抗血清中去除交叉反應性抗體實驗
試劑、試劑盒 封閉緩沖液封閉液細胞懸浮緩沖液抗體LB 培養基儀器、耗材 Sorval GSA 轉子或相當轉子適用于處理細菌的超聲波破碎儀大腸桿菌 Y1090 hsdR實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存緩沖液和試劑的組分請見時錄 12。將貯存液稀釋到適當的濃度。封閉緩沖液10 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)150 mmol/L NaCl0.05%(V/V)Tween-20封閉液(1%m/V 明膠,3%m/V 牛血清白蛋白,或 5%m/V 脫脂奶粉)這些封閉試劑的優點,不同實驗室備執一詞。我們建議使用者進行預試驗確定哪種封閉液與所選擇的第一抗體和第二抗體匹配最優。封閉液可以貯存于 4°C,重復使用數次。加人終濃度為 0.05%(m/V)的疊氮化鈉用以抑制微生物的生長。細胞懸浮緩沖液50 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)10 mmol/L EDTA(pH8.0)過濾除菌,以 50 ml 等分后貯存于 4°C。抗體制備......閱讀全文
什么是抗血清?
抗血清(antiserum)是一種含有多克隆抗體的血清。通過注射抗血清可以傳遞被動免疫(passive immunity)治療許多疾病。唯一能夠治療埃博拉病毒患者的方法就是通過注射前一個患者的抗血清到體內。
抗血清的制備
一、目的:1、了解抗血清制備的基本過程:2、掌握抗血清的收集和保存方法。二、原理:抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清,一般為動物被人工注射某類抗原后制備的動物血清。高效價的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。一種抗原能否引起抗體生成反應,一方面取決于抗原分子表面有無抗原決定簇(A
抗血清的制備
1、動物的選擇羊、馬、雞、猴、豚鼠,都是常用的免疫動物,在實驗中,選擇動物時應考慮抗原與動物的種屬關系、抗原性質與動物種類、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及動物個體等因素。免疫用動物應選適齡、健壯.最好為雄性。最常用的實驗動物是家兔,一般選擇選擇年齡在6個月以上當年繁殖的♂性,體重2 ~3公斤,
抗血清制備的原理
抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清,一般為動物被人工注射某類抗原后制備的動物血清。高效價的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。一種抗原能否引起抗體生成反應,一方面取決于抗原分子表面有無抗原決定簇(Antigenic determinant),另一方面取決于機體的免疫狀態,當具備以
馬抗血清的定義
中文名稱馬抗血清英文名稱horse antiserum定 義抗原免疫馬所獲得的含特異性抗體的血清。應用學科免疫學(一級學科),免疫病理、臨床免疫(二級學科),感染免疫(三級學科)
抗血清的鑒定方法
1.抗體特異性的鑒定常用雙向免疫擴散法。(1)粗抗原及純抗原之間皆有一條沉淀線,且兩者互相融合,則已產生單價特異性抗體;(2)若純化抗原出現一條,而粗抗原出現多條線,且一條沉淀線與純抗原沉淀線相連接,需去除雜抗。(3)若不出現沉淀線,表示免疫失敗。2.抗體效價的測定顆粒性抗原采用凝集試驗,可溶性抗原
馬抗血清的定義
中文名稱馬抗血清英文名稱horse antiserum定 義抗原免疫馬所獲得的含特異性抗體的血清。應用學科免疫學(一級學科),免疫病理、臨床免疫(二級學科),感染免疫(三級學科)
抗血清的特性鑒定
根據不同目的制備的抗血清,對其中所含抗體的濃度,特異性及免疫球蛋白種類的要求也不一樣。為了獲得質量和數量上合符要求的抗血清,在收集動物血清前必須對免疫效果進行檢測,對收獲后的抗血清也必須對—些參數進行分析,如效價、親和力及交叉反應等。根據不同的抗原性質選用合適的檢測方法。最常用的為免疫沉淀,EL
馬抗血清的定義
中文名稱馬抗血清英文名稱horse antiserum定 義抗原免疫馬所獲得的含特異性抗體的血清。應用學科免疫學(一級學科),免疫病理、臨床免疫(二級學科),感染免疫(三級學科)
抗血清的保存方法
(1)2~8℃保存:用于短期保存(2)冷凍保存:是常用的抗體保存方法將抗體分為小包裝,在-80~-20℃保存,一般可保存5年,效價不會明顯下降,但應避免反復凍融。(3)真空干燥保存:用真空凍干機進行干燥,封裝后可長期保存,醫|學教育網搜集整理一般在冰箱中可保存5~10年。
抗血清的制備(二)
3、免疫途徑,劑量和免疫周期 ?抗原注射途徑可根據不同抗原及試驗要求,選用皮內、皮下、肌肉、靜脈或淋巴結內等不同途徑注入抗原進行免疫。一般常采用背部、足掌、淋巴結周圍、耳后等處皮內或皮下多點注射。初次免疫與第二次免疫的間隔時間多為2~4周。常規免疫方案為抗原加CFA皮下多點注射進行基礎免疫;再以
抗血清的制備(一)
一、目的: ?1、了解抗血清制備的基本過程: ?2、掌握抗血清的收集和保存方法。 ?二、原理: ?抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清,一般為動物被人工注射某類抗原后制備的動物血清。高效價的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療。 ?一種抗原能否引起抗體生成反應,一
抗血清的保存條件
(1)2~8℃保存:用于短期保存(2)冷凍保存:是常用的抗體保存方法將抗體分為小包裝,在-80~-20℃保存,一般可保存5年,效價不會明顯下降,但應避免反復凍融。(3)真空干燥保存:用真空凍干機進行干燥,封裝后可長期保存,一般在冰箱中可保存5~10年。
異源抗血清的定義
中文名稱異源抗血清英文名稱heterologous antiserum定 義來源于異種動物(如馬對人),含特異性抗體的血清。應用學科免疫學(一級學科),免疫病理、臨床免疫(二級學科),感染免疫(三級學科)
異源抗血清的定義
中文名稱異源抗血清英文名稱heterologous antiserum定 義來源于異種動物(如馬對人),含特異性抗體的血清。應用學科免疫學(一級學科),免疫病理、臨床免疫(二級學科),感染免疫(三級學科)
多克隆抗血清的制備
材 料(帶 V 項 目 見 附 錄 1)家兔、大鼠、小鼠或合適品系的倉鼠弗 氏 完 全 佐 劑(CFA; Sigma)含 1?2 mg/m l 純化蛋白抗原的 PBS 溶液:吸取其中 10?20 Mg,在考馬斯亮藍染色的 SDS-聚丙烯酰胺凝膠上分析未見有污染的條帶VPBS弗 氏 不 完 全 佐 劑
抗血清的純化與保存
(1)采血:加強免疫的動物2—3次后,可通過耳靜脈或眼球(小鼠)采血,進行抗血清效價測定。當效價達到理想的高度后,可以采血。采血方式可以從心臟直接取血,也可通過動脈放血。待血液凝固后用針筒或吸管吸取血清。 (2)抗血清的純化與保存:除抗體外血清中含有多種其他蛋白成分。為了避免這些蛋白質干擾抗體
抗血清制備法生化檢驗
抗血清制備法:抗血清指含有抗體的血清。傳統的抗血清制備方法是將某種抗原通過多次注入動物,數十天后或數月后,采集動物血,立即分離出血清。此抗血清在保存或應用前必須作效價和特異性鑒定及純化。(一)免疫動物的選擇免疫動物的選擇基本要求:1.抗原與免疫動物的種屬差異越遠越好。2.動物必須適齡、健壯、無感染、
抗血清有哪些鑒定方法?
1.抗體特異性的鑒定常用雙向免疫擴散法。(1)粗抗原及純抗原之間皆有一條沉淀線,且兩者互相融合,則已產生單價特異性抗體;(2)若純化抗原出現一條,而粗抗原出現多條線,且一條沉淀線與純抗原沉淀線相連接,需去除雜抗;(3)若不出現沉淀線,表示免疫失敗。2.抗體效價的測定?顆粒性抗原采用凝集試驗,可溶性抗
異源抗血清的功能介紹
中文名稱異源抗血清英文名稱heterologous antiserum定 義來源于異種動物(如馬對人),含特異性抗體的血清。應用學科免疫學(一級學科),免疫病理、臨床免疫(二級學科),感染免疫(三級學科)
抗血清的保存有哪些條件?
1.2~8℃保存:用于短期保存; 2.冷凍保存:是常用的抗體保存方法。將抗體分為小包裝,在-80~-20℃保存,一般可保存5年,但應避免反復凍融; 3.真空干燥保存:用真空凍干機進行干燥,封裝后可長期保存,一般在冰箱中可保存5~10年。
抗血清的純化技術生化檢驗
抗血清的純化技術:純化的目的是盡量去除抗血清中與目的抗體不相關的成分,防止與特定抗原反應時起干擾作用。最常見的純化方式是提取特異性IgG或單價特異性抗血清。一、特異性IgG抗血清制備首先用硫酸銨或硫酸鈉鹽析法粗提丙種球蛋白,再進一步純化,常用的方法有:1.離子交換層析法:離子交換劑有DEAE纖維素和
抗血清的制備方法和過程
1、動物的選擇羊、馬、雞、猴、豚鼠,都是常用的免疫動物,在實驗中,選擇動物時應考慮抗原與動物的種屬關系、抗原性質與動物種類、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及動物個體等因素。免疫用動物應選適齡、健壯.最好為雄性。最常用的實驗動物是家兔,一般選擇選擇年齡在6個月以上當年繁殖的♂性,體重2 ~3公斤,
多克隆抗血清的制備1
首要的問題是需要制備多克隆抗體還是單克隆抗體。多克隆抗體的優勢在于可在多種不同生物種系中制備,花費精力較少。另外 ,多克隆抗體特別適用于分析變性蛋白質以及免疫沉淀法和免疫印跡法。作者:J.E.科利跟等,譯者:曹雪濤等,本實驗來自「精編免疫學實驗指南」—使用弗氏佐劑制備多克隆抗體的免疫接種法實驗步驟材
抗血清的鑒定與保存生化檢驗
抗血清的鑒定與保存:一、特異性抗體的鑒定1.抗體特異性鑒定:常采用雙向免疫擴散法。2.抗體的效價的鑒定:常采用雙向免疫擴散法。一是僅稀釋抗血清,與同一濃度抗原反應;另一種是抗血清、抗原同時稀釋作棋盤滴定。3.抗體的純度鑒定:常用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法鑒定醫|學教育網整理。二、抗血清的保存動物血
免疫球蛋白抗血清制備方法
免疫球蛋白抗血清制備方法此法用于制備間接法抗抗體。因抗原為可溶性,故多需加佐劑。(1)淋巴結注射法1)選擇體重2~3Kg的健康雄性家兔( 2只以上),編號;2)在家兔兩后腳掌共注射活卡介苗,50mg(約0.6mL.每只足庶部皮下0.1mL,皮內0.2mL)。7~10d后,鼠或國窩處淋巴結腫大如黃豆或
兔多克隆抗血清的制備實驗
實驗材料 抗原試劑、試劑盒 PBS乙醇儀器、耗材 注射針頭注射器培養箱實驗步驟 1. ?取2 ml 的弗氏完全佐劑加到2 ml 的溶于PBS的純化抗原中,使之乳化。用3 ml 注射器抽取此乳化液,接上22G注射針頭,排出注射器中的氣泡。?2. ?將兔子敢在固定架上,用一只手抓住兔的頸背部毛皮,另一只
抗血清中去除交叉反應性抗體實驗
本方案介紹一種通過抗血清與細菌裂解液共同溫育而從多克隆抗血清中去除與細菌編碼蛋白質發生反應抗體的方法。本節介紹的吸收方法僅僅適用于制備含有低滴度抗大腸桿菌抗體的抗血清。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒封閉緩沖液封閉液細胞懸浮緩沖
去除抗血清中交叉反應的抗體實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 封閉緩沖液 封閉試劑 抗體 LB 頂層瓊脂糖 LB 平板瓊脂培養基 儀器、耗材
抗血清中去除交叉反應性抗體實驗
試劑、試劑盒 封閉緩沖液封閉液細胞懸浮緩沖液抗體LB 培養基儀器、耗材 Sorval GSA 轉子或相當轉子適用于處理細菌的超聲波破碎儀大腸桿菌 Y1090 hsdR實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存緩沖液和試劑的組分請見時錄 12。將貯存液稀釋到適當的濃度。封閉緩沖液10 mmol/L Tris-Cl