Lavision雙光子共聚焦顯微鏡應用：毛囊再生過程活體成像
組織的發生與再生依賴于細胞-細胞間相互作用和指向干細胞的信號以及它們的直接增殖。但是，引導組織適當再生的細胞行為還沒有被很好的理解。運用一種新的，非侵入的雙光子成像技術，我們研究了活鼠隨時間推移的生理性毛囊再生。通過這種方法，我們監測了真皮層干細胞和它們的后代在生理性毛囊再生過程中的行為，并指出了間充質對它們行為的影響。承接早先的研究，干細胞在毛發再生的初始階段處于靜止狀態而它們的后代處于更活躍的分生狀態。除了細胞分化之外，后代細胞的協調運動也允許毛囊的快速擴張。最后，我們通過切蝕目標細胞的和長時間跟蹤活毛囊展示了間充質對毛發再生的要求。因此，我們建立了一種直接原位觀察毛囊內生長調控的細胞機制的方法，這使得我們可以精確調查生理性再生過程對毛囊組分的功能性要求。 材料與方法 在原位成像中，對3周齡的小鼠通過腹膜內注射克他命和甲苯噻嗪進行麻醉，頭部區域的皮膚使用機械剪毛器和脫毛膏剃光。小鼠被放在一個加熱平臺上，頭部和耳朵通過一個自制......閱讀全文
Lavision雙光子共聚焦顯微鏡應用：毛囊再生過程活體成像
組織的發生與再生依賴于細胞-細胞間相互作用和指向干細胞的信號以及它們的直接增殖。但是，引導組織適當再生的細胞行為還沒有被很好的理解。運用一種新的，非侵入的雙光子成像技術，我們研究了活鼠隨時間推移的生理性毛囊再生。通過這種方法，我們監測了真皮層干細胞和它們的后代在生理性毛囊再生過程中的行為，并指出了間
Lavision雙光子顯微鏡毛囊再生過程活體成像（一）
Live imaging of stem cell and progeny behaviour in physiological hair-follicle regenerationPanteleimon Rompolas1, Elizabeth R. Deschene1*, Giovanni
Lavision雙光子顯微鏡毛囊再生過程活體成像（二）
Figure 2 |生長過程中處于形態重組的干細胞progeny隔層. a, 毛囊生長中的向下伸展。生長狀態的活毛囊三個連續時間點（3小時間隔）的光學切片，展示了progeny組分向下的伸展（左三） 。核間距增加，干細胞和progen隔層(大約生長初期 II to IIIa)中的總細胞數被定
LaVision雙光子顯微鏡多線掃描雙光子成像（四）
2.3. 多線TPLSM中的獲取模式??? 我們以兩種獲取模式操作多線TPLSM：第一種，整個研究使用所謂“幀掃描”模式，以64束激光在X、Y方向掃描樣品。因此焦平面上激發了均一性照明，假定光束陣列的橫向步長尺寸沒有過于粗糙（通常使用≤400 nm的步長尺寸）。在Fig. 3A，展示了以“幀
LaVision雙光子顯微鏡多線掃描雙光子成像（三）
2.2.多線TPLSM中通過成像檢測釋放光??? 在單光束TPLSM中，光電倍增管PMT或者雪崩二極管APD可以很方便地用于釋放光檢測，由于雙光子激發的原理，激發只發生在激光焦點處。因此，用于屏蔽離焦光線的共焦小孔變得不必要，并且可以使用NDD檢測。這意味著激發光不會被送回掃描鏡，而是直接進入位于靠
LaVision雙光子顯微鏡多線掃描雙光子成像（二）
2. 方法與結果??? 為了從激光掃描顯微鏡的功能性成像中得出重要結論，一個高的時間分辨率是很重要的。在低光情況下，這通常通過進行單線掃描來獲取。這被以一個垂直系統（VS）神經元的突觸前分支的激光共聚焦(Leica SP2)鈣離子成像示例 (see Fig. 1, Table 1). 這類神
LaVision雙光子顯微鏡多線掃描雙光子成像（一）
Journal of Neuroscience Methods 151 (2006) 276–286Application of multiline two-photon microscopy to functional in vivo imagingRafael Kurtz a,?, Matthi
LaVision雙光子顯微鏡腫瘤生長與入侵動態成像（一）
Dynamic imaging of cancer growth and invasion: a modiWedskin-fold chamber modelStephanie Alexander · Gudrun E. Koehl ·Markus Hirschberg · Edward K. Ge
LaVision雙光子顯微鏡腫瘤生長與入侵動態成像（三）
Fig 4. HT-1080雙色細胞的原位入侵模型。a 注射后6天入侵類型的分類。缺少入侵（上，左）并且散布單個細胞（上，右；白色箭頭），散射的或者緊密地絲狀整體入侵（下圖）。標尺250um。 b 45個連續的非依賴性腫瘤的按中所分入侵模式的頻率。11天時，沿著紋狀肌肉纖維集體入侵絲的定位。
LaVision雙光子顯微鏡腫瘤生長與入侵動態成像（二）
Fig 2. 腫瘤生長階段。 a 由落射熒光顯微鏡監測的移植瘤生長和入侵的時間進程。新生血管的插入，不存在（3天）和存在（7天）。標尺1mm。b 通過以day 1的體積進行歸一化的腫瘤體積。mean+-SD（n=9）。c HT-1080移植腫瘤在6天的時候的腫瘤形態，血管化，分生和凋亡。
雙光子顯微鏡活體單細胞成像揭示生物鐘發育過程
3月14日，PLOS Biology 期刊在線發表了題為《斑馬魚生物鐘的活體單細胞成像》的研究論文。該研究由中國科學院腦科學與智能技術卓越創新中心（神經科學研究所）、上海腦科學與類腦研究中心、神經科學國家重點實驗室嚴軍研究組、何杰研究組與安徽醫科大學附屬第一醫院教授李元海合作完成。該研究成功構建
LaVision雙光子顯微鏡無損傷無標記THG成像（一）
Label-free live brain imaging and targeted patching with third-harmonic generation microscopyStefan Wittea,b,1, Adrian Negreana,b,c, Johannes C. Lodde
LaVision雙光子顯微鏡無損傷無標記THG成像（三）
Fig. 4.THG成像深度與自動化細胞檢測 (A–C) 小鼠額前葉皮質的THG圖像，成像深度分別為100, 200, and 300 μm 。每幅圖像都是3個以2微米深度間隔獨立圖像的最大密度投影(D) 110 μm深度處神經元細胞的自動檢測THG圖像。細胞檢測的運算法則定義為以紅色顯示的
LaVision雙光子顯微鏡無損傷無標記THG成像（二）
主要結果Fig. 1.無標記活體大腦的三次諧波顯微成像(A)腦組織THG成像的epidetection幾何學圖示。插圖：THG原理。注意基質中沒有光學激發發生。(B) 樹突處的聚焦激光束。通過將激光聚焦體積設定到樹突直徑的幾倍大小，可以獲得部分相匹配，顯著的THG信號將會產生。(C)細胞
LaVision雙光子顯微鏡亞細胞水平的深層組織成像（二）
系統性能和Ti:Sa與OPO激光的同時使用??? 為了同時獲取樣品Ti：Sa和OPO的激發，一個分光器將Ti：Sa激光分解為泵浦OPO光束和直接成像光束(Figure 1a). 分光比例取決于足夠激發所需的光亮，先后依賴于樣品特征（光密度，連續性和熒光團吸收截面）和想要的成像深度。在實際應用
LaVision雙光子顯微鏡亞細胞水平的深層組織成像（四）
Figure 4．IR-MPM的光漂白，光毒性和組織穿透性. (a)以75mW能量的760, 880, and 1100 nm 激發波長連續掃描的釋放光的下降時測量的DsRed2光漂白。樣品被進行250次連續掃描，釋放光強度以整個掃描區域的平均像素強度量化，并對首幅圖像強度歸一化。虛線表明了
LaVision雙光子顯微鏡亞細胞水平的深層組織成像（五）
結論??? 這些結果表明紅外雙光子和二次諧波產生顯微成像對于無毒害的時間分辨的細胞行為調查的深層組織成像尤其有利。作為與其它脈沖飛秒激光系統相比的優勢，如Ch:forsterite (1230 nm) 和 Fianium fiber (1064 nm) 激光器，OPO產生的波長是可調諧的
LaVision雙光子顯微鏡亞細胞水平的深層組織成像（一）
紅外雙（多）光子顯微鏡：亞細胞水平的深層組織成像Volker Andresen1,2, Stephanie Alexander1, Wolfgang-Moritz Heupel1, Markus Hirschberg1, Robert M Hoffman3 and Peter Friedl1,4Cu
LaVision雙光子顯微鏡亞細胞水平的深層組織成像（三）
Figure 2 NIR和IR雙光子激發和釋放光譜。通過在同一焦平面對不同波長的Ti：Sa激光和OPO激光獲取多幅圖像并對掃描間的能量強度和漂白進行校正后的激發光譜。為獲取紅色和內在熒光團以及SHG的釋放光譜，信號通過物鏡，光譜儀和CCD相機檢測。 (a) 自然狀態下，SDS-PAGE前后的
雙光子共聚焦顯微鏡
雙光子共聚焦顯微鏡是為了解決生物檢測中樣品染料標記的光漂白現象而提出的，因為共焦孔徑光闌必須足夠小以獲得高分辨率的圖像，而孔徑小又會擋掉很大部分從樣品發出的熒光，包括從焦平面發出的熒光，這樣就要求激發光必須足夠強以獲得足夠的信噪比；而高強度的激光會使熒光染料在連續掃描過程中迅速褪色（即光漂白現象），
多光子顯微鏡成像技術：雙光子顯微鏡角膜成像
角膜提供了眼睛的大部分折射能力,由5層組成(圖1),從外到內依次是上皮層,鮑曼層、基質、角膜后彈力層(間質膜)、內皮層。 wx_article_20200815180121_819doe.jpg 圖1 角膜的組織學結構 上皮層負責阻擋異物落入角膜,厚約50μm,由三
多光子顯微鏡成像技術：雙光子顯微鏡角膜成像
角膜提供了眼睛的大部分折射能力,由5層組成(圖1),從外到內依次是上皮層,鮑曼層、基質、角膜后彈力層(間質膜)、內皮層。圖1 角膜的組織學結構上皮層負責阻擋異物落入角膜,厚約50μm,由三種細胞構成,從外到內依次是表層細胞、翼細胞和基底細胞。只有基底細胞可進行有絲分裂和分化,基底細胞的補充是由從角膜
與單光子共焦顯微鏡相比，雙光子共焦顯微鏡有何優點
雙光子共焦顯微鏡具有許多突出的優點：雙光子共焦顯微鏡可以采用波長比較長的、在生物組織中穿透能力比較強的紅外激光作為激發光源，因此可以解決生物組織中深層物質的層析成像問題。由于雙光子熒光波長距離發光波長，因此雙光子共焦顯微鏡可以實現暗場成像。雙光子可以避免普通成像中的熒光漂白問題和生物細胞的光致毒
與單光子共焦顯微鏡相比，雙光子共焦顯微鏡有何優點
雙光子共焦顯微鏡具有許多突出的優點：雙光子共焦顯微鏡可以采用波長比較長的、在生物組織中穿透能力比較強的紅外激光作為激發光源，因此可以解決生物組織中深層物質的層析成像問題。由于雙光子熒光波長距離發光波長，因此雙光子共焦顯微鏡可以實現暗場成像。雙光子可以避免普通成像中的熒光漂白問題和生物細胞的光致毒
與單光子共焦顯微鏡相比，雙光子共焦顯微鏡有何優點
雙光子共焦顯微鏡具有許多突出的優點：雙光子共焦顯微鏡可以采用波長比較長的、在生物組織中穿透能力比較強的紅外激光作為激發光源，因此可以解決生物組織中深層物質的層析成像問題。由于雙光子熒光波長距離發光波長，因此雙光子共焦顯微鏡可以實現暗場成像。雙光子可以避免普通成像中的熒光漂白問題和生物細胞的光致毒
雙光子共焦顯微鏡有何優點
雙光子共焦顯微鏡具有許多突出的優點：雙光子共焦顯微鏡可以采用波長比較長的、在生物組織中穿透能力比較強的紅外激光作為激發光源，因此可以解決生物組織中深層物質的層析成像問題。由于雙光子熒光波長距離發光波長，因此雙光子共焦顯微鏡可以實現暗場成像。雙光子可以避免普通成像中的熒光漂白問題和生物細胞的光致毒
LaVision雙光子顯微鏡多焦點掃描與光激活蛋白在...（一）
LaVision雙光子顯微鏡-多焦點掃描與光激活蛋白在核轉運研究中的應用Multifocal two-photon laser scanning microscopy combined with photo-activatable GFP for in vivo monitoring of intr
雙光子顯微鏡共享應用
儀器名稱：雙光子顯微鏡儀器編號：15017684產地：日本生產廠家：Olympus型號：FV1200MPE出廠日期：201403購置日期：201510所屬單位：生命學院>蛋白質研究技術中心>細胞影像平臺>設施細胞影像平臺放置地點：清華大學生物醫學館U6-119固定電話：固定手機：固定email：聯系
Nature：活體實時追蹤干細胞
來自耶魯醫學院的研究人員首次在未受損傷的動物體內觀察和操縱了組織再生過程中干細胞的行為。相關論文發布在7月1日的《自然》(Nature)雜志上。 組織發育與再生依賴于細胞與細胞間的相互作用和靶向干細胞及直系后代的信號。然而，目前對于導致適當組織再生的細胞行為還不是很理解。 在這篇文章
LaVision雙光子顯微鏡多焦點掃描與光激活蛋白在...（三）
Fig. 5. 煙草BY-2原生質體中At2g38360-DsRed的定位和平行雙光子熒光顯微鏡對pa-GFP的3D監測（64 foci, 920 nm, 240 mW)。 (a) 雙光子熒光下降的量化分析，給出了一個123s的擴散時間常數。Figs. 3 and 4中的數據源于兩個不同