λ噬菌體DNA提取
λ噬菌體是最早使用的克隆載體，λ噬菌體的基因組是一長度約為50kb的雙鏈DNA分子，它在宿主細胞有兩種生活途徑，其一是裂解生長，環狀DNA分子在細胞內多次復制，合成大量噬菌體基因產物，裝配成噬菌體顆粒，裂解宿主菌再進行下一次感染；其二是溶源性生長，即感染細胞內λ噬菌體DNA整合到宿主菌染色體DNA中與之一起復制，并遺傳給子代細胞，宿主細胞不裂解。平板培養時，裂解生長形成噬斑。液體培養時，裂解生長使菌液中宿主菌最后全部被裂解而釋放出大量的噬菌體顆粒。經過改造的λ噬菌體克隆位點可插入幾到幾十kb的外源DNA。許多cDNA和基因組文庫是以λ噬菌體作為克隆載體構建的。因此，在經文庫篩選得到目的克隆后，我們常常需要利用λ噬菌體裂解生長的特點，培養獲得大量的噬菌體顆粒，并提取λ噬菌體DNA來開展進一步的工作。一、試劑準備1. LB液體培養基：胰化蛋白胨（細菌培養用）10g，酵母提取物（細菌培養用）5g，N......閱讀全文
動物DNA提取實驗
實驗方法原理?在濃氯化鈉（1-2 mol/L）溶液中，脫氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核蛋白的溶解度很小，在稀氯化鈉（0.14 mol/L）溶液中，脫氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同濃度的氯化鈉溶液，將脫氧核糖核蛋白和核糖核蛋白從樣品中分別抽提出來。?將抽提得的
細菌DNA提取方案
細菌DNA提取方案：革蘭氏陰性菌，如E.coli，一般有三種可以選擇的方法。一、水煮模板法——主要用于PCR反應1、接種單菌落于LB或腦心平板，連續畫線，37攝氏度培養18－24小時。2、刮取1～2接種環菌苔加入150微升三蒸水中，混勻，100攝氏度煮沸10分鐘。3、12000轉/分鐘 離心10分鐘
DNA－提取小技巧
很多人都有上面這樣的想法吧？其實我當初也這樣的，結果呢？怎么也提不好，一提提了好幾個月呢。DNA 提取還真是說起來容易、做起來難。首先大家得明確一點，DNA 是遺傳信息的載體，獲得高分子量、高純度的 DNA 是你開展后續測序、雜交等實驗的前提。所以，注意了，要高分子量、高純度哦。我相信肯定有很多人一
外周血DNA提取技術
方法一：1. 標本預處理：將1ml EDTA抗凝貯凍血液于室溫解凍后移入5ml離心管中，加入1ml磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻，3500g離心15min,傾去含裂解紅細胞上清。重復一次。用0.7ml DNA提取液混懸白細胞沉淀，37℃水浴溫育1h。2. 消化：上述DNA提取液混懸白細胞，37℃水浴
質粒DNA提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物質，通過離心除去。
質粒DNA提取技術
實驗概要通過本實驗，學習和掌握堿裂解法提取質粒的方法和技術。實驗原理質粒是基因工程中常用的載體之一。質粒是染色體外小型雙鏈環狀的DNA，大小在1～200kb之間。堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環狀DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們的。在pH值介于12.0～12.5這個狹窄的范圍內，線
質粒DNA提取實驗
堿解法SDS堿裂解法（試劑盒提取）實驗方法原理堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物質，通過離心除去。實驗材料大腸桿菌 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
DNA的提取方法
一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速離心后取上清，所得DNA大小為100-150kb二.甲酰胺解聚法：破碎細胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪于乙醇上，
質粒DNA提取實驗
實驗方法原理?質粒多為一些雙鏈、環狀的DNA分子，是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作，進行遺傳工程改良物種等工作時最主要的DNA載體。?提取質粒的基本步驟分為三步：①細菌的培養和質粒的擴增②細菌菌體的裂解③質粒DNA的純化實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒
DNA的提取實驗
實驗方法原理 酚為有效的蛋白質變性劑，并且飽和的酚與水相有效的分開．因此，在含核酸的樣品加入酚，可將樣品中的蛋白質變性后形成沉淀層，位于水相與有機相的界畫，從而達到純化核酸的目的．但酚不能完全抑制RNA酶的活性，而且酚層中含有10－15%的水,從而溶解一部分poly－（A）RNA。將酚與氯仿聯合使用
DNA提取的原理
原理:1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。2.用冷酒精提取出含雜質較少的DNA。3.DNA在沸水浴時被二苯胺染成藍色。方法步驟:1.提取細胞核物質:順時針方向攪拌，稍快，稍重。5min2.溶解DNA:3.析出含DNA的黏稠物:蒸餾水300mL，逆時針方向攪拌，緩慢4.過濾:取黏稠物5.再溶解:順時
植物DNA提取原理
通常采用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞，由于植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對DNA的抽提產生不利的影響，在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并減少研磨過程中各種酶類的作用。十二烷基肌酸鈉(sarkosyl)、十六烷基三
細菌DNA提取方案
細菌DNA提取方案:革蘭氏陰性菌,如E.coli,一般有三種可以選擇的方法.?一、水煮模板法——主要用于PCR反應1、接種單菌落于LB或腦心平板,連續畫線,37攝氏度培養18－24小時.2、刮取1～2接種環菌苔加入150微升三蒸水中,混勻,100攝氏度煮沸10分鐘.3、12000轉/分鐘離心10分鐘
dna提取實驗步驟
利用核酸溶解于水的性質，將組織細胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液。在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M。加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出。分別用66%，80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最后在空氣中干燥，既得DNA樣品。此法提取的DNA中
DNA提取方法洗滌－DNA（或－RNA）
當裂解物通過硅膠膜進行離心分離,現在所提取的 DNA 或 RNA 應該與柱子結合,雜質、細胞蛋白和多糖應該已經通過了。?但是,膜仍然被殘留的細胞蛋白質和鹽弄臟。如果樣品來自植物,仍然會有多糖,也許一些色素留在膜上,或者如果樣品是血液,膜可能會被染成棕色或黃色。洗滌步驟用于去除這些雜質。通常有兩次洗滌
病毒－DNA－的提取實驗——培養細胞中病毒－DNA－的提取
實驗材料細胞試劑、試劑盒裂解液TE 緩沖液儀器、耗材培養瓶EP管真空泵實驗步驟1. 貼壁培養細胞傾去培養液，加 PBS 洗 2次,加胰蛋白酶消化 (37℃, 5~10 min)后移入Ep管中，2000 r/min 離心 10 min, 棄上清液，用 PBS 懸浮細胞，離心洗滌 2~3次，用 PBS
用蛋白酶K和SDS從大規模培養物中提取λ噬菌體DNA實驗
實驗方法原理 通過一種有效的蛋白酶（如蛋白酶 K ) 的消化作用及隨后的酚：氯仿抽提，就能從大規模制備的 λ 噬菌體中很好地分離到 DNA。該方法也適用于小量（50~100 ml ) 制備物。實驗材料 蛋白酶 K限制性內切核酸酶λ 噬菌體顆粒試劑、試劑盒 氯仿透析緩沖液EDTA乙醇酚酚：氯仿SDS乙
用蛋白酶K和SDS從大規模培養物中提取λ噬菌體DNA實驗
通過一種有效的蛋白酶（如蛋白酶 K ) 的消化作用及隨后的酚：氯仿抽提，就能從大規模制備的 λ 噬菌體中很好地分離到 DNA。該方法也適用于小量（50~100 ml ) 制備物。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理通過一種有效的蛋白酶（如蛋白酶 K ) 的消化作用及隨后的酚：
核酸提取－基因組DNA的提取
?? DNA是遺傳信息的載體,是最重要的生物信息分子,是分子生物學研究的主要對象,因此DNA的提取也應是分子生物學實驗技術中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本談不上進行分子生物學方面的實驗。在DNA提取過程中應做到1,根據不同研究需要，保證結構的相應完整性；2,盡
種子DNA提取儀在黃瓜種子DNA快速提取中的應用
? ? 市面上出售的很多作物種子在正式銷售之前，都需要進行種子純度鑒定，而采用最多的種子純度鑒定技術為SSR技術，該技術的應用是建立在良好的種子DNA提取方法之上的，因此在進行種子純度檢測的時候，可以利用種子DNA提取儀來快速提取種子DNA。??? 種子DNA提取儀可以說是實驗室樣品前處理名副其實
病毒－DNA－的提取實驗——全血細胞中病毒－DNA－的提取
實驗材料全血試劑、試劑盒裂解緩沖液 A裂解緩沖液 B蛋白酶 K儀器、耗材離心機水浴鍋實驗步驟1. 在 750μl 全血中加入等量裂解緩沖液 A,混勻， 12000 r/min 離心 30 s, 棄上清液。2. 用 1.5mL 裂解緩沖液 A 懸起沉淀，再重復離心 1次，棄上清液。3. 用 117μL
病毒－DNA－的提取實驗——拭子標本中病毒－DNA－的提取
實驗材料拭子標本試劑、試劑盒TE 緩沖液裂解液蛋白酶K儀器、耗材離心機棉簽實驗步驟預操作：將采有口腔、鼻腔或生殖道等處分泌物標本的棉簽置于 2 ml 生理鹽水中，洗下標本。若標本在 4 h 內處理，可置于室溫保存，否則需 4℃保存。1. 將生理鹽水中的標本以 2 000 r/min 離心 5 min
DNA提取試劑盒與苯酚氯仿提取DNA法的異同
酚－氯仿方法是提取核酸的經典方法，主要原理是利用核酸、蛋白等雜質在水相和有機相中溶解度不同而重新分配。試劑盒原理是在特定溶液環境下（高鹽、低pH)使核酸吸附在固相介質（一般是硅膠膜）上，洗滌去除雜質后，再改變溶液環境使DNA溶解到純水或TE中。酚氯仿方法經典、便宜，用的都是實驗室常用試劑，提純效率和
痘苗病毒DNA提取實驗
如果提取的痘苗病毒DNA用于轉染，則應在蛋白酶 K 消化和苯酚抽提后分離。具體方法見本實驗。實驗材料純化的痘苗病毒試劑、試劑盒Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材分光光度計Sorval
DNA提取純化技術概述
質粒DNA的提取與純化質粒是一類雙鏈、閉環的DNA，大小范圍從1 kb至200 kb以上不等。通常情況下，質粒可持續穩定地處于染色體外的游離狀態，具有自主復制功能；但在一定條件下也會可逆地整合到宿主染色體上，隨著染色體的復制而復制，并通過細胞分裂傳遞到后代。?質粒已成為核酸克隆和測序最常用的載體。質
痘苗病毒DNA提取實驗
實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒試劑、試劑盒 Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液 蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材 分光光度計Sorvall 離心機實驗步驟 1. 在 260 nm 處確定純化的疸苗病毒的光密
痘苗病毒DNA提取實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒
DNA提取方法有哪些
DNA提取的幾種方法(1).濃鹽法利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽
病毒－DNA－的提取實驗
實驗方法原理 實驗材料 全血試劑、試劑盒 裂解緩沖液 A裂解緩沖液 B蛋白酶 K儀器、耗材 離心機水浴鍋實驗步驟 1. 在 750μl 全血中加入等量裂解緩沖液 A,混勻， 12000 r/min 離心 30 s, 棄上清液。2. 用 1.5mL 裂解緩沖液 A 懸起沉淀，再重復離心 1次，棄上清液
質粒DNA提取實驗步驟
質粒DNA提取可以：(1)快速純化質粒;(2)用于測序、體外轉錄與翻譯、限制性內切酶消化、細菌轉化等分子生物學實驗。實驗方法原理質粒多為一些雙鏈、環狀的DNA分子，是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作，進行遺傳工程改良物種等工作時最主要的DNA載體。