PCR產物常規純化方法
大批量、廉價、用于測序的PCR產物純化方法--PEG沉淀 最近，摸索了一下PEG沉淀PCR產物的方法，貼出來，與大家共享。 目的：探索一種方法，能將PCR產物大批量地、廉價地、純度比較高地純化出來，并且最好能去掉200bp以下的小片段DNA，用于DNA測序。 有文獻和方法說，不同濃度的PEG能沉淀不同長度的DNA，所以，先做了一下不同PEG濃度對DNA沉淀的作用，見下圖，標本是用的50bp DNA Marker，上一行Marker溶解在純水里面的，下一行Marker溶解在模擬的PCR反應體系里面的（除了沒加Taq，其他與常規PCR一致），此目的是驗證一下PCR體系里面的鹽離子對PEG沉淀是否有影響。 總起來，結果還比較滿意，可以看到，PEG濃度越高，能沉淀出來的DNA片段越小，并且，PCR反應體系里面的鹽離子對PEG沉淀影響似乎不大，我測序的標本都在300bp以上，所以，最終選擇的PEG濃......閱讀全文
PCR產物常規純化方法
大批量、廉價、用于測序的PCR產物純化方法--PEG沉淀?最近，摸索了一下PEG沉淀PCR產物的方法，貼出來，與大家共享。?目的：探索一種方法，能將PCR產物大批量地、廉價地、純度比較高地純化出來，并且最好能去掉200bp以下的小片段DNA，用于DNA測序。?有文獻和方法說，不同濃度的PEG能沉淀不
PCR產物純化方法
Purification of PCR Products in Preparation for CloningJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid
常規的－PCR－產物純化的基本過程
常規的 PCR 產物純化的基本過程如下：首先使用瓊脂糖凝膠電泳分離除去反應體系中靶序列的非特異性擴增片段，然后使用蛋白酶 K 滅活耐熱的 DNA 聚合酶，此后使用常規的苯酚/氯仿抽提法除去剩余的 dNTP，離心、乙醇洗脫后干燥，最后使用高效液相色譜或者凝膠電泳分離反應體系中剩余的引物和引物二聚體。通
PCR－產物純化實驗
介紹一個采用 AmiconMicrocon-PCR 濾件（Millipore) 的方法，有效地去除冗余dNTP 和引物的方法純化 PCR 產物。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒TE 或去離子水PCR 產物儀器、耗材離心機和轉子PCR 濾 件微量離心管實驗步驟
PCR－產物純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 TE 或去離子水 PCR 產物 儀器、耗材 離心機和轉子 PCR 濾 件
PCR－產物純化實驗
試劑、試劑盒 TE 或去離子水PCR 產物儀器、耗材 離心機和轉子PCR 濾 件微量離心管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液TE(lOmmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH7.5) 或去離子水2. 核酸和寡核苷酸待測序的 PCR 產物3. 離心機和轉子帶有固定傾角轉子的小型
簡述PCR－產物純化
PCR 反應完成目標 DNA 的擴增后，PCR 產物可以用于進一步的研究，例如用于 DNA 測序、克隆、分析基因的功能和表達等。然而，通過 PCR 反應后體系中仍然存在具有活性的 DNA 聚合酶，剩余的 dNTP、引物以及反應緩沖體系中的各種金屬離子等。因此，我們必須通過一定的方法從反應體系中提純
PCR產物的直接純化
實驗概要本實驗介紹了PCR產物直接純化的原理及操作步驟。實驗原理PCR產物一般都含有過量的引物、Taq ? DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程，因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多，商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中
PCR產物的回收純化
PCR產物的回收純化的目的是：高質量DNA；除去蛋白（如酶等），RNA，無機鹽（NaCl超過150 mM對T4連接酶有抑制作用），小于100 bp的短片段（如引物DNA），有機小分子（如dNTP、Agrose、EB、甘油、礦物油）。
PCR產物的直接純化原理、材料與方法
一．原理PCR產物一般都含有過量的引物、Taq?DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程，因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多，商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中，Buffer PCR-A促使大于100bp的DNA片斷選擇
PCR產物的直接純化原理、材料與方法
一．原理PCR產物一般都含有過量的引物、Taq DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程，因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多，商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中，Buffer PCR-A促使大于100bp的DNA
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗原理 瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗） 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統，結合DN
制備克隆用PCR產物的純化
PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后，DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶（Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的 DNA 聚合酶連同一些殘余的 dNTP 的持續存在，常常妨礙有待進一步克隆
制備克隆用PCR產物的純化
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后，DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶（Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的
制備克隆用PCR產物的純化
實驗方法原理 PCR 產物經酚:氯仿抽提、乙醇沉淀及其他一些常用方法純化后，DNA 樣品內還往往殘留了一些具有酶活性的 Taq DNA 酶與另外一些熱穩定 DNA 聚合酶（Cioweetal. 1991; Bamesl992)。這些殘余的 DNA 聚合酶連同一些殘余的 dNTP 的持續存
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗原理 瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗） 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統，結合DN
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗）本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統，結合DNA制
直接從PCR產物回收純化DNA
1)直接加90-100μl純化緩沖液于1.5ml離心管，再加入30～300μl PCR反應物，Vortex混合；2)加入1ml樹脂輕輕Vortex 3次，每次間隔1分鐘；3)將取出拉桿的注射器筒（3ml）裝在純化柱上，加入上述DNA與樹脂混合液，然后裝上拉桿，慢慢將混合液推進純化柱內；4)卸下注射器
PCR擴增產物鑒定與純化
實驗概要通過瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產物，并對獲得的產物進行割膠純化回收，為接下來的DNA重組和轉化實驗提供外源DNA片段。實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗） 本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purifi
以硅膜為基礎純化－PCR－產物實驗方法
試劑、試劑盒 乙醇PCR 樣品儀器、耗材 真空裝置真空泵真空廢物收集裝置真空管PCR 純化系統實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑乙醇，80%(75 ml/板；使用前配制）2. 核酸和寡核苷酸在 96 孔板中的 PCR 樣品（每樣品 20?lOOul)3. 特殊設備Vac-man96 真空裝置
以硅膜為基礎純化－PCR－產物實驗方法
Wizard SV96 PCR 純化系統提供了一個以膜為基礎，用于從 96 孔板中進行高產率 PCR純化的方法。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒乙醇PCR 樣品儀器、耗材真空裝置真空泵真空廢物收集裝置真空管PCR 純化系統實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和
以硅膜為基礎純化－PCR－產物實驗方法
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙醇 PCR 樣品 儀器、耗材 真空裝置 真空泵 真空廢物收集裝置
PCR產物是否需要用凝膠純化？
如凝膠分析擴增產物只有一條帶,不需要用凝膠純化。如可見其他雜帶,可能是積累了大量引物的二聚體。少量的引物二聚體的摩爾數也很高,這會產生高比例的帶有引物二聚體的克隆,而非目的插入片段。為此需在克隆前做凝膠純化。
PCR產物克隆方法
平端連接 通常情況下，PCR產物可直接與平端載體DNA進行連接，但其連接效率效低。因為TaqDNA聚合酶具有非模板依賴性末端轉移酶活性，能在兩6條 DNA鏈的3'末端加上一個多余的堿基，使合成的PCR產物成為3'突出一個堿基的DNA分子。這種DNA分子的連接效率很低。由
pcr產物的純化與回收實驗報告
PCR產物的直接純化： 一、原理 PCR產物一般都含有過量的引物、 Taq DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程,因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多,商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中, Buffer PCR
PCR技術（十）：PCR產物克隆方法
平端連接 通常情況下，PCR產物可直接與平端載體DNA進行連接，但其連接效 率效低。因為TaqDNA聚合酶具有非模板依賴性末端轉移酶活性，能 在兩6條DNA鏈的3'末端加上一個多余的堿基，使合成的PCR產物成為 3'突出一個堿基的DNA分子。這種DNA分子的連接效率很低。由于PCR
以磁性顆粒為基礎純化－PCR－產物實驗
試劑、試劑盒 乙醇PCR 樣品儀器、耗材 自動定位器吸頭液體處理自動機械分離裝置平板密封條PCR 純化系統實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑乙醇，80%2. 核酸和寡核苷酸在 96 孔板中的 PCR 樣品（不多于100ul/孔）3. 特殊設備3 臺單位置的實驗用自動定位器（BeckmanCo
以磁性顆粒為基礎純化－PCR－產物實驗
MagneSil 是一種順磁性硅質顆粒，能夠充當可移動的固相物質而用于捕獲雙鏈 DNA 片段。通過洗滌黏附于硅質顆粒上的靶復合物來去除殘留污染，從而純化的目的 DNA。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒乙醇PCR 樣品儀器、耗材自動定位器吸頭液體處理自動機械分
以磁性顆粒為基礎純化－PCR－產物實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙醇 PCR 樣品 儀器、耗材 自動定位器 吸頭 液體處理自動機械
DNA測序醋酸鈉/乙醇法純化PCR產物
1. 將混合物離心，將擴增產物轉移到1.5 ml EP管中。 2. 加入25 μl醋酸鈉/乙醇混合液，充分振蕩，置冰上10 min以沉淀DNA。12 000 r/min于4℃離心30 min，小心棄上清。 3. 加70%(V/V)的乙醇50 μl洗滌沉淀2次。12 000 r/min于4℃離