RTPCR之我見
本文討論的范圍包括RNA酶保護分析，northernblot，原位雜交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不談具體protocol，是因為各種書籍和kit說明書上都有，主要說一些原則，而且大部分是失敗和成功的經驗，還有小組討論結果以及各種書里七零八落看的內容，希望對大家有用。 基因表達的定義：說到基因表達，是指RNA，還是蛋白？是指mRNA還是包括風頭正旺的非編碼RNA？mRNA還有不翻譯的RNA呢。應該說轉錄水平指的是RNA水平，而蛋白應該叫翻譯水平？我們這里就特指編碼蛋白的mRNA的量的檢測吧！ 方法：很多很多，我們常用的也就是RT-PCR和northern。RNA沒保護分析在國外很常用，也有半定量的功能，一次性試劑盒還能以此將一個表達簇一起分析，例如NFkB的轉錄激活譜中的8個常見基因。dot blot的最大貢獻是發展到了反向dot blot的頂峰――曾經無限時髦的基因芯片，而原位雜交的放大效應......閱讀全文
RTPCR之我見
本文討論的范圍包括RNA酶保護分析，northernblot，原位雜交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不談具體protocol，是因為各種書籍和kit說明書上都有，主要說一些原則，而且大部分是失敗和成功的經驗，還有小組討論結果以及各種書里七零八落看的內容，希望對大家有用。?基因表達的定義
基因表達－RTPCR之我見
?本文討論的范圍包括RNA酶保護分析，northernblot，原位雜交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不談具體protocol，是因為各種書籍和kit說明書上都有，主要說一些原則，而且大部分是失敗和成功的經驗，還有小組討論結果以及各種書里七零八落看的內容，希望對大家有用。基因表達的定義
基因表達之RTPCR之我見
在論壇上看到不停地有人在問RT-PCR的問題，實際上在以前的帖子中各位香主和eeflying（我為什么總是提他們？因為還是很佩服的哦，生怕自己說錯了，被他們指出來哦）都談到了很多，鄙人也充大頭答了一些問題，但是還是有各種問題，由于的基因表達還有點實戰經驗（但也技止此而），所以想些點東西給大家參考，計
異型淋巴細胞之我見
? ? 在臨床工作中常見到某些患者的標本，血液分析儀結果顯示單核細胞或淋巴細胞比例升高，但手工推片后發現是不規則形異型淋巴細胞（簡稱異淋）。對于異淋與單核細胞、正常淋巴細胞和幼稚細胞的鑒別有時并不容易。針對這個問題，我們總結了一些小經驗，和大家一起分享。本文著重介紹的是如何鑒別單核型異淋與單
古代瓷器表面元素分析之我見
當下物理檢測在古玩領域有點熱。物理檢測顧名思義就是機器檢測，它脫離了原始的眼學目測，而是用一串數據來比對瓷雜類古玩的新老真偽。但是對于物理檢測，本人也想發表點謬論，弄出點響動，活躍一下年尾的氣氛。第一、坦承的說，我們要用一種敬畏的態度看待物理檢測的科學進步，能把一件古物的表里成分通過復雜的數據分析展
定量RTPCR－（Quantitative－RTPCR）
Application:?Quantitative RT-PCR?is used to quantify mRNA in both relative and absolute terms. It can be applied for the quantification of mRNA expres
實驗室廢水處理之我見
?隨著經濟的發展和科技的進步，當今各大城市的科研單位和高等院校進行的科研實驗越來越深入、廣泛，從實驗室中排放的實驗室廢水相對增多，廢水的水質相當復雜。此類廢水的排放周期不定，排放水量也無規律性，且所含污染物成分較為復雜，除含有洗滌劑及常用溶劑等有機物外，還有較多的酸堿，有毒有害的有機物(三致物、
RDN治療頑固性高血壓之我見
對于經皮去腎臟交感神經術（RDN），很多學者一直給予厚望，正因如此，使得人們對Symplicity HTN-3研究結果頗感意外。對此，我利用長微博談談自己的看法。 1.我們需要新的治療措施 盡管藥物治療是控制高血壓的主要手段，也是有效手段，但不可否認的是，藥物治療并不能解決所有問題。很多患者在
自體高效CIK細胞免疫治療之我見
對于傳統治療腫瘤的手段，放療，化療和放化療相結合來治療腫瘤，其治療效果并不明顯，因此尋找一種新的可以徹底根除腫瘤細胞殘留的方法，亟待解決。在過去的20年里，CIK細胞治療腫瘤成為最具有前景的一種治療手段。它屬于NK的一個II型亞群,表達CD3 和CD56分子.在早期免疫宿主應答中起著重要作用，可
皮內針治療咽部不適之我見
近段時間的以咽癢、咳嗽、聲嘶、咽部異物感等等為主訴的咽部不適病人不少。選擇其中的適宜病人，應用皮內針治療，效果不錯。和大家分享如下。? 一位老師說過，我們當基層醫師的，最主要的本事，就是要在眾多的病人中，選擇出適合自己治療的病人。我很贊同這個說法和做法。所以，就本話題而言，怎么選擇適宜的咽部不適
半定量RTPCR－（SemiQuantitative－RTPCR－）
RT-PCR?AnalysisSolutions10X RT Buffer10X?PCR?Buffer100 mM Tris pH 9.0500 mM KCl1% Triton X-10025 mM MgCl2use at a concentration of 1.5 mMLysis Solutio
Standard－RTPCR
RT-PCR or reverse transcription PCR refers to PCR that uses product of an RT reaction as template. In effect, the PCR amplifies cDNA fragments. In?one
RTPCR步驟
總RNA提取1. 取200mg組織，放到1.5ml EP管中，加入1ml Trizol剪碎。2. 震蕩30s。3. 加0.2ml氯仿，劇烈搖動30s，室溫3min。4. 12000×g，4℃ 離心，15min。5. 吸上層無色水相，移入另一EP管中（約0.5ml）。6. 加等體積異丙醇，-20℃，3
RTPCR－PROTOCOL
RT-PCR PROTOCOL材料與方法…………………………………………………………????1．材料?………………………………………………………1.1?供試用組織(細胞)…………………………………1.2?主要儀器設備………………………………………1.3?主要試劑……………………………………………1.
美國科學院院士：改進科研出版之我見
每個人都力爭做到或成為最好，但較以往更為優秀則意味著要不斷提高。也許原本就該如此。發表文章對于科研同行來說十分緊要，因為在科學界，個人成果的價值評議依賴于科研工作的廣泛認可，最有效的實現途徑就是論文發表。難怪乎在讀者數量大、影響因子高的雜志上發表文章日益成為巨大壓力。這個問題在那些以科研工作者
做一個精明的買家——采購質譜儀之我見
質譜儀的應用越來越普遍。如何選購質譜儀變成一個越來越受到關注的話題。那么，如何才能成為一個精明的買家呢?本文作者結合自身工作經驗從以下三個方面展開討論，希望對大家的工作能夠有所幫助。 一、質譜儀的工作原理與性能特點 質譜儀的分類可以按照其工作原理進行劃分，在選購質譜儀之前首先應該對于質譜儀的
做一個精明的買家——采購質譜儀之我見
質譜儀的應用越來越普遍。如何選購質譜儀變成一個越來越受到關注的話題。那么，如何才能成為一個精明的買家呢?本文作者結合自身工作經驗從以下三個方面展開討論，希望對大家的工作能夠有所幫助。 一、質譜儀的工作原理與性能特點 質譜儀的分類可以按照其工作原理進行劃分，在選購質譜儀之前首先應該對
RTPCR技術簡介和RTPCR引物的選擇
RT-PCR簡介RT-PCR是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用于檢測細胞中基因表達水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cD
什么是RTPCR，RTPCR的定義與檢測方法？
1.定義：是以RNA為模板，聯合逆轉錄反應（reverse transcription，RT）與PCR，可用于檢測單個細胞或少數細胞中少于10個拷貝的RNA模板。?RNA擴增包括兩個步驟： 在單引物的介導下和逆轉錄酶的催化下，合成RNA的互補cDNA；加熱后cDNA與RNA鏈解離，然后與另一引物退火
陳南暉：中西醫區別和未來發展之我見
對于“病”的概念，中醫和西醫的認識大不一樣，已故知名老中醫任應秋先生曾經對“病”的概念作了一個詳細的說明：“西醫所稱的病，大多數是取決于病原體，或者就某種特殊病變的病灶而命名，或者就生理上的某種特殊變化而命名。總之，西醫的病名，必取決于物理診斷和實驗診斷，是比較具體的。中醫的病，或與病因的性質
基于城市二次供水水質污染防治對策之我見
前言? 二次供水是城市供水系統的重要組成部分，其在緩解城市供水壓力不足和水量分配不平衡、解決高層建筑和低水壓區單位居民的用水問題中發揮了非常重要的作用。但是從日常的管理，到輸配設備的維護，二次供水也存在不少隱患。二次供水系統對水質的污染已是水質污染的主要原因。加強對二次供水的治理，保證用戶用到符合
李國祥研究員：中國糧食安全問題之我見
近日，美國科技博客Quartz網站發表題為《中國的農業為何正在衰退?》的文章，該文章認為，在中國成為全球制造業中心的過程中，農田和水資源已遭受嚴重損害，盡管經濟突飛猛進、民眾更富裕，但中國保持糧食增長的能力已大不如前。若這種情況持續下去，一個依賴中國的全球經濟體系將走向災難。 近年來，針對
Protocol－for－competitive－RTPCR
For quantifying mRNA, we use a competitive RT-PCR protocol with internal standard RNAs. These are added in a defined quantity to the RNA sample prior
實時－RTPCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 RNA 模板 DNA 酶緩沖液 DNA 酶 I DEPC 處理的水 oligo(dT) MgCl2 dNT
RTPCR經驗淺談
RT-PCR成敗的關鍵首先在于RNA模板的制備以問者的口氣應該是做RNA病毒基因的RT-PCR本人三年前做過一個正鏈RNA病毒全基因組分段擴增設計方案是將全基因組分成7個片段，0.6kb-3.3kb不等分別進行RT-PCR擴增剛開始的三個月我們課題組三個人辛辛苦苦什么招都想過了結果連一個片段都沒有拿
實時－RTPCR－實驗
本方法使用Superscription反轉錄系統合成cDNA。進行實時PCR時，FAM或JOE熒光基團既可以標記正向引物，也可以標記反向引物。可以用Trizol試劑提取RNA或按第10章描述的方法提取RNA。樣品中的基因組DNA用DNaseI消化掉（參照第10章）。本實驗來源于PCR實驗指南（第二版
RTPCR實驗流程
1、技術原理實時熒光定量PCR是在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時檢測整個PCR進程，zui后通過Ct值與標準曲線的處理對未知樣本進行定量分析，是zui常用的基因表達分析技術。有絕對定量與相對定量兩種定量分析方法。??圖 各種熒光定量曲線示意圖2、服務流程及質控2.1?實驗流程樣本
RTPCR實驗步驟
實驗材料：水稻葉片的 RNA 。實驗原理：目前?PCR?技術只能擴增?DNA?模板，對 RNA 模板不能直接擴增。mRNA反轉錄生成的?cDNA?可作為 PCR 的模板進行擴增，這種在 mRNA 反轉錄后進行的 PCR 擴增稱為?RT-PCR?。 RT-PCR 比 Northern 雜交更靈敏，對
RTPCR實驗步驟
一、組織抽提：1.???????取組織塊50-100㎎用液氮在研缽中研磨成粉末2.???????移入玻璃勻漿器加入1ml Trizol?抽打勻漿3.???????移入1.5ml新離心管用5 ml針頭抽打4.???????冰上孵育5分鐘5.???????離心12,000g??4℃??5分鐘?取上清液移
RTPCR經驗淺談
做RNA病毒基因的RT-PCR成敗的關鍵首先在于RNA模板的制備。本人三年前做過一個正鏈RNA病毒全基因組分段擴增，設計方案是將全基因組分成7個片段，0.6kb-3.3kb不等，分別進行RT-PCR擴增，剛開始的三個月，我們課題組三個人辛辛苦苦，什么招都想過了，結果連一個片段都沒有拿到。后來有一個周