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    真菌總RNA的制備

    試劑、試劑盒 酚氯仿異戊醇 12mol L 氯化鋰 3mol L 乙酸鈉 乙醇 DEPC 處理的水儀器、耗材 水浴 低溫高速離心機實驗步驟 一 材料與設備1) 酚:氯仿:異戊醇 (25:24:1)。2) 氯仿:異戊醇 (2:1)3)12mol/L 氯化鋰。4)3mol/L 乙酸鈉。5)70% 乙醇。6)DEPC 處理的水7) 水浴。8) 低溫高速離心機。二 操作方法1) 在裝有液氮的研缽中研磨 2?5 g 真菌組織,直至完全變成粉末。2) 把研磨好的粉末轉移到 Falcon 管中,管中裝有提取緩沖液 (每克真菌用 3 mL 提取緩沖液)及等體積酚:氯仿:異戊醇 (預熱到 65℃)3) 振搖試管以徹底混合。4) 把混合物轉移到一個無 RNase 的離心管中,以 13000?18000 g 于 4℃ 離心30 min5) 收集上層水相,加入等體積的氯仿:異戊醇 (24:1),翻轉混勻。6) 以 1300?18000 g 于 4°C ......閱讀全文

    RNA提取和RT-PCR

    真核生物的基因組是DNA,為什么不直接從DNA PCR得到我們需要的基因呢?因為真核生物的基因含有大量的非編碼區,稱為內元(intron),真正編碼蛋白的區段是被這些內元隔開的,這些編碼區叫做外元(exon)。真核生物的DNA轉錄成為RNA之后,經過剪切和拼接,去掉這些非編碼區,才形成成熟

    RNA提取與RT-PCR

     1.RNA的提取  RNA的提取其實原理很簡單:通過變性劑破碎細胞或者組織,然后經過氯仿等有機溶劑抽提RNA,再經過沉淀,洗滌,晾干,zui后溶解。但是由于RNA酶無處不在,隨時可能將RNA降解,所以實驗中有很多地方需要注意,稍有疏忽就會前功盡棄。  1.1分離高質量RNA  成功的cDNA合成來

    RNA提取與RT-PCR(1)

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    PCR儀的用途及使用方法

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    RNAi基因沉默方法

    大約在十年前,2006年諾貝爾生理/醫學獎得主CraigMello和AndrewFire發現,他們能夠將短RNA 分子插入到線蟲中并沉默特定基因的表達。今天,研究人員也常常使用這種強大的RNA 干擾方法來研究哺乳動物系統中的特定基因功能。為了進行這種基因沉默實驗,研究人員通常需要依賴化學合成的RNA

    RNA干擾(RNA interference,RNAi)基礎知識(2)

    1RNA i的發現RNA i是在研究秀麗新小桿線蟲(C. elegans)反義RNA (antisenseRNA )的過程中發現的,由dsRNA 介導的同源RNA 降解過程。1995年,Guo等發現注射正義RNA (senseRNA )和反義RNA 均能有效并特異性地抑制秀麗新小桿線蟲par

    真菌總 RNA 的制備

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    冷泉港實驗室:劃算的基因沉默方法

    大約在十年前,2006年諾貝爾生理/醫學獎得主Craig Mello和Andrew Fire發現,他們能夠將短RNA分子插入到線蟲中并沉默特定基因的表達。今天,研究人員也常常使用這種強大的RNA干擾方法來研究哺乳動物系統中的特定基因功能。 為了進行這種基因沉默實驗,研究人員通常需要依賴化學合成的

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    分子雜交

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    分子雜交技術(一)

    一、概述  前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵(主要是氫鍵)的形成即出現穩定的雙鏈區,這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補,所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序(即某種程度的同源性)就可以形成雜交雙鏈。分子雜交

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    進化遺傳學具有兩個并列的研究方向:系統發育的重建和種群分析。自1962年, Zuckerkandl和Pauling提出蛋白質序列和基因序列的比較可以象分子種一樣用于標志 現存物種分化的時間以來,各種生化方法被用于系統發育的研究。在最初二十年內, 同功酶的電泳分析、免疫學比較和蛋白質序列分析被廣泛地應

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    2019新型冠狀病毒,即“2019-nCoV”,因2019年武漢病毒性肺炎病例而被發現,2020年1月12日被世界衛生組織命名。酒精用于包括2019-nCoV,流感,SARS等病毒性呼吸道傳染性疾病的預防,主要用法是用來洗手/搓手,因為酒精可以通過破壞其生物包膜而快速殺滅它們。那么我們來看看Keyp

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    圖1.  與細胞內蛋白表達相比,無細胞蛋白表達系統能夠顯著地節約時間。 與基于細胞的蛋白表達系統相比較,無細胞蛋白表達系統具有獨特的優勢,包括節約時間、提高具有功能的、可溶的、全長蛋白的總體產量。本文介紹了根據模板類型、期望產率以及下游實驗等因素來選擇無細胞蛋白表達系統的標

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        近年來,隨著生物學技術的發展,農作物種子純度檢驗方法已由外觀形態發展到生理生化水平和分子水平上的鑒別。正是如此,種子檢測要求也越來越嚴格,比如在樣品前期處理環節,需應用種子研磨儀進行樣品制備,一方面可以提高檢測效率,另一方面能進行均相化處理,符合理化分析實驗室的

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    婦科疾病的微生物檢查

          (一)原蟲                   

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    聚合酶鏈式反應(PCR)(一)

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