二維聚丙烯酰胺凝膠電泳原理介紹
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳技術結合了等電聚焦技術（根據蛋白質等電點進行分離）以及SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳技術（根據蛋白質的大小進行分離）.這兩項技術結合形成的二維電泳是分離分析 蛋白質最有效的一種電泳手段.通常第一維電泳是等電聚焦,在細管中（φ1～3 mm）中加入含有兩性電解質、8M的脲以及非離子型去污劑的聚丙烯酰胺凝膠進行等電聚焦,變性的蛋白質根據其等電點的不同進行分離.而后將凝膠從管中取出,用含有SDS的緩沖液處理30 min,使SDS與蛋白質充分結合.將處理過的凝膠條放在SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳濃縮膠上,加入丙烯酰胺溶液或熔化的瓊脂糖溶液使其固定并與濃縮膠連接.在第二維電泳過程中,結合SDS的蛋白質從等電聚焦凝膠中進入SDS－聚丙烯酰胺凝膠,在濃縮膠中被濃縮,在分離膠中依據其分子量大小被分離.這樣各個蛋白質根據等電點和分子量的不同而被分離、分布在二維圖譜上.細胞提取液的二維電泳可以分辨出1000～2000個蛋白質,......閱讀全文
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳原理介紹
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳技術結合了等電聚焦技術（根據蛋白質等電點進行分離）以及SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳技術（根據蛋白質的大小進行分離）.這兩項技術結合形成的二維電泳是分離分析 蛋白質最有效的一種電泳手段.通常第一維電泳是等電聚焦,在細管中（φ1～3 mm）中加入含有兩性電解質、8M的脲以及非離子
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳的樣品制備
可溶性樣品 組織樣品準備 細胞 樣品分級 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 由于2-DE 所分析樣品的多樣性，沒有一種制備方法可以普遍
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳的樣品制備
實驗方法原理 由于2-DE 所分析樣品的多樣性，沒有一種制備方法可以普遍適用于各種樣品，但有幾點考慮一定要提出，很有必要盡量減少可能在 2-DE 譜中導致假點 (artifactualspot) 的蛋白質修飾，在實驗中，含尿素的樣品一定不要加熱，因為加熱后尿素分解產生的異氰酸鹽可能對蛋白
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳的樣品制備——細胞
實驗材料細胞試劑、試劑盒培養基實驗步驟對體外懸浮培養生長的細胞或周期性細胞樣品（如紅細胞、淋巴細胞），理想的方法是通過離心收集，用磷酸鹽緩沖液清洗并溶于樣品緩沖液。對于在固體基質中培養的細胞，應首先去除培養基質，用 PBS 或等滲蔗糖溶液清洗細胞層，后者是減少可能干擾一向 IEF 的鹽的特別有效的方
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳（2D-PAGE）
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳技術結合了等電聚焦技術（根據蛋白質等電點進行分離）以及SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳技術（根據蛋白質的大小進行分離）。這兩項技術結合形成的二維電泳是分離分析蛋白質最有效的一種電泳手段。 通常第一維電泳是等電聚焦，在細管中（φ1～3 mm）中加入含有兩性電解質、8M的脲以及非
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳（2D-PAGE）
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳技術結合了等電聚焦技術（根據蛋白質等電點進行分離）以及SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術（根據蛋白質的大小進行分離）。這兩項技術結合形成的二維電泳是分離分析蛋白質最有效的一種電泳手段。通常第一維電泳是等電聚焦，在細管中（φ1～3mm）中加入含有兩性電解質、8M的脲以及非離子型去污劑
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳樣品的溶解與還原
實驗方法原理理想的 2-DE 溶解應能達到破壞所有非共價結合蛋白質復合物和聚積體，形成各個多肽的溶解液。如不能達到這一點，樣品中結合牢固的蛋白質復合物可能使 2-DE 中出現新的蛋白質點，相應地表示單個多肽的點強度將下降。此外，溶解方法必須允許可能干擾 2-DE 分離的鹽、脂類、多糖和核酸等物質的去
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳的樣品制備——樣品分級
實驗材料真核組織蛋白質實驗步驟由于真核組織蛋白質表達的高動態范圍和多樣性，有時必須對蛋白質進行分級處理，以降低樣品的復雜性并富集低拷貝蛋白質。蛋白質預分級可以用亞細胞分級、液相電泳、吸附色譜和選擇性沉淀等方法來實現。此外，還有一種方法是根據蛋白質在一系列溶解能力還和增強的緩沖液中溶解性能不同，而實現
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳樣品的溶解與還原
實驗方法原理 理想的 2-DE 溶解應能達到破壞所有非共價結合蛋白質復合物和聚積體，形成各個多肽的溶解液。如不能達到這一點，樣品中結合牢固的蛋白質復合物可能使 2-DE 中出現新的蛋白質點，相應地表示單個多肽的點強度將下降。此外，溶解方法必須允許可能干擾 2-DE 分離的鹽、脂類、多糖和
二維聚丙烯酰胺凝膠電泳樣品的溶解與還原
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 理想的 2-DE 溶解應能達到破壞所有非共價結合蛋白質復合物和聚積體，形成各個多肽的溶解液。如不能達到這一點，樣品中結合