離子交換層析實驗（一）
一、實驗原理離子交換層析用于蛋白質分離的原理的最簡單解釋是，基于帶相反電荷分子間的相互吸引力。蛋白質表面所帶的電荷取決于其 Pl 和環境 PH。構成離子交換劑的基礎介質通常為多孔珠形式，可以為蛋白質的吸附提供足夠大的表面積。固定于基礎介質上的帶電配基可以帶正電荷也可以帶負電荷。為提高介質的結合容量，可將帶電荷的多聚體取代小分子配基植于介質上。無論電荷配基的分子大小, 我們可以將其分為陽離子交換劑和陰離子交換劑。陽離子交換劑帶負電荷，而陰離子交換劑帶正電荷。大于 Pl 時，蛋白質帶負電荷，可與陰離子交換劑結合; 小于 Pl 時，蛋白質帶正電荷，可與陽離子交換劑結合。前面我們已經討論了這種簡單規則的局限性。離子交換劑本身就相當于酸或堿，而電荷的歧化反應取決于其 pH。強的離子交換劑，本身相當于一種強酸或強堿，在較寬的 PH 范圍內，所帶的電荷不會發生改變 5 但是，弱離子交換劑卻會發生改變。可根據此特性開......閱讀全文
離子交換層析實驗（一）
一、實驗原理離子交換層析用于蛋白質分離的原理的最簡單解釋是，基于帶相反電荷分子間的相互吸引力。蛋白質表面所帶的電荷取決于其 Pl 和環境 PH。構成離子交換劑的基礎介質通常為多孔珠形式，可以為蛋白質的吸附提供足夠大的表面積。固定于基礎介質上的帶電配基可以帶正電荷也可以帶負電荷。為提高介質的結
離子交換層析實驗離子交換層析技術
離子交換層析實驗可應用于：（1）分離純化蛋白質；（2）分離氨基酸；（3）分離核酸、核苷酸及其它帶電荷的生物分子。實驗方法原理離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的
離子交換層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 離子交換緩沖液儀器、耗材 離子交換層析柱梯度混合器電導表實驗步驟 1. ?配制離子交換層析緩沖液，安裝好層析柱，但以離子交換層析緩沖液取代其中的凝膠過濾緩沖液。?2. ?用起始梯度的緩沖液溶解含蛋白質混合物的樣品。3. ?棄去柱床上部的大部分緩沖液，并將樣品加在凝膠的頂
離子交換層析實驗
離子交換層析技術 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離
離子交換層析實驗
基本方案 離子交換層析介質和層析柱的選擇 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑
離子交換層析實驗（四）
六、實例: 復雜蛋白質混合物的分離采用離子交換層析分離復合蛋白質混合物的一個典型例子就是從乳清中分離蛋白質。它可以進行一定程度的工業化放大，但也可作為一個廉價的檢測體系用于離子交換劑的評價。實際上, 我們也已經通過這種蛋白質混合物來比較不同供應商所提供的離子交換劑的吸附能力（Hahnetal.，
離子交換層析實驗（三）
五、離子交換層析柱的操作以下是離子交換層析柱操作的一般性步驟。此外還需要一些專用步驟以確保離子交換劑在使用時保持穩定。這些步驟如下：’(1) 加載鹽溶液；(2) 平衡層析柱；(3) 蛋白質上樣；(4) 洗去未結合物質；(5) 洗脫；(6) 再生；(7) 消毒處理。一般操作條件如表 22.2 所 TK
離子交換層析實驗（二）
三、結合條件根據離子交換平衡的一般性原理，很顯然，應在很低的鹽濃度條件下對蛋白質進行上樣 (圖 22.1)。鹽濃度也必須適當地調節，這具體取決于離子交換劑配體的密度。通常推薦的鹽濃度為 1 〇?100_〇 l/L 的緩沖液，其電導率相應為 1?4mS/cm。來源于細菌培養物的一般性原料或細胞
離子交換層析實驗離子交換層析介質和層析柱的選擇
實驗步驟1. ?離子交換凝膠的選擇依據：（1）根據蛋白質的pH只穩定范圍。蛋白質在等電點pI以上pH穩定時選擇陰離子交換凝膠介質，在pI以下pH的穩定時，則選用陽離子交換凝膠介質。（2）根據特分離蛋白質的分子大小。分子量在10 000~100 000 0 Da 的蛋白，選用如DEAE-Sephace
離子交換柱層析法（層析實驗簡介）概略
一、??? 原理：有些高分子物質含有一些可以分離的基因，例如-SO3H，-COOH等，因此可以和溶液中的離子產生交換反應。如：R-SO3H＋M+ ———— R-S3M＋H+或R-NH3OH＋CL－? —————? R-NH3CL＋OH－這類高分子物質通稱離子交換劑，其中使用最普遍的是離子交換樹脂。由
離子交換柱層析分離核苷酸實驗_離子交換層析法
本實驗以酵母RNA 為材料, 將RNA 用堿水解成單核苷酸,再用離子交換柱層析進行分離, 最后采用紫外吸收法進行鑒定。旨在了解并掌握RNA 堿水解的原理和方法，掌握離子交換柱層析的分離原理和方法，熟練掌握紫外吸收分析方法。實驗方法原理本實驗以酵母RNA 為材料, 將RNA 用堿水解成單核苷酸,再用離
離子交換高效液相層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 Tris·ClNaCl磷酸鈉緩沖液儀器、耗材 交換柱實驗步驟 1. ?在使用IEX柱前，依次以序列溶液洗柱去除柱上吸附的蛋白質：10倍柱床的已脫氣水和10倍柱床的高鹽緩沖液，對聚合體IEX柱，洗柱液在8 ~10，對硅膠類柱，洗柱液pH在7~8。2. ?在室溫平衡IE
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
實驗方法原理 離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8， 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來，達到濃縮的目的。實驗材料 蛋白質溶液儀器、耗材 離子交換樹脂層析柱實驗步驟 1. 準備離子交換樹脂，裝
離子交換層析實驗——基本方案
離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒離子交換緩沖液儀器、耗材離子交換層析柱梯度混合器電導表實驗步驟1.
離子交換高效液相層析實驗
陰離子交換HPLC 陽離子交換HPLC ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8， 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來，達到濃縮的目的。
離子交換層析法濃縮蛋白實驗
實驗方法原理離子交換層析可用于濃縮蛋白質溶液。因為大多數蛋白質的等電點均低于 8， 所以它們可在 pH 值為 8 的弱離子強度溶液中被陰離子交換樹脂吸附。用離子強度大的溶液可簡單的將它們洗脫下來，達到濃縮的目的。實驗材料蛋白質溶液儀器、耗材離子交換樹脂層析柱實驗步驟1. 準備離子交換樹脂，裝配層析柱
離子交換層析
離子交換層析利用含有能與周圍介質進行離子交換的不穩定離子的不溶 性基質來分離分離物質。 1、離子交換基質Adams 和Holnes 有1935 年通過酚、甲醛和磺酸縮 聚成不溶性樹脂，制成了第一個人工合成的離子交換材料。從此以后，人工 合成的離子交換樹脂日見增多（多數是從芳香族化合物合成
離子交換高效液相層析實驗_陰離子交換HPLC
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒Tris·ClNaCl磷酸鈉緩沖液儀器、耗材交換柱實驗步驟1. ?在使用IEX柱前，依次以序列溶液洗柱去除柱上吸附的蛋白質：10倍柱床的已脫氣水和10倍柱床的高鹽緩沖液，對聚合體IEX柱，洗柱液在8 ~10，對硅膠類柱，洗柱液pH在7~8。2. ?在室溫平衡IEX柱，對4
離子交換高效液相層析實驗_陽離子交換HPLC
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒磷酸鈉NaCl儀器、耗材層析柱HPLC進樣器實驗步驟1. ?用10倍柱床的已脫氣的水冼去柱子的貯存溶劑，并以10倍體積的高鹽緩沖液在低pH洗硅膠類或聚合體IEX柱。2. ?如按前述陰離子方案分離，那么應用磷酸鈉和磷酸鈉/NaCl緩沖液分離蛋白標準，采用以下液體進行梯度洗脫：
離子交換層析法
離子交換層析法（ion exchange chromatography，簡稱IEC）是從復雜的混合物中，分離性質相似大分子的方法之一，依據的原理是物質的酸堿性、極性，也就是所帶陰陽離子的不同。電荷不同的物質，對管柱上的離子交換劑有不同的親和力，改變沖洗液的離子強度和pH值，物質就能依次從層析柱中分離
離子交換層析法
離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質作固定相，利用它與流動相中的離子能進行可逆的交換性質來分離離子型化合物的一種方法。⒈ 離子交換劑預處理和裝柱 對于離子交換纖維素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的顆粒，以保證有較好的均勻度，對于已溶脹好的產品則不必經這一步驟。溶脹的交換劑使用前要用稀酸或稀堿處
DEAE纖維素柱層析純化酶蛋白實驗——離子交換層析法
本實驗目的是以柱層析的方法進一步純化蔗糖酶蛋白，利用DEAE 纖維素樹脂作為離子交換劑進行柱層析分級分離。實驗方法原理利用DEAE纖維素樹脂作為離子交換劑進行柱層析分級分離。實驗材料酶蛋白試劑、試劑盒DEAE纖維素NaOHHCLTris-HCl緩沖液NaCl儀器、耗材層析柱收集器磁力攪拌器攪拌子燒杯
離子交換柱層析分離核苷酸實驗
實驗方法原理 本實驗以酵母RNA 為材料, 將RNA 用堿水解成單核苷酸,再用離子交換柱層析進行分離, 最后采用紫外吸收法進行鑒定。同時通過測定各單核苷酸的含量, 可以計算出酵母RNA 的堿基組成。實驗材料 酵母RNA試劑、試劑盒 陰離子交換樹脂聚苯乙烯-二乙烯苯-三甲胺季銨甲酸甲酸鈉KOH蒸餾水過
離子交換柱層析分離核苷酸實驗
離子交換層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本實驗以酵母RNA 為材料, 將RNA 用堿水解成單核苷酸,再用離子交換柱層析進行分離, 最后采用紫外吸收法進行鑒定。同時通過
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換（指與蛋白質末端離子的交換）；固定在樹脂上。通過提高溶液中相反離子濃度或降低蛋白質所帶電荷數等方法可將蛋白質從樹脂上洗脫下來。利用此法，可根據不同蛋白質電荷性質不同而將其分離開來。若已
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
離子交換層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換（指與蛋白質末端離子的交換
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
離子交換層析在純化蛋白質的層析手段中使用最為廣泛。它對蛋白質的分辨率高，操作簡易，重復性好，成本低。按照離子交換原理，蛋白質可從大量緩沖性溶液中被分離，所以此方法尤適于蛋白質粗提物的初始純化。在分離蛋白質時，速度往往是很重要的。 如蛋白酶的初始分離和不穩定蛋白質的純化。離子交換層析提供了很多加速分離
離子交換凝膠柱層析
原理 在植物生理生化的研究中，往往要從一個組分復雜的混合物中，將性質很相近的生物大分子分離，這是研究工作中一個很關鍵的問題，需要一種具有高度分辨力的技術，才能滿足這一要求。離子交換層析就是這樣的技術，能夠分離只有很小差異的物質（例如僅有一個氨基酸不同的兩種蛋白質），是分離生物大分子的一
離子交換層析小知識
離子交換層析利用含有能與周圍介質進行離子交換的不穩定離子的不溶 性基質來分離分離物質。 1、離子交換基質Adams 和Holnes 有1935 年通過酚、甲醛和磺酸縮 聚成不溶性樹脂，制成了第一個人工合成的離子交換材料。從此以后，人工 合成的離子交換樹脂日見增多（多數是從芳香族化合物合成的），