免疫熒光
Immunofluorescence Technique (Spector Lab)protocol for immunofluorescence on cells Immunofluorescence Protocol (Walter Steffen)Methanol fixationFormaldehyde fixationParaformaldehyde/glutaraldehyde fixationEGS fixationFixation of the cytoskeletonPreparation of cover glassesCell cultureFixation protocolImmunofluorescence protocolDouble immunofluorescenceProtein A - protein GAvidin - biotin &nb......閱讀全文
免疫熒光
Immunofluorescence Technique?(Spector Lab)protocol for immunofluorescence on cells??Immunofluorescence Protocol?(Walter Steffen)Methanol fixationForma
免疫熒光技術
基本原理 將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低；而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。試劑與儀器l??????????磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）：
免疫熒光技術
免疫熒光技術1）??直接法1．標本經固定后，PBS洗滌3×3分鐘。2．加熒光素標記的抗體，濕盒內37℃孵育50分鐘。3．PBS洗滌3×3分鐘。4．0.1％伊文氏蘭復染。5．PBS洗3次，蒸餾水洗2次，每次3分鐘，以除去NaCl結晶。6．緩沖甘油封片，鏡檢。?2）??間接法1．標本固定后，PBS洗滌3
間接免疫熒光
方案16.11 間接免疫熒光實驗方法原理固定細胞，順序加入一抗和二抗，通過 UV 光觀察。實驗材料細胞培養在蓋玻片產生一抗種屬的二抗豬血清或其他封閉劑D-PBSA試劑、試劑盒新鮮制備的固定劑用含10%的FBS培養液封固劑實驗步驟1. 用 D-PBSA 洗滌長有細胞的蓋玻片，置于合適的培養皿中。如 1
間接免疫熒光
實驗方法原理固定細胞，順序加入一抗和二抗，通過 UV 光觀察。實驗材料細胞培養在蓋玻片 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?產生一抗種屬的二抗 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
免疫熒光原理
免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。
間接免疫熒光
實驗方法原理固定細胞，順序加入一抗和二抗，通過 UV 光觀察。實驗材料細胞培養在蓋玻片產生一抗種屬的二抗豬血清或其他封閉劑D-PBSA試劑、試劑盒新鮮制備的固定劑用含10%的FBS培養液封固劑實驗步驟1. 用 D-PBSA 洗滌長有細胞的蓋玻片，置于合適的培養皿中。如 13 mm 蓋玻片可用24 孔
免疫熒光簡介
免疫熒光技術（Immunofluorescence technique ）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
免疫熒光概述
免疫熒光（immunofluorescence technic）Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術（fluorescentantibodytechnique）。 用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法；用
免疫熒光技術
免疫熒光技術是標記免疫技術中發展最早的一種．它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。Coons等于1941年首次采用熒光素進行標記抗體獲得成功。經過幾十年的發展，該技術已相當成熟。 用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的
免疫熒光原理
免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。 直接法 將
直接免疫熒光
中文名稱直接免疫熒光英文名稱direct immunofluorescence定 義直接用熒光標記抗體來研究特異性抗原在細胞內定位的方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
間接免疫熒光
中文名稱間接免疫熒光英文名稱indirect immunofluorescence定 義直接免疫熒光技術的改進。待檢細胞首先用未標記的抗體處理，使之與特異的抗原形成復合物，然后再用抗抗體的熒光標記抗體著色，即可檢測出特異抗原在細胞中的存在部位，具有熒光增強效應。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞
免疫熒光技術
實驗方法原理 直接法是以熒光素標記的抗體直接與標本內的抗原反應，形成抗原—熒光素標記抗體復合物。根據熒光的分布位置及強度，確定相應抗原的存在與否及其所在部位。實驗材料 抗體試劑、試劑盒 PBS伊文氏蘭儀器、耗材 顯微鏡實驗步驟 1. 標本經固定后，PBS洗滌3×3 分鐘；2. 加熒光素標記的抗體，濕
直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的異同
1、接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的不同：直接免疫熒光的實驗方案通常較短，因為它只需要一個標記步驟。間接免疫熒光使用偶聯二抗檢測一抗會增加額外的操作步驟。直接免疫熒光方法的實驗方案步驟較少，更簡單。間接免疫熒光方法中必須選擇適當的二抗，增加了復雜度。這種情況在需要使用多個二抗的多色實驗中尤為突出，
直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的異同
1、接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的不同：直接免疫熒光的實驗方案通常較短，因為它只需要一個標記步驟。間接免疫熒光使用偶聯二抗檢測一抗會增加額外的操作步驟。直接免疫熒光方法的實驗方案步驟較少，更簡單。間接免疫熒光方法中必須選擇適當的二抗，增加了復雜度。這種情況在需要使用多個二抗的多色實驗中尤為突出，
直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的異同
1、接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的不同：直接免疫熒光的實驗方案通常較短，因為它只需要一個標記步驟。間接免疫熒光使用偶聯二抗檢測一抗會增加額外的操作步驟。直接免疫熒光方法的實驗方案步驟較少，更簡單。間接免疫熒光方法中必須選擇適當的二抗，增加了復雜度。這種情況在需要使用多個二抗的多色實驗中尤為突出，
直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的異同
1、接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的不同：直接免疫熒光的實驗方案通常較短，因為它只需要一個標記步驟。間接免疫熒光使用偶聯二抗檢測一抗會增加額外的操作步驟。直接免疫熒光方法的實驗方案步驟較少，更簡單。間接免疫熒光方法中必須選擇適當的二抗，增加了復雜度。這種情況在需要使用多個二抗的多色實驗中尤為突出，
間接免疫熒光和直接免疫熒光染色方法的異同
免疫熒光細胞化學方法的原理是根據抗原抗體反應的規律，把已知的抗原或抗體標記上熒光素，制成熒光抗原或抗體，然后以它作為探針來檢測組織或細胞內的相應物質。方法具體種類有直接法、間接法、夾心法和補體法等。在熒光顯微鏡下，根據其形成復合物所發的熒光，來確定判斷檢測物的來源、性質和部位。?1、直接法：這是最早
LSCM免疫熒光染色
免疫熒光染色?使用預冷的?PBS?緩沖溶液洗滌細胞，去除殘留的培養液。立即加入?4%?多聚甲醛(PFA)固定液。在室溫固定15 min。用?PBS?洗滌殘留的固定液后，用?0. 5% Triton X-100?處理細胞?5 min，這樣可以通透細胞膜，使抗體等大分子能通過細胞膜，進到固定細胞的內部。
免疫熒光實驗流程
免疫熒光實驗步驟實驗流程：（1） 細胞準備。對單層生長細胞，在傳代培養時，將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養皿中，待細胞接近長成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次；對懸浮生長細胞，取對數生長細胞，用PBS離心洗滌（1000rpm，5min）2次，用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂
細胞免疫熒光步驟
細胞免疫熒光可應用于：可以觀察組織或細胞內抗原物質的定位，以及一些特殊信號分子蛋白的出核/入核的定位變化。實驗方法原理在進行細胞免疫熒光過程中，需要用到細胞爬片，通過將爬片浸在細胞培養基內，細胞在爬片上生長，進而進行細胞的免疫熒光。實驗材料細胞樣品試劑、試劑盒多聚甲醛70%甲醇丙酮PBSTriton
免疫熒光染色技術
抗原物質固定劑固定條件（min）蛋白質抗原95%～100%乙醇室溫3～10酶、激素丙?酮4℃?30免疫球蛋白四氯化碳病?毒丙酮、四氯化碳、無水乙醇室溫5～10或4℃?30～60多糖、細菌等微火加熱，甲醇、10%甲醛、丙酮室溫5～10或4℃?30～60類?脂?（異嗜性抗原）10%甲醛，10%佛茂爾（F
冰凍切片免疫熒光
實驗原理抗原抗體結合主要試劑固定液、梯度蔗糖、磷酸鹽緩沖液、封閉液、一抗、熒光標記的二抗、DAPI、熒光抗淬滅封片劑主要設備冰凍切片機、熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡實驗材料組織切片實驗步驟切片提取新鮮組織置于4%多聚甲醛中固定；2.梯度蔗糖脫水：10%-20%-30%；3.冰凍包埋劑包埋并切片，切片
免疫熒光技術簡介
免疫熒光技術（Immunofluorescence technique）又稱熒光抗體技術，根據抗原抗體反應的原理，將熒光素偶聯到已知的抗原或抗體上制成熒光探針，與血清或體液、細胞、組織中存在的相應抗體（或抗原）結合，從而對這些組織中存在的抗原或抗體進行定性、定量和（或）定位的檢測。抗體的選擇
冰凍切片免疫熒光
實驗概要冰凍切片免疫熒光實驗原理抗原抗體結合主要試劑固定液、梯度蔗糖、磷酸鹽緩沖液、封閉液、一抗、熒光標記的二抗、DAPI、熒光抗淬滅封片劑主要設備冰凍切片機、熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡實驗材料組織切片實驗步驟切片1.提取新鮮組織置于4%多聚甲醛中固定；2.梯度蔗糖脫水：10%-20%-30%；3
細胞免疫熒光染色
實驗概要細胞免疫熒光染色實驗原理利用抗原抗體反應，鑒定細胞是否表達某種蛋白。細胞經固定后，用特異性抗體（一抗）識別目的蛋白，再用一抗的抗體（二抗）識別一抗，二抗一般耦聯熒光基團或化學反應基團，通過熒光或化學發光顯示目的蛋白。主要試劑防淬滅劑、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、1
免疫熒光的原理
免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。 如檢查未知抗原，先
免疫熒光技術特點
該技術的主要特點是：特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是：非特異性染色問題尚未完全解決，結果判定的客觀性不足，技術程序也還比較復雜。 熒光免疫法按反應體系及定量方法不同，還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比，熒光免疫法無放射性污染，并且大多操作簡便，便于推廣。國外生產的TDM用試劑盒，有相
免疫熒光的原理
免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。 如檢查未知抗原，先