大分子量蛋白轉印的5個技巧
做western blot印跡膜時，較大的蛋白質眾所周知是難以處理的。 特別是，您可能很難實現良好的轉印效率。 在某些方面，蛋白質難以朝著你想要的方向前進。我們將給5點建議，幫助膠上大分子量蛋白的轉印。01犧牲膠的韌性來提高效率低濃度的丙烯酰胺凝膠可能難以操作。一旦手指觸摸它就會撕裂？ 但是，與高濃度的凝膠相比，大蛋白將更有效地從較低濃度的凝膠中移出（分辨率更好）。因此，提高你的靈活性和耐心，嘗試6-7.5％的凝膠。 或者可以嘗試使用梯度凝膠，可以同時分辨小分子量和大分子量蛋白質。02去除去垢劑較大的蛋白質可能在凝膠中沉淀，抑制轉印。 在SDS-PAGE期間添加的SDS通常會解決這個問題，但較大的蛋白質可能需要更多的SDS。 您可以在轉印緩沖液中添加最多0.1％的SDS以阻止沉淀的產生。因為SDS抑制蛋白質與膜的結合，因此請嘗試從低濃度的SDS開始（例如0.0375％），然后逐步提高。如果確實在轉印緩沖液中添加了......閱讀全文
大分子量蛋白轉印的5個技巧
做western blot印跡膜時，較大的蛋白質眾所周知是難以處理的。 特別是，您可能很難實現良好的轉印效率。 在某些方面，蛋白質難以朝著你想要的方向前進。我們將給5點建議，幫助膠上大分子量蛋白的轉印。01犧牲膠的韌性來提高效率低濃度的丙烯酰胺凝膠可能難以操作。一旦手指觸摸它就會撕裂？ 但是，與
大分子量蛋白轉印的5個技巧
做western blot印跡膜時，較大的蛋白質眾所周知是難以處理的。 特別是，您可能很難實現良好的轉印效率。 在某些方面，蛋白質難以朝著你想要的方向前進。 我們將給5點建議，幫助膠上大分子量蛋白的轉印。 01 犧牲膠的韌性來提高效率 低濃度的丙烯酰胺凝膠可能難以操作。一旦手指觸摸它就會
一文讀懂蛋白質轉印原理－大分子量蛋白轉印有哪些技巧
通過凝膠電泳分離蛋白后，蛋白質被轉移到固體膜載體上進行后續步驟。有效的轉印依賴于膜的選擇、所使用的轉印設備的類型以及轉印緩沖液的組成。 轉印條件 蛋白的有效轉印依賴于蛋白質從凝膠中遷移出來，也依賴于蛋白在膜上的滯留。像凝膠電泳一樣，轉印步驟將帶負電荷的蛋白轉印到帶正電荷的電極上。轉印效率受所
蛋白質轉印法
蛋白質經SDS-PAGE后，膠片浸入轉印緩沖液，蛋白質可被轉印到硝化纖維紙（nitrocellulose） 上，先經尿素洗去SDS，并使蛋白質回復原態抗原性，可使用抗體進行免疫染色 （Towbin et al, 1979）。儀器用具：電泳轉印槽 （Hoefer Transphor TE 52）：轉印
蛋白質轉印法檢定蛋白質
蛋白質轉印法檢定蛋白質?????蛋白質經SDS-PAGE后，膠片浸入轉印緩沖液，蛋白質可被轉印到硝化纖維紙（nitrocellulose）?上，先經?素洗去SDS，并使蛋白質回?原態抗原性，可使用抗體進?免疫染色?（Towbin?et?al,?1979）。儀器用具：電泳轉印槽?（Hoefer?Tra
如何在Western－Blot檢測時提高大分子量蛋白的轉印效率？
① 增加轉印時間。② 在轉印緩沖液中添加0.01%或0.02%的SDS以提高蛋白從膠中轉出的效率。③ 減少轉印緩沖液中甲醇的量。④ 使用低濃度的膠更利于轉印。
Southern－轉印分析
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜，經烘烤或UV 照射后，可使DNA 固定在膜上，以進行探針的雜合（hybridization） 反應。儀器用具：玻璃缸；玻璃板或吸水海綿；Crosslinker （Stratalinker 1800, Stratagene）
浸入式電轉印
實驗概要采用浸入法將蛋白質從凝膠轉移至硝酸纖維素膜是先將凝膠緊貼于一塊硝酸纖維素膜，然后再將這種夾層組合浸入盛有大量緩沖液的轉印槽內，使電流從轉印槽的一側通向另一側。通過電洗脫的方法可將蛋白質從凝膠中轉印至濾膜上，如同在凝膠中遷移，只不過移動方向與膠平面垂直。若操作仔細，這是一種可將許多蛋白質轉印至
新技術助蛋白質轉印法提速
在發明蛋白質印跡法（Western Blot）出現了30多年之后，這項技術仍然是獲取特定蛋白可靠鑒定的關鍵。許多近期涌現的產品利用各種方法來提高蛋白質印跡實驗的可重復性、敏感性、定量性以及速度。 有三個人都被認為發展了蛋白質的免疫印跡方法，但其中只有一人才算得上是“Western B
半干轉印與濕式轉印的區別－|－WEALTEC－威泰克
剛接觸 Western Blot 不久的用戶，在選購 WB 設備時，經常會遇到儀器選型的問題：為什么常見的蛋白質電泳的轉膜有兩種方式可以選擇，干式和濕式，那么哪種方法更適合我們呢？這里我們結合美國 WEALTEC 公司的 E-Blotter 濕轉槽和 YRDIMES 快速半干轉印槽舉例說明。
Western－blot轉印的優化
從SDS凝膠中進行Western蛋白轉印的優化需要對一系列參數進行考慮。目的是轉印所有凝膠上的蛋白并將其定量地轉移到轉印膜上。進行高效轉印需要一定程度的優化，尤其是對于大分子量和小分子量蛋白。轉印后，凝膠上應不殘留或殘留很少的蛋白。可以在轉印后進行染色進行檢測。轉移出凝膠的蛋白應該僅在接觸凝膠的膜的
Southern－轉印分析方法步驟
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜，經烘烤或UV 照射后，可使DNA 固定在膜上，以進行探針的雜合（hybridization） 反應。儀器用具：玻璃缸；玻璃板或吸水海綿；Crosslinker （Stratalinker 1800, Stratagene）
半干電轉印法
實驗概要本方法是先將凝膠緊貼于一塊硝酸纖維濾膜，然后再將這種夾層組合直接置于兩個乎板電極之間，采用這種半干方法可將蛋白質從凝膠中轉印至硝酸纖維素膜上。平板可以是石墨(這種平板較便宜，但使用100次后必須更換)制成的，也可以是鉑金的(這種子板價格較貴，但使用壽命較長)。通過電洗脫將蛋白質從凝膠中轉印至
半干電轉印法
先將凝膠緊貼于一塊硝酸纖維濾膜，然后再將這種夾層組合直接置于兩個乎板電極之間，采用這種半干方法可將蛋白質從凝膠中轉印至硝酸纖維素膜上（Kyhse-Andersen1984）。平板可以是石墨（這種平板較便宜，但使用100次后必須更換）制成的，也可以是鉑金的（這種子板價格較貴，但使用壽命較長）。通過電洗
目的蛋白分子量與轉膜時間對應關系
轉膜分干轉和濕轉，恒流轉膜一般0.8mA/cm2分子量與轉膜時間對應關系分離膠濃度（％） 線性分離范圍 電泳時間(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量與轉膜時間對應關系
轉膜分干轉和濕轉，恒流轉膜一般0.8mA/cm2分子量與轉膜時間對應關系分離膠濃度（％） 線性分離范圍 電泳時間(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量與轉膜時間對應關系
轉膜分干轉和濕轉，恒流轉膜一般0.8mA/cm2分子量與轉膜時間對應關系分離膠濃度（％） 線性分離范圍 電泳時間(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量與轉膜時間對應關系
轉膜分干轉和濕轉，恒流轉膜一般0.8mA/cm2分子量與轉膜時間對應關系分離膠濃度（％） 線性分離范圍 電泳時間(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量與轉膜時間對應關系
轉膜分干轉和濕轉，恒流轉膜一般0.8mA/cm2分子量與轉膜時間對應關系分離膠濃度（％） 線性分離范圍 電泳時間(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量與轉膜時間對應關系
轉膜分干轉和濕轉，恒流轉膜一般0.8mA/cm2分子量與轉膜時間對應關系分離膠濃度（％） 線性分離范圍 電泳時間(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量與轉膜時間對應關系
轉膜分干轉和濕轉，恒流轉膜一般0.8mA/cm2分子量與轉膜時間對應關系分離膠濃度（％） 線性分離范圍 電泳時間(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
目的蛋白分子量與轉膜時間對應關系
轉膜分干轉和濕轉，恒流轉膜一般0.8mA/cm2分子量與轉膜時間對應關系分離膠濃度（％） 線性分離范圍 電泳時間(h)15 10~43 0.512 12~60 0.7510 20~80 1.57.5 36~94 1.5~2.0
Southern－印跡實驗——電轉印法
實驗方法原理因為聚丙烯酰胺凝膠的扎徑太小，DNA不能在其橫截面上有效地擴散，毛細管轉移法不適用DNA從聚丙烯酰胺凝膠的轉移。因此，聚丙烯酰胺凝晈必須在低離子強度的緩沖液中用電轉移法進行印跡。實驗材料DNA試劑、試劑盒TBE儀器、耗材Scotch-Brite墊Whatman濾紙實驗步驟1. ?在非變性
濕式轉印槽使用教程
濕式轉印槽可快速、高質量地轉印小型凝膠。作為電泳系統的一個組件，小型轉印槽能容納2個凝膠三明治轉印夾， 用于在電泳槽內電轉印兩塊小凝膠。
轉印槽使用方法步驟
伯樂bio-rad轉印槽可快速、高質量地轉印小型凝膠。作為Mini-PROTEAN 3 電泳系統的一個組件，伯樂bio-rad轉印槽能容納2 個凝膠支架轉印夾，用于在Mini-PROTEAN 3 電泳槽內電轉印兩種小凝膠（Mini-PROTEAN 3 凝膠和ReadyGel 預制膠）。伯樂b
全自動轉印儀Blotstainer在蛋白免疫印跡上的應用
由于蛋白免疫印跡的步驟操作較為繁瑣，要求精度較高，實驗中一步出現操作失誤就會導致整個實驗的白白浪費。并且一抗二抗試劑也比較寶貴，所以采用儀器操作可以降低實驗的風險，保證實驗的順利進行。 鼎昊源推出的全自動轉印儀就是替代人工操作的好選擇，它配有自動移液系統，溫控系統和孵育搖床。自動移液系統包括10個管
轉膜時大分子量和小分子量蛋白，該如何選擇膜孔徑
對所有的蛋白，我們推薦用 Nitrocellulose Sandwiches #12369（0.2 μm）的雜交膜去轉膜，尤其是分子量低于 30 KD 的蛋白，建議使用較高濃度（12-15%）的蛋白分離膠并縮短轉膜的時間，建議在 1 小時以內。大分子量蛋白（> 150 kDa）推薦使用 tris-a
電泳和Western轉印的常見問題
表1?Common problems for electrophoresis and western bloting問 題可能原因建議解決方法推薦電壓條件下電泳時間過長。電泳緩沖液過稀。配制新鮮緩沖液，使用1X稀釋液。推薦電壓條件下電流過高，熱量過大。電泳緩沖液過稀。配制新鮮緩沖液，使用1X稀釋液。
半干轉印系統操作使用說明
一.簡介美國Bio-Rad公司的Trans-Blot SD型半干轉印系統是在電場的作用下把聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠上的蛋白或核酸條帶轉移到硝酸纖維素膜上，其運用了電泳檢測的方法，使得蛋白或核酸從凝膠中進行分離轉移到硝酸纖維素膜上，由于硝酸纖維素膜的可支撐性，使得蛋白或核酸條帶能夠在電泳后繼續做
免疫印跡與免疫檢測實驗——轉移槽轉印蛋白質
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒轉移緩沖液儀器、耗材搖床海綿纖維素膜尼龍膜電轉儀實驗步驟1. ?制備抗原樣品，并用小型或標準尺寸的單向或雙向凝膠分離蛋白，在一個或多個泳道中分離預染色或生物素酰化的蛋白質分子量標準。2. ?電泳完成后，拆卸凝膠夾層，去除積層膠。以適量的轉移緩沖液室溫平衡凝膠30 min。3