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    高效分離外泌體的方法

    關于分離外泌體的最佳方法,仍然眾說紛紜,尚無定論。在諸多方法中,尺寸排除色譜法(size exclusion chromatography,SEC)因可分離得到高純度和濃縮的樣本,被廣泛用來分離生物液體樣本。SEC可通過離心或重力流進行。在重力流的作用下,一個樣本可以收集到多組分離組分,并可分析得到高純度外泌體。技術介紹Exo-spin?技術結合了沉淀法和SEC法,沉淀劑可以從樣本中將外泌體富集出來,但是只使用沉淀劑方法,會導致外泌體和雜蛋白等雜質一起沉降,結合SEC純化管柱,可去除蛋白等雜質,大大提高了外泌體純度。1.SEC原理介紹 SEC方法是一種根據尺寸大小分離溶液中顆粒的方法。色譜柱中裝有穩定的聚合物珠(樹脂),形成多孔基質。當將含有外泌體的溶液添加到SEC色譜柱中時,較小的顆粒將被捕獲在孔中,而較大的顆粒則不會進入孔中并先洗脫。因此,不同階段的洗脫液中會包含不同大小的......閱讀全文

    生化實驗講義(理論部分)——層析技術(十)

    配體與基質偶聯后,通常要測定配體的結合量以了解其與基質的偶聯情況,同時也可以推斷親和層析過程中對待分離的生物大分子吸附容量。配體結合量通常是用每毫升或每克基質結合的配體的量來表示。測定配體結合量的方法很多,下面簡單介紹幾種:1) 差量分析:根據加入配體的總量減去配體與基質偶聯后洗滌出來的量即可大致推

    親和層析(Affinity Chromatography)(2)

    ⑵基質的活化基質的活化是指通過對基質進行一定的化學處理,使基質表面上的一些化學基團轉變為易于和特定配體結合的活性基團。配體和基質的偶聯,通常首先要進行基質的活化。①多糖基質的活化多糖基質尤其是瓊脂糖是一種常用的基質。瓊脂糖通常含有大量的羥基,通過一定的處理可以引入各種適宜的活性基團。瓊脂糖的活化方法

    生化實驗講義(理論部分)——層析技術(九)

    3.4.3 親和吸附劑選擇并制備合適的親和吸附劑是親和層析的關鍵步驟之一。它包括基質和配體的選擇、基質的活化、配體與基質的偶聯等等。這里主要介紹一些基本的原理,關于活化、偶聯等過程的具體實驗操作可以參閱本書后面的實驗部分或相應的參考書。基質⑴ 基質的性質基質構成固定相的骨架,親和層析的基質應該具有以

    親和層析(Affinity Chromatography)(3)

    ⑥元素分析:如果配體中含有某種特別的元素,通過元素分析就可以確定配體結合量。⑦放射性分析法:偶聯中加入一定量帶有同位素的配體,通過放射性分析確定配體結合量,這是一種非常靈敏的方法。影響配體結合量的因素很多,包括基質和配體的性質、基質的活化方法及條件、基質和配體偶聯反應的條件等等。例如通常溴化氰活化的

    親和層析(affinity chromatography)過程中的注意事項

    1.上樣親和層析純化生物大分子通常采用柱層析的方法。親和層析柱一般很短,通常10cm左右。上樣時應注意選擇適當的條件,包括上樣流速、緩沖液種類、 pH、離子強度、溫度等,以使待分離的物質能夠充分結合在親和吸附劑上。一般生物大分子和配體之間達到平衡的速度很慢,所以樣品液的濃度不易過高,上樣時流速應比較

    一文了解親和層析柱裝柱注意事項

      親和層析 一般用于純化蛋白質和核酸等大分子物質的方法的主要依據是各種大分子物質之間理化特性的差異性。下面我們來分析一下親和層析過程中的注意事項。  1.上樣  親和層析純化生物大分子通常采用柱層析的方法。親和層析柱一般很短,通常10cm左右。上樣時應注意選擇適當的條件,包括上樣流速、緩沖液種類、

    微流控生物芯片上的液體活檢技術

       以新型生物芯片為代表的自動化智能型醫療技術從腫瘤診療研究走向早期診斷及動態監控等臨床應用,成為精準醫療時代的重要組成。其中,液體活檢是最重要的研究領域之一,在癌癥早篩、預后監測、用藥指導、患者分層等領域均表現出十足的潛力,出現了大批重要臨床結果。  2018年已近尾聲,縱覽一年液體活檢助力精準

    基因檢測行業調研(包含企業梳理、行業監管)

      一、基因檢測公司梳理  目前全國涉及基因檢測概念的公司有200余家,按照業務范圍劃分,這些公司可以分為:①最上游的基因檢測儀器開發企業(測序儀、芯片掃描儀、PCR設備),②提供樣本處理試劑和耗材的中上游企業(建庫試劑盒、檢測試劑盒、工具酶、基因芯片),③提供第三方基因檢測服務的中游企業

    東曹亮相第19屆全國色譜學術報告會

      2013年4月1日,第19屆全國色譜學術報告會及儀器展覽會在福州西湖賓館召開,東曹(上海)生物科技有限公司作為大會銀牌贊助商贊助并參加了此次會議,展出了多款色譜柱及填料。 東曹(上海)生物科技有限公司展臺 東曹色譜柱填料 東曹色譜柱家族   分會中東曹(上海)生物科技有限公司的

    外泌體與腫瘤細胞轉移及惡化的關聯

      腫瘤的形成和惡化過程不僅與腫瘤細胞彼此間的相互作用有關,還和腫瘤細胞和正常細胞所構成微環境的相互作用有關。例如,從很早開始科學家們就觀察,在很多的腫瘤組織中浸潤著正常的免疫細胞,而臨床認為慢性炎癥會增加產生腫瘤的風險。此外,有報告顯示成纖維細胞和內皮細胞等細胞構成的腫瘤微環境,有助于腫瘤細胞的增

    親和吸附劑(Affinity Absorbent,AA)-3

    2.配體與待分離的物質之間的親和力要有較強的特異性,也就是說配體與待分離物質有適當的親和力,而與樣品中其它組分沒有明顯的親和力,對其它組分沒有非特異性吸附作用。這是保證親和層析具有高分辨率的重要因素。3.配體要能夠與基質穩定的共價結合,在實驗過程中不易脫落,并且配體與基質偶聯后,對其結構沒有明顯改變

    親和吸附劑(Affinity Absorbent,AA)-2

    2.環氧乙烷基活化這類方法活化后的基質都含有環氧乙烷基。如在含有NaBH4的堿性條件下,1,4-丁二醇-雙縮水甘油醚的一個環氧乙烷基可以與羥基反應,而將另一個環氧乙烷基結合在基質上。另外也可以用環氧氯丙烷活化,將環氧乙烷基結合在基質上。這種活化方法的優點是活化后不引入電荷基團,而且基質與配體形成的N

    工業微生物產生菌的分離篩選(三)

    經富集培養以后的樣品,目的微生物得到增殖,占了優勢,其他種類的微生物在數量上相對減少,但并未死亡.富集后的培養液中仍然有多種微生物混雜在一起,即使占了優勢的一類微生物中,也并非純種.例如同樣一群以油脂為碳源的脂肪酶產生菌,有的是細菌,有的是霉菌,有的是芽孢桿菌,有的不產芽孢,有的生產能力強,有的生產

    工業微生物產生菌的分離篩選(三)

    經富集培養以后的樣品,目的微生物得到增殖,占了優勢,其他種類的微生物在數量上相對減少,但并未死亡.富集后的培養液中仍然有多種微生物混雜在一起,即使占了優勢的一類微生物中,也并非純種.例如同樣一群以油脂為碳源的脂肪酶產生菌,有的是細菌,有的是霉菌,有的是芽孢桿菌,有的不產芽孢,有的生產能力強,有的生產

    工業微生物產生菌的分離篩選(3)

    第三節   微生物的分離經富集培養以后的樣品,目的微生物得到增殖,占了優勢,其他種類的微生物在數量上相對減少,但并未死亡。富集后的培養液中仍然有多種微生物混雜在一起,即使占了優勢的一類微生物中,也并非純種。例如同樣一群以油脂為碳源的脂肪酶產生菌,有的是細菌,有的是霉菌,有的是芽孢

    工業微生物產生菌的分離篩選(3)

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    手性分離色譜

    是采用色譜技術(TLC、GC和HPLC)分離測定光學異構體藥物的有效方法。由于許多藥物的對映體(Enantiomer)之間在藥理、毒理乃至臨床性質方面存在著較大差異,有必要對某些手性藥物進行對映體的純度檢查。(一)原理和方法:對映體化合物之間除了對偏振光的偏轉方向恰好相反外,其理化性質是完全相同的,

    手性物質的分離分析方法

          手性物質的分離分析方法有手性源合成法、結晶拆分法、化學拆分法、酶拆分法、膜拆分法、萃取拆分法和色譜拆分法等,常與離心機分離技術結合使用。1、手性源合成法:        手性源合

    親和層析(Affinity Chromatography)(1)

    親和層析(Affinity Chromatography)是利用生物分子間專一的親和力而進行分離的一種層析技術。人們很早就認識到蛋白質、酶等生物大分子物質能和某些相對應的分子專一而可逆的結合,可以用于對生物分子的分離純化。但由于技術上的限制,主要是沒有合適的固定配體的方法,所以在實驗中沒有廣泛的

    納米顆粒與外泌體電鏡圖像的對比分析

    各位外泌體領域的朋友們,你們是不是打到過這樣的電鏡圖? 如果打到過,那就來讀一下這個文章吧。讓我們一起學習一下如何識別電鏡下的外泌體。外泌體是這幾年開始興起的一個朝陽領域,它是細胞分泌的一種直徑在30-100nm(另一種說法是 30-150nm)的膜泡結構,可以介導細胞間物質的交換和信

    藥物分析新技術和進展

      藥物分析   藥物分析是藥學中的一門分支學科,它是藥學和分析科學的交叉學科,其內容包括藥物(原料,制劑,制藥原料及中間體等)的檢驗,藥物穩定性,生物利用皮,藥物臨床監測以及中草藥(動物,植物,礦物類)檢定等諸多方面的有關定性定量分析工作.其目的是確保藥物的質量,保證病人用藥的安全有效.此外,

    藥物分析新技術和進展

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    藥物分析新技術和進展(二)

    1.以TLC,HPLC等分離制各為基礎的分析方法這一類方法主要包括代謝物的分離,檢測,純品制備與結構鑒定幾方面的工作.藥物的分離檢測,主要方法有柱色譜,TLL,Gc與叩凹 叩比常用于藥物及其代謝產物的同時分離與檢測.根據藥物代謝的一般規律,代謝物的極性較原藥大,所以在反相叩比系統中代謝物一般

    外泌體表征測量技術

    外泌體最早發現于體外培養的綿羊紅細胞上清液中,是細胞主動分泌的大小較為均一,直徑為40~100nm,密度1.10~1.18g/ml的囊泡樣小體。細胞外泌體攜帶多種蛋白質、mRNA、miRNA,參與細胞通訊、細胞遷移、血管新生和腫瘤細胞生長等過程并且有可能成為藥物的天然載體,應用于臨床治療。然而

    生化實驗講義(理論部分)——層析技術(十一)

    3.4.5 親和層析的應用親和層析的應用主要是生物大分子的分離、純化。下面簡單介紹一些親和層析技術用于純化各種生物大分子的情況。抗原和抗體利用抗原、抗體之間高特異的親和力而進行分離的方法又稱為免疫親和層析。例如將抗原結合于親和層析基質上,就可以從血清中分離其對應的抗體。在蛋白質工程菌發酵液中所需蛋白

    核酸分離與純化的原理及其方法學進展

    核酸的分離與純化技術是生物化學與分子生物學的一項基本技術。隨著分子生物學技術廣泛應用于生物學、醫學及其相關等領域,核酸的分離與純化技術也得到進一步發展。各種新方法、經完善后的傳統經典方法以及商品試劑方法的不斷出現,極大地推動了分子生物學的發展。現就核酸分離與純化的原理及其方法學進展作一綜述。核酸分離

    多位專家指導:如何提取和研究血液DNA,RNA與蛋白

      血液是唯一與所有器官都有接觸的組織,攜帶著有關機體的大量寶貴信息。在理論上,檢測血液攜帶的 DNA、RNA、囊泡和細胞殘骸可以幫助人們診斷和監控各種疾病。  產前基因篩查是血液檢測的一個重要應用,通過分析孕婦血液中的胎兒DNA來鑒定染色體異常(比如唐氏綜合癥)。此外,越來越多的研究者開始關注血液

    生化實驗講義(理論部分)——層析技術(八)

    離子交換劑的總交換容量通常以每毫克或每毫升交換劑含有可解離基團的毫克當量數(meq / mg或meq / ml)來表示。通常可以由滴定法測定。陽離子交換劑首先用HCl處理,使其平衡離子為H?。再用水洗至中性,對于強酸型離子交換劑,用NaCl充分置換出H?,再用標準濃度的NaOH滴定生成的HCl,

    核酸分離與純化的原理及其方法學進展

     核酸的分離與純化技術是生物化學與分子生物學的一項基本技術。隨著分子生物學技術廣泛應用于生物學、醫學及其相關等領域,核酸的分離與純化技術也得到進一步發展。各種新方法、經完善后的傳統經典方法以及商品試劑方法的不斷出現,極大地推動了分子生物學的發展。現就核酸分離與純化的原理及其方法學進展作一綜

    核酸分離與純化的原理及其方法學進展

    核酸的分離與純化技術是生物化學與分子生物學的一項基本技術。隨著分子生物學技術廣泛應用于生物學、醫學及其相關等領域,核酸的分離與純化技術也得到進一步發展。各種新方法、經完善后的傳統經典方法以及商品試劑方法的不斷出現,極大地推動了分子生物學的發展。現就核酸分離與純化的原理及其方法學進展作一綜述。核酸分離

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