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問題一：Real time PCR mRNA的相對定量和絕對定量的選擇；測定mRNA, 一般采用相對定量，因為絕對定量，標準品的制備和定量是有難度的，具體可以參考這篇文獻：http://www.biotnt.com/news/news_105.htm；“Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 22DDCT Method” Kenneth J. Livak* and Thomas D. SchmittgenApplied Biosystems, Foster City, California 94404; and ?Department of Pharmaceutical Sciences, College of PharmacyWashington State University, Pullm......閱讀全文
定量PCR可以用于：（1）以外參或內參為標準，通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測，進行PCR起始模板量的定量；（2）用外標法（熒光雜交探針保證特異性）通過監測PCR過程（監測擴增效率）達到精確定量起始模板數的目的，同時以內對照有效排除假陰性結果（擴增效率為零）。實驗方法原理定量PCR（即時聚
實驗方法原理 實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
【導語】當我第一次知道要寫Pittcon 2015 新品綜述的時候，其實我是，是拒絕的……因為新品層出不窮，不是你說寫完就能寫完的……首先我要翻譯、整理，我又不想說寫完之后很假，很廣告，
本文討論的范圍包括RNA酶保護分析，northernblot，原位雜交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不談具體protocol，是因為各種書籍和kit說明書上都有，主要說一些原則，而且大部分是失敗和成功的經驗，還有小組討論結果以及各種書里七零八落看的內容，希望對大家有用。 基因
在論壇上看到不停地有人在問RT-PCR的問題，實際上在以前的帖子中各位香主和eeflying（我為什么總是提他們？因為還是很佩服的哦，生怕自己說錯了，被他們指出來哦）都談到了很多，鄙人也充大頭答了一些問題，但是還是有各種問題，由于的基因表達還有點實戰經驗（但也技止此而），所以想些點東西給大家參考，計
實踐中的問題實時定量PCR已廣泛地運用于分子生物學的各個領域，就目前的應用情況來看，雖然取得了很好的效果，但是其在方法學上的選擇、敏感性問題、重復性問題等都一直是爭論不休的，本文將就這些問題做出探討。1. 方法的選擇：研究者在實驗中往往想要得到目的基因的絕對量，因為絕對定量對目的基因的表達差異有直接
實驗方法原理 定量PCR（即時聚合酶鏈鎖反應，Real-time Polymerase Chain Reaction，簡稱 Real-time PCR、即時PCR），又稱定量即時
【摘要】目的 建立結核分枝桿菌的熒光定量PCR檢測方法,探討熒光 PCR檢測痰標本中結核分枝桿菌的應用價值。方法 根據結核分枝桿菌基因保守序列設計引物和探針，并構建標準品。對102例培養涂陽的結核痰液標本和45例非結核感染者的痰標本，應用熒光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法檢測結核分枝桿菌。 結果 熒
流式細胞儀實驗方法 一、 實驗準備1． 標本制備：2． zui小化非特異性結合： 二、凋亡1．凋亡的檢測方法：和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、細胞因子1．激活的細胞因子2．C
實時熒光定量PCR以其精確、快速、方便，越來越多的應用在科研、臨床及檢驗檢疫的各個領域。但是定量PCR是對精確性要求很高的實驗，不僅要求在實驗前有比較完整的實驗設計方案，而且實驗的條件對實驗結果的影響也非常大。這些都是很多老師與學生非常關心的問題，下面分別從這兩個方面來對定量PCR實驗做一些闡述。&
分析測試百科網訊 國家質檢總局2017年專用儀器設備采購項目中標結果公布。此次中標的產品涉及28個類別，729款相關產品入圍。 質檢總局專用儀器設備采購項目每年集中招標采購一次，由此產生當年的協議供貨商，即入圍產品。在當年有效期內，質檢總局所屬各單位采購儀器必須在協議供貨商范圍內選擇，而且采購
熒光定量PCR實驗指南一、基本步驟：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；2、引物、探針的設計；3、引物探針的合成；4、反應體系的配制；5、反應條件的設定；6、反應體系和條件的優化；7、熒光曲線和數據分析；8、標準品的制備；二、技術關鍵：1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比
1. RNAi 介紹RNA 干擾（RNAi:RNA interference）是由諾貝爾生理學/醫學獎得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在線蟲實驗中發現的，2001 年 Elbashir 等人發現哺乳類的 siRNA 可以進行 RNAi 誘導。這個方法與常規方
熒光定量PCR檢測在中國的應用已經有超過10年的歷史，也是目前分子診斷領域最主要的技術方法。隨著該項檢測的廣泛開展，臨床對于檢測的敏感性、重復性、通量和速度等都提出了更高的要求。作為該方法的重要檢測平臺，熒光定量PCR儀器也在不斷推陳出新。過去的10年中，國內外先后有10多個品牌，推出了幾十種型號的
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【摘要】 目的 對本室利用Taq Man MG技術建立的HSV-2實時定量PCR法進行方法學評價及臨床應用。 方法 收集60名近期有流產史婦女的全血及血清標本，分別用FQPCR和ELISA法同時檢測，并進行比較；另對FQPCR從重復性、靈敏度、線性范圍、特異性幾方面進行方法學評價。結
實驗概要設計PCR引物。實驗步驟1. 引物最好在模板cDNA的保守區內設計。 DNA序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。 2. 引物長度一般在15~30堿
一般來講，進行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高，所以每個樣品至少要做3個平行孔，以防在后面的數據分析中，由于Ct相差較多或者SD太大，無法進行統計分析。通常來講，反應體系的引物終濃度為100-400
實驗步驟一、 樣品RNA的抽提 1. 取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。2. 兩相分離 每1 ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12 000 rpm離心15分
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單
八十年代以來由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染而引起的艾滋病(AIDS)因其嚴重的危害性而受到人們高度重視，力爭早期診斷和尋求有效治療是防止其廣泛傳播的關鍵所在.聚合酶鏈反應(PCR)具有敏感、特異和快速的特點，是檢測病毒、評價病情進展和探討發病機理的有效工具.一、HIV的基因結構 HIV的基因
多少同學能將 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR區分開？有多少同學還在犯暈？今兒這貼，師兄就帶你區分區分，撥開那扇 PCR 迷霧。什么是 RT-PCR？RT-PCR就是逆轉錄 PCR（reverse transcription PCR）或者稱反轉錄PCR(reverse tr
操作步驟熒光定量PCR 實驗步驟:折疊樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層
分析測試百科網訊 2017年10月10日-13日，國內分析測試行業影響力最大的展會——BCEIA2017在北京國家會議中心開幕，展出當今國內外分析測試領域的前沿技術和先進儀器設備。本次展會上，組委會頒布了BCEIA 2017新產品獎，共計22家國產儀器廠商、74個產品。其中獲獎最多的廠商是賽默飛
實驗概要利用RACE(利用PCR技術快速擴增全長mRNA)技術構建全長cDNA文庫是傳統C庫構建技術的改進。本實驗即是利用寡核苷酸帽法，進行全長C庫的構建，從而掌握RACE技術的原理與基本操作方法。實驗原理其原理是利用真核mRNA的3’poly(A)和5’帽子結構作為標簽，用通用引物識別并配對標簽序
轉錄后基因沉默，也稱為RNA干擾，是指雙鏈RNA分子阻斷或者降低同源基因的表達的現象。這種現象可能是作為一種抑制病毒感染和轉座子跳躍的細胞防御機制(Ketting et. al., 1999; Tabara et. al., 1999; Jensenet. al., 1999; Ratc
生物谷： RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存
測序技術的引入促使miRNA研究領域進入快速發展階段，然而qPCR仍是驗證測序數據的重要標準。本文將為您介紹使用qPCR進行miRNA分析的基本要點，希望能幫助新人快速入門。什么是miRNA？miRNA是一類小的非編碼RNA，能夠與RNA誘導沉默復合物（RISC）結合，通過作用于mRNA，進而介導轉
裴瑞青綜述；曾鐵兵，吳移謀審校(南華大學病原生物學研究所，衡陽421001)摘要：梅毒的臨床表現十分復雜，診斷主要依靠實驗室檢測方法。傳統的梅毒實驗室診斷方法暴露出諸多缺點，本文綜述了國外一些分子生物學技術用于梅毒實驗室診斷的方法(以基因工程重組抗原的血清學方法和聚合酶鏈反應)的研究進展。關鍵詞：梅
3 應用由于FQ-PCR具有高靈敏性，高特異性和高精確性的特點，目前，該項技術已被應用于病原體測定、腫瘤基因檢測、免疫分析、基因表達、突變及其多態性的研究等多個領域。3.1 病原體測定由于PCR技術的問世，使得病原體檢測能夠快速而方便的進行。但由于其高靈敏性，實驗操作很容易受到污染而出現假陽性。只要