蛋白質免疫印跡（WesternBlot）（三）
四、SDS－PAGE電泳 1. 清洗玻璃板 一只手扣緊玻璃板，另一只手蘸點洗衣粉輕輕擦洗。兩面都擦洗過后用自來水沖，再用蒸餾水沖洗干凈后立在筐里晾干。 2. 灌膠與上樣 （1）玻璃板對齊后放入夾中卡緊。然后垂直卡在架子上準備灌膠。（操作時要使兩玻璃對齊，以免漏膠。） （2）按前面方法配10%分離膠，加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。灌膠時，可用10 ml槍吸取5 ml膠沿玻璃放出，待膠面升到綠帶中間線高度時即可。然后膠上加一層水，液封后的膠凝的更快。（灌膠時開始可快一些，膠面快到所需高度時要放慢速度。操作時膠一定要沿玻璃板流下，這樣膠中才不會有氣泡。加水液封時要很慢，否則膠會被沖變型。） （3）當水和膠之間有一條折射線時，說明膠已凝了。再等3 min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。 （4）按前面方法配4%的濃縮膠,加......閱讀全文
蛋白質免疫印跡實驗
蛋白質免疫印跡實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 操作流程 (1)制備與凝膠大小一致的硝酸纖維素膜一張，吸水濾紙 2 張
蛋白質免疫印跡實驗
實驗步驟 操作流程(1)制備與凝膠大小一致的硝酸纖維素膜一張，吸水濾紙 2 張 (Whatman 3 MM)。(2) 將凝膠在轉印緩沖液中浸泡 30m in，將轉移膜、濾紙和海綿墊也在同樣的緩沖液浸濕。(3) 安裝轉印「夾心三明治」。將凝膠放置在玻璃平板上，然后將一張浸濕的濾紙放在凝膠上，如
蛋白質免疫印跡實驗
這是一個建立在 B urnette 實驗方案基礎上的實驗流程，小于 80k D a 的蛋白質的轉移效果很好并且結果穩定, 重復性好。應用這種膜轉移方法，我們利用多克隆抗體在下面的樣本中檢測目的蛋白：哺乳動物細胞和細菌溶解產物、細胞培養上清、組織提取物以及組織液。雖然下列實驗條件是根據我們自己的實驗需
蛋白質免疫印跡技術
實驗概要免疫印跡是利用聚丙烯酰胺凝膠電泳來檢測樣品或提取物中某種特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝膠緊貼著膜放置，在電流的作用下蛋白質從凝膠遷移到膜上并且被固定，常用的膜是硝酸纖維素或 PVDF（聚偏乙烯氟化物）。膜是凝膠蛋白質的復制品，然后可以與抗體結合后進行染色。實驗步驟1.?? 樣品準備1)?? 抽
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）——Western印跡法
實驗材料蛋白質樣品試劑、試劑盒裂解液PBSG 250考馬斯亮藍溶液NaClSDS上樣緩沖液電泳緩沖液轉移緩沖液麗春紅染液封閉液TBSTTBS洗脫抗體緩沖液顯影液定影液抗體化學發光試劑儀器、耗材高壓鍋玻璃勻漿器高速離心機分光光度儀-20℃低溫冰箱垂直板電泳轉移裝置恒溫水浴搖床多用脫色搖床實驗步驟一、操
蛋白質免疫印跡（Western－Blot－）（二）
二、蛋白樣品制備?1. ? 單層貼壁細胞總蛋白的提取?（1） 倒掉培養液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液（或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）。?（2）?每瓶細胞加3 ml 4℃預冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放輕輕搖動1 min洗滌細胞，然后棄
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）
實驗方法原理 Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Western免疫印跡，是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 與Southern或Northern雜交方法類似，但We
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）
蛋白質免疫印跡（Western Blot ）?? ?可以：（1）從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質；（2）定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況；（3）用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續分析。實驗方法原理：? ? Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白
蛋白質免疫印跡（Western－Blot－）（三）
四、SDS－PAGE電泳?1. ?清洗玻璃板?一只手扣緊玻璃板，另一只手蘸點洗衣粉輕輕擦洗。兩面都擦洗過后用自來水沖，再用蒸餾水沖洗干凈后立在筐里晾干。?2. ?灌膠與上樣?（1）玻璃板對齊后放入夾中卡緊。然后垂直卡在架子上準備灌膠。（操作時要使兩玻璃對齊，以免漏膠。）?（2）按前面方法配10%分離
蛋白質免疫印跡（Western－Blot－）（一）
蛋白質免疫印跡（Western Blot ）可以：（1）從蛋白質混合物中檢出目標蛋白質；（2）定量或定性確定細胞或組織中蛋白質的表達情況；（3）用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續分析。實驗方法底物化學發光ECL法Western印跡法圖解實驗方法原理Western免疫印跡（
蛋白質免疫印跡組織蛋白提取簡介
1）所需器材：制冰機、標記筆、兩套1.5ml EP管（最好高溫高壓處理）、一個大冰盒、一個1.5ml EP管盒、手套、眼科剪（最好高溫高壓處理）、新鮮組織或保存于-80℃冰箱組織、保存于4℃冰箱的PBS（最好高溫高壓處理）、移液槍、吸頭（最好高溫高壓處理）、兩套研磨棒（最好高溫高壓處理）、掌上離
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）——圖解
實驗材料蛋白質樣品試劑、試劑盒裂解液PBSSDS上樣緩沖液電泳緩沖液轉移緩沖液麗春紅染液TBSTTBS洗脫抗體緩沖液抗體儀器、耗材電泳儀移液器脫色搖床顯影儀實驗步驟一、實驗步驟↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓展開
蛋白質免疫印跡實驗組織蛋白提取
組織蛋白提取 1）所需器材：制冰機、標記筆、兩套1.5ml EP管（最好高溫高壓處理）、一個大冰盒、一個1.5ml EP管盒、手套、眼科剪（最好高溫高壓處理）、新鮮組織或保存于-80℃冰箱組織、保存于4℃冰箱的PBS（最好高溫高壓處理）、移液槍、吸頭（最好高溫高壓處理）、兩套研磨棒（最好高溫高
蛋白質免疫印跡懸浮細胞蛋白提取簡介
1）所需器材：制冰機、標記筆、兩套1.5ml EP管（最好高溫高壓處理）、兩個大冰盒、長滿細胞的培養瓶、10ml離心管、手套、移液槍、吸頭（最好高溫高壓處理）、濾紙、保存于4℃冰箱的PBS（最好高溫高壓處理）、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一種蛋白酶抑制劑，劇毒）、離心機、燒杯、4×SD
蛋白質免疫印跡實驗懸浮細胞蛋白提取相關
懸浮細胞蛋白提取 1）所需器材：制冰機、標記筆、兩套1.5ml EP管（最好高溫高壓處理）、兩個大冰盒、長滿細胞的培養瓶、10ml離心管、手套、移液槍、吸頭（最好高溫高壓處理）、濾紙、保存于4℃冰箱的PBS（最好高溫高壓處理）、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一種蛋白酶抑制劑，劇毒）、離
蛋白質免疫印跡實驗貼壁細胞蛋白提取
貼壁細胞蛋白提取（細胞蛋白含量一般約為1x10-9mg/細胞） 1）所需器材：制冰機、細胞刮刀、標記筆、兩套1.5ml EP管（最好高溫高壓處理）、兩個大冰盒、手套、長滿細胞的培養瓶、保存于4℃冰箱的PBS、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一種蛋白酶抑制劑，劇毒）、移液槍、吸頭（最好高溫
蛋白質免疫印跡制備分離膠、積層膠
1）所需器材：制冰機、制膠槽、Teflon梳子、小燒杯、手套、大冰盒、去離子水、30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-cl（PH值8.8）、1.0mol/L的Tris-cl（PH值6.8）、10%SDS（十二烷基磺酸鈉）、10%AP（過硫酸銨）、TEMED（四甲基乙二胺）、移液槍、吸
免疫印跡與免疫檢測實驗——轉移槽轉印蛋白質
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒轉移緩沖液儀器、耗材搖床海綿纖維素膜尼龍膜電轉儀實驗步驟1. ?制備抗原樣品，并用小型或標準尺寸的單向或雙向凝膠分離蛋白，在一個或多個泳道中分離預染色或生物素酰化的蛋白質分子量標準。2. ?電泳完成后，拆卸凝膠夾層，去除積層膠。以適量的轉移緩沖液室溫平衡凝膠30 min。3
Western免疫印跡
?Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理????與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝
Western－免疫印跡
實驗概要Western免疫印跡（Western ? Blotting）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western ? Blot采用的是聚丙烯
免疫印跡優點
免疫印跡法是一項分析抗原、抗體的技術。它具有下列優點： 1、 濕的固定化基質膜柔韌, 易于操作； 2 、固定化的生物大分子可均一的與各種免疫探針接近, 不會象凝膠那樣受孔徑阻隔； 3、 免疫印跡分析只需少量試劑； 4、 孵育、洗滌的時間明顯減短； 5、可同時制作多個拷貝, 用于多種分析
免疫印跡法
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
免疫印跡定義
免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質印跡（Western blotting），是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏
應用ScanLater免疫印跡蛋白質梯估計蛋白質的分子量
優點： ·簡單的一套的標準品就可以滿足凝膠可視、膜定位和時間分辨熒光檢測 ? ·蛋白質都已經被生物素標記 ? ·可以檢測待測物的分子量 ? ·無需混勻和加熱 簡介 ScanLater免疫印跡蛋白質梯是ScanLater免疫印跡蛋白質檢測系統必不可少的
應用ScanLater免疫印跡蛋白質梯估計蛋白質的分子量
優點：·簡單的一套的標準品就可以滿足凝膠可視、膜定位和時間分辨熒光檢測 ?·蛋白質都已經被生物素標記 ?·可以檢測待測物的分子量 ?·無需混勻和加熱 簡介ScanLater免疫印跡蛋白質梯是ScanLater免疫印跡蛋白質檢測系統必不可少的一項組成。蛋白質梯最初始是應用于蛋白質分子定量，凝膠電泳的可
蛋白質免疫印跡貼壁細胞蛋白提取的介紹
1）所需器材：制冰機、細胞刮刀、標記筆、兩套1.5ml EP管（最好高溫高壓處理）、兩個大冰盒、手套、長滿細胞的培養瓶、保存于4℃冰箱的PBS、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一種蛋白酶抑制劑，劇毒）、移液槍、吸頭（最好高溫高壓處理）、濾紙、離心機、燒杯、4×SDS凝膠上樣緩沖液、二硫蘇糖
全自動蛋白質免疫印跡系統技術指標
全自動蛋白質免疫印跡系統是一種用于化學、生物學、臨床醫學、軍事醫學與特種醫學領域的分析儀器，于2013年4月21日啟用。 技術指標 1、無需繁瑣、混亂的制膠、跑膠過程，減少操作程序，避免污染 2、無需轉膜，減少實驗步驟，避免樣品損失，提高結果的準確率和重復率 3、系統自動加樣 4、根據
蛋白質免疫印跡實驗制備分離膠、積層膠
制備分離膠、積層膠 1）所需器材：制冰機、制膠槽、Teflon梳子、小燒杯、手套、大冰盒、去離子水、30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-cl（PH值8.8）、1.0mol/L的Tris-cl（PH值6.8）、10%SDS（十二烷基磺酸鈉）、10%AP（過硫酸銨）、TEMED（四甲