反轉錄合成單鏈cDNA實驗
試劑、試劑盒 RNART主體混合液儀器、耗材 薄壁PCR管離心管熱循環儀實驗步驟 一、材料1.核酸和寡核苷酸來自方案2的RNA為每個單獨的H-T11M引物，分別配制RT主體混合液蒸餾水 28.2ul5XRT緩沖液 12.0ul2.5mmol/LdNTP混合液 4.8ulH-T11M(原文為H-T1M。一譯者改）引物（這里M=G、A或C)6.0ul2.專用設備0.5ml離心管0.2ml薄壁PCR管（GenHu......閱讀全文
反轉錄合成單鏈 cDNA 實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 RNA RT主體混合液 儀器、耗材 薄壁PCR管 離心管 熱循環儀
反轉錄合成單鏈 cDNA 實驗
cDNA 合成反應的體積，依賴于所用的錨定-任意引物組合的數目。下面提供的方案，適用于 24 個引物組合和兩個樣品。對于更多的樣品和/或更多的引物組合，調整相應主體混合液的體積。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒RNART主體混合液儀器、耗材薄壁PCR管離心管
反轉錄合成單鏈 cDNA 實驗
試劑、試劑盒 RNART主體混合液儀器、耗材 薄壁PCR管離心管熱循環儀實驗步驟 一、材料1.核酸和寡核苷酸來自方案2的RNA為每個單獨的H-T11M引物，分別配制RT主體混合液蒸餾水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?28.2ul5XRT緩沖液 ? ? ? ? ? ?
體外轉錄合成單鏈RNA探針
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 制備特異性的單鏈 RNA 探針不僅比 DNA 探針更容易，在雜交反應中一般也比具相同比活性的 DNA 探針產生更強的信號，這可能是由于含有 RNA 的雜合鏈固有的更高穩定性的緣故（Casey and Davidson 197
體外轉錄合成單鏈RNA探針
實驗方法原理?制備特異性的單鏈 RNA 探針不僅比 DNA 探針更容易，在雜交反應中一般也比具相同比活性的 DNA 探針產生更強的信號，這可能是由于含有 RNA 的雜合鏈固有的更高穩定性的緣故（Casey and Davidson 1977)。雖然 DNA 探針仍普遍地應用于 Norther
體外轉錄合成單鏈RNA探針:體外轉錄法
體外轉錄法l????????體外轉錄合成單鏈RNA探針1.??????用適當的限制酶消化超螺旋質粒DNA制備5 pmol的線性模板DNA。取一小份消化的DNA（100ng）進行瓊脂糖凝膠電泳分析。如有必要，再補加限制性酶進行溫育，直至不再殘存痕量的未消化DNA。2.??????如必須用產生3’突出端
單鏈 cDNA 的合成實驗
一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑去除 RNA 酶的雙蒸水10XRT-PCR 緩沖液（去除 RNA 酶的雙蒸水，100 mmol/LTris-HCl、pH8.3，500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)2. 酶和酶緩沖液MMLV 逆轉錄酶（100~200U/ul)SUPERaseIN
單鏈 cDNA 的合成實驗
實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑去除 RNA 酶的雙蒸水10XRT-PCR 緩沖液（去除 RNA 酶的雙蒸水，100 mmol/LTris-HCl、pH8.3，500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)2. 酶和酶緩沖液
單鏈 cDNA 的合成實驗
本方案利用的是總RNA，因為如果使用18SrRNA作內對照，在后續實驗中就不能使用帶poly(A)的RNA。并且必須用DNA酶處理RNA，以去除所有污染的基因組DNA。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑去除 RNA 酶的雙蒸水10X
cDNA文庫構建技術-cDNA鏈的反轉合成
實驗概要構建cDNA文庫是一種獲得目標基因并進一步進行基因重組，基因克隆的重要方法，而在該文庫構建中有mRNA 逆轉錄出cDNA是一步極為關鍵的操作。mRNA的逆轉錄主要由MMLV、AMV兩種逆轉錄酶催化合成cDNA，在這個逆轉錄過程中，模板mRAN及逆轉錄酶是兩個最重要的影響因素。對于mR