑來活化轉錄。常態下，組蛋白可使DNA鏈形成核小體結構而抑
甲醇酵母基因表達系統
1 甲醇酵母表達系統的特點 1.1 宿主 七十年代巴斯德畢赤酵母曾被用于生產單細胞蛋白（SCP），有很好的發酵基礎，菌體密度可達100g/L干重。其生長培養液的組分包括無機鹽、微量元素、生物素、氮源和碳源，廉價而無毒。它能在以甲醇為唯一碳源的培養基中快速生長，其中醇氧化酶AOX——甲醇代謝途徑
釀酒酵母在釀酒工業上的應用
酵母菌將葡萄糖、果糖、甘露糖等單糖吸入細胞內，在無氧的條件下，經過內酶的作用，把單糖分解為二氧化碳和乙醇，此作用即發酵。 釀酒酵母乙醇生成途徑：葡萄糖是很容易利用的碳源，許多微生物都能夠利用葡萄糖發酵生產乙醇。酵母菌在厭氧條件下進行葡萄糖乙醇發酵，發酵過程包括葡萄糖酵解和丙酮酸的無氧降解兩大生
上海生科院解析真核生物基因表達調控的新機制
2月29日，Nature Plants 雜志在線發表了中國科學院上海生命科學研究院植物逆境生物學研究中心何躍輝課題組（植物環境表觀遺傳學實驗室）題為Coupling of histone methylation and RNA processing by the nuclear mRNA Cap
釀酒酵母在生物科研上的應用
因釀酒酵母與同為真核生物的動物和植物細胞具有很多相同的結構，又容易培養，酵母被用作研究真核生物的模式生物。自1996年以來，釀酒酵母作為真核模式生物已經完成了全基因組測序、轉錄組分析、蛋白質相互作用網絡圖以及代謝功能圖譜等工作。在眾多的模式生物中，對釀酒酵母的研究最為深入，且最為廣泛地被運用到各
“人造生命”－我國科學家“創造”世界首例單染色體真核細胞
日前，中科院分子植物科學卓越創新中心/植物生理生態研究所合成生物學重點實驗室覃重軍研究團隊與合作者，在國際上首次人工創建了單條染色體的真核細胞：把釀酒酵母細胞里原本天然的16條染色體，人工融合成單條染色體，且仍具有正常的細胞功能。既改變了染色體的結構，又仍保有生命的“活性”，人工蛻變出一個全新細
真核表達文庫的構建與篩選實驗
實驗材料 宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體包裝提取物電轉化感受態大腸桿菌試劑、試劑盒 限制性內切核酸酶緩沖液限制性內切核酸酶通過 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文庫含適當抗生素的 Terrific 球脂平板含適當抗生素的 Terrific 肉湯培養基儀器、耗材 cDNA 合成試劑盒實驗步驟
真核表達文庫的構建與篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 宿主細胞 質粒或λ噬菌體表達載體 包裝提取物 電轉化感受態大腸桿菌 試劑、試劑盒
真核表達文庫的構建與篩選實驗
類似方案 1、方案 2 描述了在真核表達載體上進行 cDNA 文庫構建與篩選的方法, 流程分為以下兩個階段：1. 在真核表達載體上構建 cDNA 文庫；2. 在真核表達載體上構建的 cDNA 文庫的篩選。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。實驗材料宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體
真核表達載體pcDNA3.1GFP的構建
【原理】引物中設計入限制酶位點：由于PCR引物的5'末端可以增加一些非互補堿基，因此可以在兩引物的5'末端設計單限制酶或雙限制酶切位點。這樣得到的PCR產物用限制酶消化產生粘性末端，即可與有互補粘端的載體DNA重組。這種克隆方法效率較高，且當兩引物中設計不同酶切位點時，可有效地定向克