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  • 交聯染色質免疫共沉淀(XChIP)實驗設計

    ChIP是一種強大的確定蛋白或者組蛋白修飾在基因組上定位的實驗方法。染色質被分離出來后采用抗體與抗原的結合來判定目的蛋白是否結合在特定的DNA序列上或者判定目的蛋白結合位點在全基因組范圍的分布(微陣列或DNA序列)。這種方法具有空間性與時效性。該實驗設計為如何在細胞中進行ChIP實驗提供了詳細的步驟。1. 交聯和細胞收獲甲醛可以將蛋白質交聯到DNA上。交聯結果的好壞決定于交聯時間的把握。我們建議樣品交聯的時間一般為2-30分鐘。過度的交聯會減少抗原的結合性和超聲斷裂的效率。抗原決定簇也會被掩蓋。加入甘氨酸可以消除甲醛使交聯反應終止。1.1.準備兩個長滿細胞的150cm2的細胞培養皿(1*107-5*107 個細胞/皿)。將甲醛直接滴入PBS洗過的細胞培養皿中,使其終濃度為0.75%,然后在室溫緩慢旋轉10分鐘,使蛋白和DNA發生交聯。1.2 加入甘氨酸使其終濃度為125mM,在室溫晃動孵育5分鐘。1.3 使用10ml預冷PBS清......閱讀全文

    交聯染色質免疫共沉淀(XChIP)實驗設計

    ChIP是一種強大的確定蛋白或者組蛋白修飾在基因組上定位的實驗方法。染色質被分離出來后采用抗體與抗原的結合來判定目的蛋白是否結合在特定的DNA序列上或者判定目的蛋白結合位點在全基因組范圍的分布(微陣列或DNA序列)。這種方法具有空間性與時效性。該實驗設計為如何在細胞中進行ChIP實驗提供了詳細的步驟

    體內甲醛交聯及染色質免疫沉淀研究DNA和蛋白質作用

    染色質由真核基因組包裝而成,它參與了轉錄、復制、重組、修復等許多以DNA一蛋白質相互作用為基礎的生化過程。研究者感興趣的是這些過程涉及到哪些特異的基因或DNA序列,有哪些蛋白質參與。盡管有許多人對染色質進行分類,就像Holde將其分為轉錄活性或非活性位點,但染色質構本身是動態的,并且DNA與非組蛋白

    關于交聯聚乙烯的交聯原理介紹

      聚乙烯([CH2-CH2]n,n-重復單元數)是含有碳氫兩種元素的高分子化合物,具有線型或支鏈式分子結構大分子鏈,常溫條件下呈固態形式,在固態形式的聚乙烯中呈晶相和無定型相共存形式。聚乙烯的相對分子量在6千-30萬之間。 [5]  聚乙烯的電氣絕緣性能優良,但因其耐熱性能不佳而影響了其用于電纜絕

    交聯聚乙烯的物理交聯方法介紹

      輻射交聯:將聚乙烯制品,如包覆在導線上的聚乙烯護套、薄膜、薄壁管等產品用γ-射線、高能射線進行照射進行交聯(引發聚乙烯大分子產生自由基,形成C-C交聯鏈)。交聯度受輻射劑量及溫度的影響,交聯點隨輻射劑量的增加而增加,因此通過控制輻射條件,可以獲得具有一定交聯度的交聯聚乙烯制品。?  用輻射交聯法

    交聯聚乙烯化學交聯法的概述

      化學交聯則是采用化學交聯劑使聚合物產生交聯,由線性結構轉變為網狀結構。  交聯劑的選擇應視聚合物品種,加工工藝和制品性能而定,理想的交聯劑除滿足一些具體的要求外,還應具有如下基本要求:交聯率高,交聯結構穩定;加工安全性大,使用方便,加入樹脂后的有效期適中,無過早或過晚交聯之弊;不影響制品的加工性

    常用交聯劑與交聯劑選擇

    什么是交聯劑??? 交聯劑是一類小分子化合物,分子量一般在200-600之間,具有2個或者更多的針對特殊基團(氨基、巰基等)的反應性末端,可以和2個或者更多的分子分別偶聯從而使這些分子結合在一起。在生命科學研究中,巧妙地運用交聯劑可以使很多工作取得突破。交聯劑的應用??? 交聯劑已經被廣泛地應用于:

    關于交聯聚乙烯化學交聯的分類介紹

      (1)過氧化物交聯及交聯劑  過氧化物交聯,一般采用有機過氧化物為交聯劑,在熱的作用下,分解而生成活性的游離基,這些游離基使聚合物碳鏈上生成活性點,并產生碳一碳交聯,形成網狀結構。該技術需要高壓擠出設備,使交聯反應在機筒內進行,然后使用快速加熱方式對制品加熱,從而產生交聯制品。所以采用過氧化物交

    磷酸交聯AFFIGEL-10-親和介質實驗——肽鏈交聯

    本實驗描述了將磷酸肽鏈/非磷酸肽鏈和磷酸酪氨酸交聯到 Affi-Gel 10 親和介質上以利用親和柱層析法純化抗體的方法。實驗方法原理本方案描述了將磷酸肽鏈或非磷酸肽鏈交聯到 Affi-Gel 10 親和介質上以利用親和柱層析法純化抗體的方法。這里所詳述的無水交聯法是最有效的肽鏈交聯方法。按此法的步

    DNA交聯的概念

    中文名稱DNA交聯英文名稱DNA crosslink定  義DNA分子的兩條鏈或同一DNA鏈的不同區段的側鏈間形成的共價相互作用。通過交聯能增加DNA分子的剛性。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)

    抗原準備-交聯方法

    化學合成的多肽抗原是小分子, 本身很難具有好的抗原性,只能誘導動物產生很弱的免疫反應,因而與載體蛋白交聯是很重要的。載體蛋白含有很多抗原決定基,能夠刺激T-幫助細胞,進而誘導 B-細胞反應。用于與多肽交聯的載體蛋白有多種,其中*常用的是keyhole limpet hemacyanin (K

    化學交聯原理

    ? 化學交聯是通過形成共價鍵將兩種或多種分子連接在一起的一種化學方法。其中,共價鍵的形成主要依賴于使用特定的交聯試劑,通常情況下,交聯試劑分子都含有可與蛋白質或其他分子發生化學反應的活性基團,如氨基,巰基等。目前,交聯試劑已經應用于蛋白質-蛋白質相互作用,蛋白質三維結構,及細胞膜分子結合等方面的研究

    細胞化學詞匯DNA交聯

    中文名稱:DNA損傷定?????? 義:復制過程中發生的DNA核苷酸序列永久性改變,并導致遺傳特征改變的現象

    細胞化學詞匯DNA交聯

    中文名稱:DNA交聯英文名稱:DNA crosslink定  義:DNA分子的兩條鏈或同一DNA鏈的不同區段的側鏈間形成的共價相互作用。通過交聯能增加DNA分子的剛性。應用學科:生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)

    什么是交聯聚乙烯?

      聚乙烯(PE)交聯技術是提高其材料性能的重要手段之一。經過交聯改性的PE可使其性能得到大幅度的改善,不僅顯著提高了PE的力學性能、耐環境應力開裂性能、耐化學藥品腐蝕性能、抗蠕變性和電性能等綜合性能,而且非常明顯地提高了耐溫等級,可使PE的耐熱溫度從70℃提高到100℃以上,從而大大拓寬了PE的應

    磷酸交聯AFFIGEL-10-親和介質實驗——磷酸酪氨酸交聯

    實驗方法原理磷酸酪氨酸在肽交聯時所用的無水條件下是不溶的,因此交聯必須在水相條件下進行。按此節的步驟最終能產生 10 ml 柱床體積的親和樹脂;與肽類似,每毫升 Affi-Gel 10上能交聯 3 μmol 磷酸酪氨酸。實驗材料磷酸酪氨酸Affi-Gel 10試劑、試劑盒NaOH (可選)碳酸氫鈉乙

    紫外交聯的基本定義

    DNA結合蛋白與DNA結合位點的結合后經紫外照射后可形成共價鍵。如果DNA預先經過標記,則共價結合的復合物經電泳分離和制作放射自顯影圖譜,能夠快速準確的檢測DNA結合蛋白及其分子量。

    紫外交聯儀的特點

      ·為使核苷酸固定在雜交膜上,傳統的方法是將膜置于80℃真空烘箱中烘2小時在本紫外交聯儀上僅需在254nm紫外光下照射幾秒鐘即可。  ·紫外照射可使雜交信號比傳統烘烤法提高5-10倍。  ·由于紫外交聯儀配置了一種紫外能量程序設計系統(Joules/c㎡),即其中的時間積分儀連續檢測紫外光的照射。

    關于交聯聚乙烯的簡介

      聚乙烯(PE)是五大通用塑料之一,其產量和消費量位居各種合成樹脂之首,在工業、農業和日常生活中得到廣泛的應用。但是聚乙烯的耐高溫性能較差。力學性能及耐化學性能有時也不能滿足實際使用的要求。因此對聚乙烯進行改性一直是聚乙烯產品開發應用的關鍵,聚乙烯交聯技術就是提高其材料性能的一種重要技術。經過交聯

    概述交聯聚乙烯的應用

      交聯聚乙烯由于具有優異的性能,被用作火箭、導彈、電機、變壓器等所需要的耐高壓、高周波、耐熱的絕緣材料和電線電纜包覆物.制造熱收縮管、熱收縮膜、各種耐熱管材、泡沫塑料、耐腐蝕的化學設備襯里、部件及容器,制造阻燃建材等。目前用量最大的領域主要是電線電纜、管材和泡沫塑料等。

    什么是蛋白質交聯

    蛋白質在食品加工和貯藏過程中發生的物理、化學和營養變化:   (1)在加熱條件下的變化:   有利的方面:1)蛋白質變性,肽鏈松散,容易受到消化的作用,提高了消化率 和氨基酸的生物有效性;2)鈍化蛋白酶、酯酶、多酚氧化酶等,防止食品在保藏期間不發生色澤和風味變化; 3)抑制外源凝集素和消除蛋白酶抑制

    常染色質與異染色質的功能差異

    常染色質區域的基因可以被轉錄為信使RNA。常染色質區域非折疊的結構允許基因調控蛋白和RNA聚合酶與其上的DNA序列結合,從而開啟轉錄過程。在轉錄過程中,并非所有的常染色質都會被轉錄,但基本上非轉錄的部分會折疊為異染色質以保護暫時其上不用的基因。因此細胞的活性與細胞核中的常染色質數目有直接關系。常染色

    異染色質和常染色質的結構差異

    染色質可以分為兩種類群,異染色質和常染色質。最開始,這兩種形式是通過其在染色之后的顏色深淺區分的,常染色質一般著色較淺,而異染色質著色很深,表明其緊密聚集。異染色質通常集中在細胞核的邊緣區域。然而,不同于這種早期的二分法,最近的研究表明在動物和植物體內都擁有不止這兩種染色體結構,可能會有四到五種,區

    異染色質的主要類型組成性異染色質

    組成性異染色質,指除S期以外在整個細胞周期均處于聚縮狀態, DNA包裝比基本不變,可構成多個染色中心。

    異染色質的主要類型兼性異染色質

    在一定時期的特種細胞的細胞核內, 原來的常染色質可轉變成兼性異染色質。如雄性個體的細胞含有一個瘦小的Y染色體和一個大的X染色體, 由于X和Y染色體上很少有共同的基因, 對于雄性來說, X染色體上的基因就只有一個拷貝。雖然雌性細胞有兩條X染色體, 也只有一條具有轉錄活性, 另外一條X染色體像異染色質一

    紫外交聯儀的產品特點

    紫外交聯儀是一種多用途的254mm紫外輻射系統主要用于將核酸交聯于膜上。還可用于瓊脂糖凝膠中DNA的切割、RecA突變篩選、嘧啶二聚體產生的部分限制性內切酶消化、UV滅菌消除PCR污染等。在紫外滅菌、聚合物紫外處理等方面也有應用價值。紫外交聯儀特點:1、為使核苷酸固定在雜交膜上,傳統的方法是將膜置于

    膠原蛋白的交聯改性方法介紹

    指使膠原分子內部和分子間通過共價健結合提高膠原纖維的張力和穩定性的方法。該法又分為物理方法、化學方法和低溫等離子體法,生物學方法;其中物理方法、化學方法是最常用的交聯改性方法,生物學方法改性膠原蛋白主要在研究有關動物老化的生命現象中涉及,在研制膠原基生物醫學材料中少見報道。

    染色質免疫沉淀(ChIP)技術的難點

    染色質免疫沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,簡稱ChIP)是研究體內蛋白質與DNA相互作用的一種技術。它利用抗原抗體的特異性反應,可以真實地反映體內蛋白分子與基因組DNA結合的狀況。下面我們就最基本的實驗步驟,實驗中的小技巧以及需要注意的問題簡單介紹一下。1.

    染色質的分類

    間期染色質按其形態特征、活性狀態和染色性能區分為兩種類型:常染色質和異染色質。按功能狀態的不同可將染色質分為活性染色質和非活性染色質。

    染色質的定義

      染色體在細胞周期的間期時DNA的螺旋結構松散,呈網狀或斑塊狀不定形物,即染色質。以濃集狀態存在者,稱異染色質(1~eterochromatin);以分散狀態存在者,稱常染色質(euchromatin)。常染色質染色較淺且均勻,異染色質染色深。性染色質與性染色體(x染色體和Y染色體)有關,稱x染色

    性染色質檢測

    實驗方法原理 在間期細胞核中,女性X染色質和男性Y染色質均可用特殊染色法顯示出來。女性的兩個X染色體中的一個,在間期時的染色質呈異固縮(Heteropyconosis),呈深染的小體稱Barr氏體。Barr氏體位于間期細胞核內面,呈三角形或半月形小體,易為碳酸復紅或硫堇等染料著色。正常女性Barr氏

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