BAC文庫構建方法與技巧
基因組DNA文庫有十分廣泛的用途,如用于分析、分離特定的基因片段,用以基因表達調控、人類及動植物基因組工程的研究。通常情況下,基因組文庫構建的基本流程可以歸為4大步驟:分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。 一、分離基因組DNA(gDNA) 毫無疑問,優質的基因組DNA對于基因組文庫構建是至關重要的。研究者需要查閱文獻,通過經驗來選擇合適的基因組DNA分離方法,在分離過程中保證DNA不被過度剪切或降解,同時也要盡量保證DNA的純度。 二、處理基因組DNA 根據研究目的,研究者需要選擇合適的載體。不同的載體對基因組DNA的長度有不同的要求,研究者必須選擇合適長度的基因組DNA來構建基因組文庫。 構建黏粒基因組DNA文庫,研究者需要將基因組DNA用注射器抽打來隨機剪切DNA;接著用末端修復酶修復DNA,可以提高DNA連接入載體的效率;然......閱讀全文
BAC文庫構建方法與技巧
基因組DNA文庫有十分廣泛的用途,如用于分析、分離特定的基因片段,用以基因表達調控、人類及動植物基因組工程的研究。通常情況下,基因組文庫構建的基本流程可以歸為4大步驟:分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。 一、分離基因組DNA
BAC文庫構建方法與技巧
基因組DNA文庫有十分廣泛的用途,如用于分析、分離特定的基因片段,用以基因表達調控、人類及動植物基因組工程的研究。通常情況下,基因組文庫構建的基本流程可以歸為4大步驟:分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。一、分離基因組DNA(gDNA)
BAC文庫構建方法與技巧
基因組DNA文庫有十分廣泛的用途,如用于分析、分離特定的基因片段,用以基因表達調控、人類及動植物基因組工程的研究。通常情況下,基因組文庫構建的基本流程可以歸為4大步驟:分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。 一、分離基因組DNA
BAC/PAC 文庫的構建
BAC (Bacterial Artificial Chromosome,細菌人工染色體)文庫可用于:(1)全基因組測序;(2)構建物理圖譜、染色體步查;(3)基因篩選;(4)基因圖位克隆。實驗方法原理BAC是一種裝載DNA大片段的克隆載體系統,用于人、動物和植物基因組文庫構建。BAC具有插入片段較
BAC/PAC 文庫的構建
BAC文庫的構建 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 BAC是一種裝載DNA大片段的克隆載體系統,用于人、動物和植物基因組文庫構建。BAC具有插入片段較大(幾千個堿基至350kb)
基因組DNA文庫構建必備實驗技巧
基因組DNA文庫用途十分廣泛,如用于人類及動植物基因組學研究,基因表達調控研究,分析、分離特定的基因片段等。通常情況下,基因組文庫構建的基本流程可以歸為四大步驟:分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。一、分離基因組DNA(gDNA) 毫無
基因組DNA文庫構建必備實驗技巧-2
技術支持資料:材料緩沖液和溶液- 堿裂解液I , 4°C50 mM 葡萄糖25 mM Tris-Cl (pH 8.0)10 mM EDTA (pH 8.0)配制堿裂解液I 約100ml,滅菌,保存在四度。- 堿裂解液II,新鮮配置,室溫保存0.2 N NaOH (從10N的NaOH新鮮制備)1% (
基因組DNA文庫構建必備實驗技巧-1
基因組DNA文庫用途十分廣泛,如用于人類及動植物基因組學研究,基因表達調控研究,分析、分離特定的基因片段等。通常情況下,基因組文庫構建的基本流程可以歸為四大步驟:分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。一、分離基因組DNA(gDNA) 毫無
cDNA文庫構建
cDNA文庫[原理]:cDNA文庫不同于基因組文庫,被克隆DNA是從mRNA反轉錄來源的DNA。CDNA組成特點是其中不含有內含子和其他調控序列。從而做cDNA克隆時應是先從獲得mRNA開始,在此基礎上,通過反轉錄酶作用產生一條與mRNA相互補的DNA鏈,然后除掉mRNA,以第一條DNA鏈為模板復制
cDNA文庫構建
實驗方法原理 cDNA 文庫是指某生物某發育時期所轉錄的全部 mRNA 經反轉錄形成的 cDNA 片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。經典 cDNA 文庫構建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆轉錄引物,或者用隨機引物,給所合成的 cDNA 加上適當的連接接頭,連接到適當的載體中獲得文庫。其基