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【實驗目的】1、掌握引物設計的基本要求，并熟悉使用Primer premier5.0軟件進行引物搜索。2、掌握使用軟件oligo6.0對設計的引物進行評價分析。【實驗原理】一、引物設計原則聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法，故又稱基因的體外擴增法。PCR技術已成為分子生物學研究中使用最多，最廣泛的手段之一，而引物設計是PCR技術中至關重要的一環，使用不合適的PCR引物容易導致實驗失敗：表現為擴增出目的帶之外的多條帶（如形成引物二聚體帶），不出帶或出帶很弱，等等。現在PCR引物設計大都通過計算機軟件進行，可以直接提交模板序列到特定網頁，得到設計好的引物，也可以在本地計算機上運行引物設計專業軟件。引物設計原則如下：1、引物應在序列的保守區域設計并具有特異性。引物序列應位于基因組DNA的高度保守區，且與非擴增區無同源序列。這樣可以減少引物與......閱讀全文
PCR引物設計及軟件使用技巧張新宇，朱有康，高燕寧（中國協和醫科大學中國醫學科學院腫瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介紹使用軟件設計PCR引物的技巧。在PCR引物設計原則的基礎上，詳細介紹了兩種常用引物設計軟件的基本使用方法，并對其各自的優缺點進行了比較。一般性引物自動搜索可采用“Prem
概念 引物，是一小段單鏈DNA或RNA，作為DNA復制的起始點，在核酸合成反應時，作為每個多核苷酸鏈進行延伸的出發點而起作用的多核苷酸鏈，在引物的3′-OH上，核苷酸以二酯鏈形式進行合成，因此引物的3′-OH，必須是游離的。類型 存在有自然中生物的DNA復制引物（RNA引物）和聚合酶鏈式反應(
實驗室很多同學都要做Real time PCR實驗，實驗室的師兄師姐都會有很多寶貴意見，不過也有實驗室前沒有做過的，查找了下資料和大家分享下關于實時熒光 Taqman 探針設計、實時熒光PCR探針的選擇、引物的設計及評價。熒光探針法是用序列特異的熒光標記探針來檢測產物，探針法的出現使得定量
熒光定量PCR實驗指南一、基本步驟：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；2、引物、探針的設計；3、引物探針的合成；4、反應體系的配制；5、反應條件的設定；6、反應體系和條件的優化；7、熒光曲線和數據分析；8、標準品的制備；二、技術關鍵：1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比
實驗方法原理 聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法，故又稱基因的體外擴增法。PC
實驗方法原理聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法，故又稱基因的體外擴增法。PCR技術已成為分子生物學研究中使用最多，最廣泛的手段之一，而引物設計是PCR技術中至關重要的一環，使用不合適的PCR引物容易導致實
【實驗目的】1、掌握引物設計的基本要求，并熟悉使用Primer premier5.0軟件進行引物搜索。2、掌握使用軟件oligo6.0對設計的引物進行評價分析。【實驗原理】一、引物設計原則聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或
5. 按照搜尋結果顯示，在主窗口中檢查該引物對的二級結構情況，逐條分析，依次篩選。下面進行序列篩選：點擊其中一對引物，如第21#引物，在“Peimer Premier”主窗口，如圖所示：該圖分三部分，最上面是圖示PCR模板及產物位置，中間是所選的上下游引物的一些性質，最下
PCR反應的準備PCR反應體系10×擴增緩沖液10μl4種dNTP混合物（終濃度）各100～250μmol/L引物（終濃度）各5～20μmol/L模板DNA0.1～2μgTaq DNA聚合酶5～10 UMg2+（終濃度）1～3mmol/L補加雙蒸水100 μl其中dNTP、引物、模板DNA、Taq
結核桿菌可以導致全身性疾病，特別是在發展中國家，其發病率較高，危害性極大.近幾年結核桿菌的變異性較大，對抗癆藥物的耐藥性增加，從而使結核病的發病大幅度增高.雖然傳統的涂片抗酸染色、細菌培養以及胸片檢查對大部分結核能作出正確的診斷，但對某些病人亦可造成誤診或漏診;動物接種雖特異性較高，但因時間較長
Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司開發的專業用于PCR或測序引物以及雜交探針的設計，評估的軟件，和Plasmid Premier2.02一起是該公司推出的最新的軟件產品。其主要界面同樣也是分為序列編輯窗口（Genetank），引物設計窗口（Primer Design），
Primer Premier 4.10Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司開發的專業用于PCR或測序引物以及雜交探針的設計，評估的軟件，和Plasmid Premier2.02一起是該公司推出的最新的軟件產品。其主要界面同樣也是分為序列編輯窗口（Genetank），引物設
Primer Premier 4.10Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司開發的專業用于PCR或測序引物以及雜交探針的設計，評估的軟件，和Plasmid Premier2.02一起是該公司推出的最新的軟件產品。其主要界面同樣也是分為序列編輯窗口（Genetank），引物設
2.3TaqmanMGB探針設計介紹MGB探針的優點：2MGB探針較短(14-20bp)，更容易找到所有排序序列的較短片段的保守區。2短片段探針(14-20bp)加上MGB 后，Tm值將提高10℃，更容易達到熒光探針Tm值的要求。2MGB探針的設計原則2探針的5’端避免出現G，即使探針水解為單個堿基
PCR技術可用于：（1）檢驗感染性疾病是否處于隱性或亞臨床狀態；（2）有效檢測癌基因的突變，準確檢測癌基因的表達量；（3）臨床應用于檢測地中海貧血的基因突變。實驗方法原理基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成
為了促進斑馬魚的高通量的基因分型，我們開發了一種新的技術——用高通量熔解分析（HRMA）區分野生、雜合、純合突變。這種耗時一個小時的技術不需要進行限制性內切酶酶切和瓊脂糖凝膠電泳的操作。此技術生成的熔解圖的敏感性高，可以檢測不明確的PCR產物。我們可以對斑馬魚的三種類型的突變進行可靠的基
2.4 實時多重PCR探針的選擇：多重實時PCR的多種含意有兩種：一為選擇保守的探針和引物，利用不同的染料標記探針，在檢測時可根據熒光的顏色來判定不同的產物。另一種為選擇保守的引物，擴增不同長度的目的片段，反應中加入SYBRN染料，最后根據不同目的片段的Tm值來判定不同的物品。多重實時PCR的熒光探
首先引物要跟模板緊密結合，其次引物與引物之間不能有穩定的二聚體或發夾結構存在，再次引物不能在別的非目的位點引起DNA聚合反應（即錯配）。圍繞這幾條基本原則，設計引物需要考慮諸多因素，如引物長度（primer length）、產物長度（product length）、序列Tm值（melting t
在NCBI上搜索到該基因，找到該基因的mRNA，在CDS選項中，找到編碼區所在位置，在下面的origin中，Copy該編碼序列作為軟件查詢序列的候選對象。打開Primer Premier5，點擊File-New-DNA sequence, 出現輸入序列窗口，Copy目的序列在輸入框內（選擇As），此
實驗方法原理 PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。 PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便
舉乙肝的例子來說：通過酶免的方法查乙肝兩對半和通過熒光定量PCR的方法學查乙肝DNA小明得了肝炎，但他不知道自己得了肝炎，有一天身體不舒服或者正常體檢（比如入職體檢），他去看醫生，臨床醫生懷疑他得了肝炎（肝炎有很多種比如病毒性肝炎，也就是病毒傾入他體內后由于人體的三道防線沒能把病毒消滅掉，導致病毒在
實驗概要本實驗中運用Perl腳本用于比較Nipponbare和93-11基因組序列，從而開發潛在的ILP標記，通過EPIC-PCR開發候選ILP標記，最后用實驗驗證及評價了ILP標記。實驗步驟1. 水稻釉粳亞種基因組比較搜索ILP我們運用Perl腳本用于比較Nipponbare和93-11基因組序列
一、引物設計step by step1、在NCBI上搜索到目的基因，找到該基因的mRNA，在CDS選項中，找到編碼區所在位置，在下面的origin中，Copy該編碼序列作為軟件查詢序列的候選對象。2、用Primer Premier5搜索引物①打開Primer Premier5，點擊File-New-
實踐中的問題實時定量PCR已廣泛地運用于分子生物學的各個領域，就目前的應用情況來看，雖然取得了很好的效果，但是其在方法學上的選擇、敏感性問題、重復性問題等都一直是爭論不休的，本文將就這些問題做出探討。1. 方法的選擇：研究者在實驗中往往想要得到目的基因的絕對量，因為絕對定量對目的基因的表達差異有直接
在NCBI上搜索到該基因，找到該基因的mRNA,在CDS選項中，找到編碼區所在位置，在下面的origin中，Copy該編碼序列作為軟件查詢序列的候選對象。打開Primer Premier5，點擊File-New-DNA sequence，出現輸入序列窗口，Copy目的序列在輸入框內（選擇A
熒光定量PCR實驗指南一、基本步驟：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；2、引物、探針的設計；3、引物探針的合成；4、反應體系的配制；5、反應條件的設定；6、反應體系和條件的優化；7、熒光曲線和數據分析；8、標準品的制備；二、技術關鍵： 1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；從h
從1996年轉基因作物開始進行大規模商業化以來，它在全球的種植面積迅速擴大，目前全球轉基因作物種植面積已達25億公頃，同時轉基因作物的種類和轉基因性狀也在不斷豐富。但是轉基因作物作為一種新物種，其對人體健康、生態平衡是否具有危害還未確定。許多國家以立法或其他形式要求對轉基因產品進行標記。我國于2
實時熒光定量PCR以其精確、快速、方便，越來越多的應用在科研、臨床及檢驗檢疫的各個領域。但是定量PCR是對精確性要求很高的實驗，不僅要求在實驗前有比較完整的實驗設計方案，而且實驗的條件對實驗結果的影響也非常大。這些都是很多老師與學生非常關心的問題，下面分別從這兩個方面來對定量PCR實驗做一些闡述。&
2.2.2.3 操作程序1．在無菌的Eppendorf管內加入以下反應物：2．93℃ 反應2 min后開始以下循環： 93℃變性反應1 min； 50℃退火反應1 min； 72℃延伸反應3 min。 經過17～35循環后，最后一個循環72℃增加5 min。循環結束后反應產物置于40
八十年代以來由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染而引起的艾滋病(AIDS)因其嚴重的危害性而受到人們高度重視，力爭早期診斷和尋求有效治療是防止其廣泛傳播的關鍵所在.聚合酶鏈反應(PCR)具有敏感、特異和快速的特點，是檢測病毒、評價病情進展和探討發病機理的有效工具.一、HIV的基因結構 HIV的基因