抗體的制備方法與原理
一、抗血清的制備 有了質量好的抗原，還必須選擇適當的免疫途徑，才能產生質量好（特異性強和效價高）的抗體。 （一）用于免疫的動物 作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量，如一般制備抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因動物反應良好，而且能夠提供足夠數量的血清，用于免疫的動物應適齡，健壯，無感染性疾患，最好為///雄性，此外還需十分注意動物的飼養，以消除動物的個體差異以及在免疫過程中死亡的影響。若用兔，最好用純種新西蘭兔，一組三只，兔的體重以2～3kg為宜。 （二）免疫途徑 免疫途徑有多種多樣，如靜脈內、腹腔內、肌肉內、皮內、皮下、淋巴結內注射等，一般常用皮下或背部多點皮內注射，每點注射0.1ml左右。途徑的選擇決定于抗原的生物學特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物學活性抗原，一般不宜采用靜脈注......閱讀全文
抗體的制備方法與原理
一、抗血清的制備 有了質量好的抗原，還必須選擇適當的免疫途徑，才能產生質量好（特異性強和效價高）的抗體。 （一）用于免疫的動物 作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量，如
抗體的制備方法與原理2
骨髓瘤細胞的培養可用一般的培養液，如RPMI1640，DMEM培養基。小牛血清的濃度一般在10%～20%，細胞濃度以104～5×105/ml為宜，最大濃度不得超過106/ml。當細胞處于對數生長的中期時，可按1：3～1：10的比例傳代。每3～5天傳代一次。細胞在傳代過程中，部分細胞可能有返祖現象，
本生詳解抗體的制備方法與原理
抗血清的制備 有了質量好的抗原，還必須選擇適當的免疫途徑，才能產生質量好(特異性強和效價高)的抗體。 (一)用于免疫的動物 作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數量，如般
單克隆抗體制備過程與原理
單克隆抗體(MAb)是針專一的抗原決定簇產生的抗體，單克隆技術又名雜交瘤技術起源于1975年，由G.K?hler和Milstein創立。主要原理是利用產生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。單克隆抗體制備過程有以下幾個步驟，下面講簡要介紹。1、免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠
免疫診斷方法抗原與抗體的制備介紹
抗原與抗體是血清學反應的物質基礎。抗原的制備與純化是獲得特異性抗體的先決條件，所得到的抗體又可反過來純化和檢測抗原。 (一)抗原的制備 抗原種類繁多，按其物理性狀可分顆粒性和可溶性兩類。前者指細胞性抗原(包括細菌抗原)，其制備較為簡便，一般用新鮮細胞以無菌生理鹽水或磷酸緩沖液洗滌后配成一定濃
RNAi實驗原理與制備方法（一）
實驗原理通過生化和遺傳學研究表明，RNA干擾包括起始階段和效應階段(inititation and effector steps)。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。證據表明；一個稱
RNAi實驗原理與制備方法（二）
3.用RNase III 消化長片斷雙鏈RNA制備siRNA其他制備siRNA的方法的缺陷是需要設計和檢驗多個siRNA序列以便找到一個有效的siRNA。而用這種方法——制備一份混合有各種siRNAs “混合雞尾酒” 就可以避免這個缺陷。選擇通常是200—1000堿基的靶mRNA模版，用體外轉錄
卵黃抗體制備的實驗原理
通過免疫注射產蛋雞，即可由其生產的蛋黃中提取相應的抗體，并可用于相應疾病的預防和治療，這類制劑稱為卵黃抗體。卵黃抗體在臨床上應用較為廣泛，其優點是雞蛋比動物血清更容易獲得，且卵黃中抗體含量較高。禽類的免疫器官法氏囊主要控制機體的體液免疫，機體的免疫應答發生后，體液中成熟的骨髓依賴性淋巴細胞受相關免疫
卵黃抗體制備的實驗原理
通過免疫注射產蛋雞，即可由其生產的蛋黃中提取相應的抗體，并可用于相應疾病的預防和治療，這類制劑稱為卵黃抗體。卵黃抗體在臨床上應用較為廣泛，其優點是雞蛋比動物血清更容易獲得，且卵黃中抗體含量較高。禽類的免疫器官法氏囊主要控制機體的體液免疫，機體的免疫應答發生后，體液中成熟的骨髓依賴性淋巴細胞受相關免疫
單克隆抗體的制備原理
單克隆抗體技術原理如下：由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交
抗體酶的制備方法
1、雜交瘤技術經體內免疫后再進行細胞融合是制備抗體酶的一種傳統方法。雜交瘤技術的基本原理是用不能在培養液中生長的但能產生抗體的脾臟細胞，與能在培養液中生長的骨髓瘤細胞進行融合，融合得到的雜交細胞既能產生抗體又能在體外培養，通過選擇培養，以獲取能產生單克隆抗體的雜交瘤細胞。再把這些細胞單克隆化，即繁殖
多克隆抗體的制備方法
一、器材?剪刀（剪兔毛用）一把、彎頭眼科手術鑷子（游離血管用）一把、直頭眼科手術剪（剪血管用）一把，手術刀架，手術刀片，注射器（1ml、 10ml，25ml）附針頭，兔子固定架，滅菌三角燒瓶（200ml）或平皿（直徑18cm）、彎頭止血鉗四把，直頭止血鉗兩把，手術縫合線，塑料放血管，紗布等
人工制備抗體制備方法有哪些
抗體在疾病的診斷和免疫防治中的重要作用，使人們對抗體的需求越來越大。人工制備抗體是大量獲得抗體的重要途徑。早年人工制備抗體的方法主要是以相應抗原免疫動物，獲得抗血清。由于抗原常常含有多種不同的抗原表位，加之所獲得的抗血清也未經免疫純化，因此，獲得的抗血清實際上是含多種抗體的混合物，即多克隆抗體(po
單克隆抗體制備的基本原理與過程
單克隆抗體制備的原理：B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤
單克隆抗體的制備原理簡介
原理1：單克隆抗體（MAb）與抗血清（又稱多克隆抗體，PAb）最主要的區別是MAb為單一種B細胞克隆所產生的一種均一的免疫球蛋白分子。所以MAb是B細胞克隆的標志，是一種獨特型的抗體，它的特異性是針對一個抗原決定簇的。制備單克隆抗體不能用化學分離的方法從多克隆抗體中去分離純化得到它，而是用分離產
抗體酶的制備方法介紹
1、雜交瘤技術經體內免疫后再進行細胞融合是制備抗體酶的一種傳統方法。雜交瘤技術的基本原理是用不能在培養液中生長的但能產生抗體的脾臟細胞，與能在培養液中生長的骨髓瘤細胞進行融合，融合得到的雜交細胞既能產生抗體又能在體外培養，通過選擇培養，以獲取能產生單克隆抗體的雜交瘤細胞。再把這些細胞單克隆化，即繁殖
抗體酶的制備方法介紹
1、雜交瘤技術經體內免疫后再進行細胞融合是制備抗體酶的一種傳統方法。雜交瘤技術的基本原理是用不能在培養液中生長的但能產生抗體的脾臟細胞，與能在培養液中生長的骨髓瘤細胞進行融合，融合得到的雜交細胞既能產生抗體又能在體外培養，通過選擇培養，以獲取能產生單克隆抗體的雜交瘤細胞。再把這些細胞單克隆化，即繁殖
抗體的制備
? 為了研究抗體的理化性質、分子結構與功能，以及應用抗體于臨床疾病的診斷、治療及預防都需要人工制備抗體。目前，根據制備的原理和方法可分為多克隆抗體、單克隆抗體及基因工程抗體三類。 一、多克隆抗體 大多數抗原是由大分子蛋白質組成，但只是抗原上有限部位的特殊分子結構能與其相應抗體結合，稱此部位為抗原
單個B細胞抗體制備技術原理
單個B細胞技術是近年來新發展的一類快速制備單克隆抗體的技術，是根據每一個B細胞只含有一個功能性重鏈可變區DNA序列和一個輕鏈可變區DNA序列，以及每一個B細胞只產生一種特異性抗體的特性，從免疫動物組織或外周血中分離抗原特異性B細胞，通過單細胞PCR技術從單個抗體分泌B細胞中擴增IgG重鏈和輕鏈可變區
大量單克隆抗體的制備方法
目前制備大量單克隆抗體的方法主要有兩種：一種是動物體內誘生法；另一種是體外培養法。?背景BACKGROUND?困惑PUZZLED?體外培養法有哪幾種培養方式？何謂無血清培養？探索在體外培養法中,目前各個實驗室普遍采用細胞單層法,就是將雜交瘤細胞加入培養瓶中，用完全培養基培養，細胞濃度以1.0X100
單克隆抗體的制備方法1
動物的選擇與免疫? 1．動物的選擇 純種BALB/C小鼠，較溫順，離窩的活動范圍小，體弱，食量及排污較小，一般環境潔凈的實驗室均能飼養成活。目前開展雜交瘤技術的實驗室多選用純種BALA/C小鼠。? 2．免疫方案 選擇合適的免疫方案對于細胞融合雜交的成功，獲得高質量的McAb至關重要。一般在
單克隆抗體的制備方法2
（2）飼養細胞：在組織培養中，單個或少數分散的細胞不易生長繁殖，若加入其它活細胞，則可促進這些細胞生長繁殖，所加入的這種細胞數被稱為飼養細胞。在制備McAb的過程中，許多環節 需要加飼養細胞，如在雜交瘤細胞篩選、克隆化和擴大培養過程中，加入飼養細胞是十分必要的。常用的飼養細胞有：小鼠腹腔巨噬細胞（較
單克隆抗體的制備方法3
（4）融合? ①將骨髓瘤細胞與脾細胞按1：10或1：5的比例混合在一起，在50ml離心管中用無血清不完全培養液洗1次，離心，1200rpm,8min;棄上清，用吸管吸凈殘留液體，以免影響聚乙二醇（PEG）濃度。輕輕彈擊離心管底，使細胞沉淀略松動。? ②90s內加入37℃預溫的1ml 45%PEG
單克隆抗體的制備方法4
（5）在第7天換液，以后每2～3天換液1次。? （6）8～9天可見 細胞克隆形成，及時檢測抗體活性。? （7）將陽性孔的細胞移至24孔板中擴大培養。? （8）每個克隆應盡快凍存。? 2．軟瓊脂培養法克隆? （1）軟瓊脂的配制：含有20%NCS（小牛血清）的2倍濃縮的RPMI1640。?
抗體酶的特點和制備方法
抗體酶具有典型的酶反應特性；與配體(底物)結合的專一性，包括立體專一性，抗體酶催化反應的專一性可以達到甚至超過天然酶的專一性；具有高效催化性，一般抗體酶催化反應速度比非催化反應快104～108倍，有的反應速度已接近于天然酶促反應速度；抗體酶還具有與天然酶相近的米氏方程動力學及pH依賴性等。將抗體轉變
卵黃抗體制備的操作方法
1.實驗動物的選擇：選擇健康、產蛋率高的蛋雞，購進后飼養1周左右，觀察其健康情況。?2.抗原的準備：免疫抗原有多種選擇，一般采用滅活的病原體，也可以選擇激素類、蛋白類物質，使用前可以選用弗氏完全佐劑乳化抗原。?3.動物免疫：免疫方式主要有口鼻接種、皮內接種、皮下接種、肌肉注射、腹腔注射以及靜脈注射。
卵黃抗體制備的操作方法
1.實驗動物的選擇：選擇健康、產蛋率高的蛋雞，購進后飼養1周左右，觀察其健康情況。2.抗原的準備：免疫抗原有多種選擇，一般采用滅活的病原體，也可以選擇激素類、蛋白類物質，使用前可以選用弗氏完全佐劑乳化抗原。?3.動物免疫：免疫方式主要有口鼻接種、皮內接種、皮下接種、肌肉注射、腹腔注射以及靜脈注射。禽
單克隆抗體培養上清與腹水的制備—上清的制備
實驗步驟材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)雜 交 瘤（單 元 1.3)V DMEM-IO 完全培養基175 cm2?組織培養用細頸瓶50m l 塑料錐底離心管，無菌Beckman 離心機和 TH-4 轉 子（或同等設備）1.將雜交瘤細胞移入含有 DMEM-IO 完全培養基的 175 cm2?培
單克隆抗體制備中兩次篩選的方法及原理
第一次篩選的原理與方法 細胞融合后 雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵 普遍采用的HAT選擇培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤（H） 氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）其依據是細胞中的DNA合成有兩條途徑是生物合成途徑（D途徑）即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸 為DNA分子的
熒光抗體的制備
1? ?熒光素與抗體結合（標記）??2? ?熒光抗體的純化??3? ?熒光抗體的鑒定??1.熒光素與抗體結合方法：? ? ⑴ 透析法：①適用于蛋白質含量低、樣品體? ?? ?? ?? ?? ?? ???積小的抗體溶液的標記? ?? ?? ?? ?? ? ②標記較均勻，非特異熒光較低??? ? ⑵ 攪