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實驗原理 瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗） 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統，結合DNA制備膜技術，具有高效、快速、方便的特點，全套操作只需30min便可完成。使用該試劑盒每次可純化得到多至10μg的DNA片段（100bp～30kb），回收率高達50～80%。本試劑盒回收純化的DNA片段純度高，完整性好，可直接用于連接反應、PCR擴增、DNA測序等各種分子生物學實驗。 經膠純化試劑盒回收的DNA片段采用-20℃低溫保存，延緩DNA的降解。 實驗試劑 1. PCR擴增產物 2. Agarose Gel DNA Purification Kit (TaKaRa) 3. 瓊脂糖 4. 1×TAE 5. 6×Lo......閱讀全文
一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合
第八章 聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆第一節 概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟: (1) 變性(Denature):目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈; (2) 退火(Annea
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟: (1) 變性(Denature):目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈; (2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃左右)
PCR需要注意的一些問題擴增長目的片段當擴增大于5kb的目的片段時，可以使用用于超長PCR的酶或酶混合物以獲得zui佳產量）。Taq DNA聚合酶并不能有效擴增較長目的片段（大于5kb），可能是因為其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能糾正dNTP錯誤摻入。錯誤配對的延伸幾
擴增長目的片段當擴增大于5kb的目的片段時，可以使用用于超長PCR的酶或酶混合物以獲得最佳產量（圖24）。Taq DNA聚合酶并不能有效擴增較長目的片段（大于5kb），可能是因為其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能糾正dNTP錯誤摻入。錯誤配對的延伸幾率大大降低，減少了較長產物的產量
實驗原理 PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法，它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs；而體外PCR反應同樣需要類似的成分，有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列，實現對特
具體的實驗步驟cDNA第一條鏈的合成：我們建議進行cDNA合成的對照反應，這樣可以對樣品的 cDNA的合成進行鑒定。加入各種試劑之后，在氣浴中42度保溫一個小時。注意： 在水浴或酒精浴中保溫回減少反應體積，從而降低第一鏈的合成效率。將管放于冰上，以終止第一鏈的合成反應。直接進行第二鏈的合成。cDNA
實驗室PCR 產物的電泳及純化一、目的(1)了解PCR產物電泳與純化的原理。(2)熟悉和掌握PCR產物電泳與純化的操作。二、原理在PCR過程中，部分引物和dNTPs在Taq酶等因子的作用下以DNA模板為指導合成新的DNA分子，當然還有一部分的引物和dNTPs沒有完成所期望的任務,以小分子的形式存在于
PCR反應體系與反應條件-------------------------------------------------------------------------------- 標準的PCR反應體系：10×擴增緩沖液 10ul4種dNTP混合物 各200umol/L引物 各10
PCR擴增產物的克隆可以：（1）獲得目的DNA片段；（2）用于原核表達的研究；（3）廣泛應用于分子生物學相關研究。實驗方法原理平頭連接是將制備好的平頭載體和補平或削平的PCR產物直接進行連接。載體可用EcoR V或Sma I切成平頭；PCR產物純化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用
引物設計 細心地進行引物設計是PCR中zui重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火。設計糟糕的引物可能會同擴增其他的非目的序列。下面的指導描述了一個可以增加特異性的引物所具有的令人滿意的特點： 1.典型的引物18到24個核苷長。引物需要足
增加PCR特異性（一）引物設計細心地進行引物設計是PCR中最重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火。設計糟糕的引物可能會同擴增其他的非目的序列。下面的指導描述了一個可以增加特異性的引物所具有的令人滿意的特點：1.典型的引物18到24個核苷長。引物需要足夠長，保證序列獨特性
畜禽養殖場作為動物疫病傳播的源頭，在疫病發生時及時進行病原診斷，采取相應的應對措施，是目前動物疫病防控的關鍵環節。 目前國內動物疫病的病原學診斷試劑選擇范圍有限。而在通用的血清學檢測試劑中，絕大多數是檢測血清中抗體的免疫試劑，其結果更多反應了疫苗免疫效果，對病原感染只能間接分析，無法確診，
聚合酶鏈反應一單鏈構象多態性分析 (PCR-SSCP) 聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products
聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP）是近年來發展起來的一種基因分析方法。 PCR-SSCP分析的基本程序為：
聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP）是近年來發展起來的一種基因分析方法。
PCR技術對基因從定性到定量的測定是分子生物學方法研究一大飛躍，定量PCR已成為目前分子生物學技術研究的熱點之一. 迄今研究和應用的定量PCR方法有4種，即PCR產物的直接定量；極限稀釋法；靶基因與參照基因的同步擴增；競爭性PCR法. 以上方法各有利弊，選擇某一方法取決于靶基因的特性，對
引言 PCR技術對基因從定性到定量的測定是分子生物學方法研究一大飛躍，定量PCR已成為目前分子生物學技術研究的熱點之一. 迄今研究和應用的定量PCR方法有4種，即PCR產物的直接定量；極限稀釋法；靶基因與參照基因的同步擴增；競爭性PCR法. 以上方法各有利弊，選擇某一方法取決于靶基因的特性，對準確度
熒光定量PCR實驗指南一、基本步驟：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；2、引物、探針的設計；3、引物探針的合成；4、反應體系的配制；5、反應條件的設定；6、反應體系和條件的優化；7、熒光曲線和數據分析；8、標準品的制備；二、技術關鍵：1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比
PCR 反應結束后，從擴增 DNA 產物中去除擴增反應殘余下來的寡核苷酸引物，引物二聚體及 dNTP 是非常必要的。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理PCR 反應結束后，從擴增 DNA 產物中去除擴增反應殘余下來的寡核苷酸引物，引物二聚體及 dNTP 是非常必要的。首先，D
通過PCR擴增在擴增DNA產物末端引入限制性核酸內切酶酶切位點實驗方法原理 實驗材料 噬菌體 T4 DNA 連接酶限制性內切核酸酶靶 DNA試劑、試劑盒 氯仿EDTA乙醇酚氯仿乙酸鈉TE儀器、耗材 瓊脂糖凝膠水浴箱實驗步驟 一、材料1. 緩沖液與溶液氯仿EDTA ( 0
試劑、試劑盒 擴增緩沖液 熱穩定 DNA 聚合酶 瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠 寡核苷酸引物 模板 D
3 PCR產物的檢測與定量技術 1）凝膠檢測系統 用凝膠掃描儀或計算機輔助視頻設備對溴化乙錠染色的瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠進行定量，放射性標記的擴增產物可通過放射自顯影定量測定，最近用自動DNA 測序儀檢測熒光標記的核酸，這種方法可準確測量擴增產物的大小，而且其檢測靈敏度達fg水平，
聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究 的目的基因或某一DNA片段于數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一
PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引
試劑、試劑盒 擴增緩沖液熱穩定 DNA 聚合酶瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠寡核苷酸引物模板 DNA儀器、耗材 帶屏障裝置的自動移液器吸頭微型離心管酶可調式移液器可按所需擴增條件設定程序的熱循環儀實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液，緩沖液的成分及所需試劑請見附錄 1。將貯存液稀釋釋到適當的濃度。10x 擴
此酶具有以下特點： （1）耐高溫，在70℃下反應2小時后其殘留活性在90%以上，在93℃下反應2小時后其殘留活性是仍能保持60%，而在95℃ 下反應2小時后為原來的40%。 （2）在熱變性時不會被鈍化，故不必在擴增反應的每輪循環完成后再加新酶。 （3）一般擴增的PCR產物長度可達2.0
PCR反應的zui大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。一、污染原因1、標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍
實驗方法原理 PCR 反應結束后，從擴增 DNA 產物中去除擴增反應殘余下來的寡核苷酸引物，引物二聚體及 dNTP 是非常必要的。首先，DNA 擴增目的產物內殘余的 dNTP 可以在剩余熱穩定 DNA 聚合酶的作用下填平已被限制性內切核酸酶切割產生的 DNA 產物的黏末端，使后者難