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實驗材料 pMQ402試劑、試劑盒 阿拉伯糖苯甲基磺酰氟Ni-NTA 瓊脂糖結合緩沖液清洗緩沖液洗脫緩沖液透析緩沖液儀器、耗材 超聲破碎器冷凍離心機實驗步驟 3. 方法此處列出的方法概括了為定點突變而做的氨基酸位點選擇（見 3.1)、為在細菌細胞中表達而做的 MutH 蛋白突變 （ 見 3.2 ) 和 MutH 變體的鑒定（見 3.3 )。3.1 為定點突變對氨基酸的選擇從生物技術信息國家中心基因組基本局部比對搜索工具（basic local alignment search tool，BLAST) 頁面（ http : //www. ncbi. nlriLnih. gov /BLAST/) [ 24 ] 得到 MutH 蛋白和相關限制性內切核酸酶的序列。更多的序列從 PSI BLAST 服務器 [ 25 ] 得到。使用 PAM250 矩......閱讀全文
位點特異性核酸內切酶的蛋白質工程 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 pMQ402
實驗材料 pMQ402 試劑、試劑盒 阿拉伯糖苯甲基磺酰氟Ni-NTA 瓊脂糖結合緩沖液清洗緩沖液洗脫緩沖液透析緩沖液 儀器、耗材 超聲破碎器冷凍離心機 實驗步驟 3. 方法 此處列出的方法概括了為定點突變而做的氨基酸位點選擇（見 3.1)、為在細菌
實驗材料 pMQ402 試劑、試劑盒 阿拉伯糖苯甲基磺酰氟Ni-NTA 瓊脂糖結合緩沖液清洗緩沖液洗脫緩沖液透析緩沖液 儀器、耗材 超聲破碎器冷凍離心機 實驗步驟 3. 方法 此處列出的方法概括了為定點突變而做的氨基酸位點選擇（見 3.1)、為在細菌細胞中表達而做的 MutH 蛋
一）酶切實驗 本實驗學習用限制性核酸內切酶（Restriction endonuclease）EcoRI 切割λDNA及質粒pBR322DNA，瓊脂糖凝膠電泳后觀察酶切結果。? 【原理】? λDNA 是大腸桿菌的一種溫和噬菌體DNA，雙股線狀，分子大小為48.5 kb。 EcoRI酶可識別DN
實驗概要所謂亞克隆就是對已經獲得的目的DNA片段進行重新克隆，其目的在于對目的DNA進行進一步分析，或者進行重組改造等。亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。主要試劑1．LB液體培養基：胰化蛋白胨（細菌培養用
[實驗目的]通過本實驗學習DNA的限制性內切酶酶切反應的基本原理與實驗技術。[實驗原理]1.限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA 序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴于ATP 的
Single letter code: R = G or A;? Y = C or T;? W = A or T;? M = A or C;? K = G or T;? S = C or G; H = A, C or T; V = A, C or G; B = C, G or T; D = A,
這里的離心作用主要是將管壁上的液體離下來，在吸取時也能盡量完全吸取，也可以不離心進行后續實驗。孵育30min是酶切的條件，在此條件下才能將環狀質粒切開為線性質粒
生物制藥生產中去除DNA的明智選擇——優化Benzonase?核酸內切酶在病毒產品純化中的使用??Benzonase?核酸內切酶——生物制藥生產中去除DNA的明智選擇，其價值已在過去的30多年里予以了證明。使用Benzonase?核酸內切酶的生產遵循GMP (ICH Q7)，從而提供了高質可
在非理想的條件下，內切酶切割與識別位點相似但不完全相同的序列，這一現象稱星號活性。有人提出，這種"星號"活性可能是內切酶的一種普遍特性（1），如果提供給相應反應條件，所有內切酶都會出現非特異性切割。NEB已證實下列酶存在星號活性：Apo I（2）、Ase I（2）、BamH I（3）、BssH II