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    特異性檢測溶酶體亞硫酸氫鹽新武器:新款智能熒光探針

    文章提出了一種新的基于邏輯與的熒光探針(NY-Lyso),它由嗎啉基、半花菁苷和1,8-萘二甲酰亞胺顯色團組成,用于特異性檢測溶酶體中的亞硫酸氫鹽。該智能探針由兩個功能部件組成:NY-Lyso探針上的嗎啉基對細胞內溶酶體(pH 4.5-5.5)和其他細胞器之間的pH差異產生敏感反應,噻吩和花菁之間的碳碳雙鍵通過親核加成選擇性地與HSO3-反應。 嗎啉基和半花菁苷均能通過光誘導電子轉移(PET)和分子內電荷轉移(ICT)機制獨立淬滅發射,因此探針無熒光。當同時存在SO2和H+時,探針在524nm處表現出強烈的熒光發射。也就是說,只有當SO2和pH同時被認為是“輸入”時,熒光發射才會被“輸出”。值得注意的是,基于該方法的探針不僅具有高選擇性、快速響應(小于200s)、極低的檢測限(LOD = 20.7nM)和優良的溶酶體靶向性的優點,而且克服了在復雜的細胞pH環境中檢測HSO3?的局限性。與以前報道的用于SO2衍生物的生物探針......閱讀全文

    Western Blot詳解

      Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。   本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術:   一、原理   二、分類

    GFP 和熒光共振能量轉移技術測定蛋白質相互作用實驗

    我們將方案分成三個階段: 第一階段介紹蛋白質的制備及蛋白質的熒光染料標記;第二階段,通過轉染或微注射將適當的探針成分導入細胞;第三階段,圖像的收集和分析過程。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料進行轉染的細胞株按第二階段所介紹的方法制備

    Western Blot實驗技術詳解和常見問題解答

    Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被

    Western Blot的過程與優化,著重于化學發光檢測

    實驗步驟 一、蛋白質印跡法 蛋白質印跡 (Western Blotting) 法是在混合的復合物中鑒定和定量特定蛋白質的一種有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。這一技術對固定在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯

    GFP 和熒光共振能量轉移技術測定蛋白質相互作用實驗

                實驗材料 進行轉染的細胞株 按第二階段所介紹的方法制備表達了蛋白質探針的細胞 試劑、試劑盒

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    RT-PCR實驗方法總結大全

    生物谷: RT-PCR實驗有三步:抽提RNA,RT,PCR。要求:1.做RT前必需測RNA濃度,逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不會出太大問題。3. PCR,按常規。但如需擴長片段,則對前兩步要求較高,需要有完整的cDNA存在,不是單改變

    細菌學診斷中的新技術

    隨著現代科學技術的不斷發展,特別是免疫學、生物化學、分子生物學的不斷發展,新的細菌診斷技術和方法已廣泛用于食品微生物的鑒別。傳統的細菌分離、培養及生化反應,已遠遠不能滿足對各種病原微生物的診斷以及流行病學的研究。近年來國內外學者不斷努力,已創建不少快速、簡便、特異、敏感、低耗且適用的細菌學診斷方法,

    細胞研究用的顯微鏡分類和工作原理

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    熒光定量PCR實驗指南一、基本步驟:1、目的基因(DNA和mRNA)的查找和比對;2、引物、探針的設計;3、引物探針的合成;4、反應體系的配制;5、反應條件的設定;6、反應體系和條件的優化;7、熒光曲線和數據分析;8、標準品的制備;二、技術關鍵:1、 目的基因(DNA和mRNA)的查找和比

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    基因芯片的制備、應用與前景

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    分子生物學常用實驗技術(page 1)

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