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    核酸電泳指示劑和染色劑的選擇

    指示劑:核酸電泳常用的指示劑有溴酚蘭和二甲苯青及銀染色.溴酚蘭在堿性液體中 呈紫蘭色,在0.6%、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中,溴酚蘭的遷移率分別與1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的雙鏈線性DNA段大致相同.二甲苯青的水溶液呈蘭色,它在 1%和1.4%瓊脂糖中電泳時,其遷移速率分別與2Kb和1.6Kb的雙鏈線性DNA大致相似。指示劑一般與蔗糖、甘油或聚蔗糖400組成載樣緩沖液.載樣緩沖液的作用有:1、 增加樣 品密度,使其比重增加,以確保DNA均勻沉入加樣孔內。2、 在電泳中形成肉眼可見的指 示帶,可預測核酸電泳的速度和位置。3、 使樣品呈色,使加樣操作更方便。染色劑:核酸電泳后,需經染色后才能顯現出帶型,最常用的是溴化乙錠染色法,其次是銀染色。溴化乙錠(ethidium bromide,EB)是一種熒光染料,EB分子可嵌入核酸雙鏈的堿基對之間,在紫外線激發下,發出紅色熒光.根據情況可在凝膠......閱讀全文

    PCR擴增產物的電泳分析

    凝膠電泳分瓊脂糖電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳兩種。一、瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是一種非常簡便、快速、最常用的分離純化和鑒定核酸的方法。瓊脂糖是從海藻中提取的一種線狀高聚物。根據瓊脂糖的溶解溫度,把瓊脂糖分為一般瓊脂糖和低熔點瓊脂糖。低熔點瓊脂糖熔點為62~65℃,溶解后在 37℃下維持液體狀態約數小

    PCR擴增產物的電泳分析-1

    凝膠電泳分瓊脂糖電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳兩種。一、瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是一種非常簡便、快速、最常用的分離純化和鑒定核酸的方法。瓊脂糖是從海藻中提取的一種線狀高聚物。根據瓊脂糖的溶解溫度,把瓊脂糖分為一般瓊脂糖和低熔點瓊脂糖。低熔點瓊脂糖熔點為62~65℃,溶解后在 37℃下維持液體狀態約

    PCR技術(九):PCR擴增產物的電泳分析

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    DNA瓊脂糖核酸電泳

    核酸電泳是進行核酸研究的重要手段,可以用于:(1)核酸探針;(2)核酸擴增;(3)序列分析等技術。實驗方法原理帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳。核酸電泳是進行核酸研究的重要手段,是核酸探針、核酸擴增和序列分析等技術所不可或缺的組成部分。核酸電泳通常 在瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中進行,濃度不同

    瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA質量

    一.原理帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳。其中,凝膠電泳由于其操作簡便、快速、靈敏等優點,使它成為分離、鑒定和提純核酸的首選標準方法。與蛋白質分子類似,核酸分子也是兩性解離分子。在pH3.5時,堿基上的氨基基團解離,而三個磷酸基團中只有第一個磷酸解離,整個分子帶正電荷,在電場中向負極泳動;在p

    DNA瓊脂糖核酸電泳

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    DNA的瓊脂糖凝膠電泳

    帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳。電泳的種類多,應用非常廣泛,它已成為分子生物學技術中分離生物大分子的重要手段。瓊脂糖凝膠電泳由于其操作簡單、快速、靈敏等優點,已成為分離和鑒定核酸的常用方法。實驗目的:掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理,學習瓊脂糖凝膠電泳的操作。實驗材料:質粒DNA、BAC、植物總DN

    DNA的瓊脂糖凝膠電泳

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    DNA的瓊脂糖凝膠電泳實驗

    實驗方法原理 在pH值為8.0~8.3時,核酸分子堿基幾乎不解離,磷酸全部解離,核酸分子帶負電,在電泳時向正極移動。采用適當濃度的凝膠介質作為電泳支持物,在分子篩的作用下,使分子大小和構象不同的核酸分子泳動率出現較大的差異,從而達到分離核酸片段檢測其大小的目的。核酸分子中嵌入熒光染料(如EB)后,在

    DNA的瓊脂糖凝膠電泳實驗

    電泳法             實驗方法原理 DNA瓊脂糖凝膠電泳的基本原理是利用DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時具有的電荷

    PCR擴增產物的電泳分析-2

    2)染色劑:核酸電泳后,需經染色后才能顯現出帶型,最常用的是溴化乙錠染色法,其次是銀染色。溴化乙錠(ethidium bromide,EB)是一種熒光染料,EB分子可嵌入核酸雙鏈的堿基對之間,在紫外線激發下,發出紅色熒光。根據情況可在凝膠電泳液中加入終濃度為 0.5ug/ml的EB,有時亦可

    DNA的瓊脂糖凝膠電泳實驗

    DNA電泳可用于:(1)分離不同大小的DNA片段;(2)鑒定目的DNA片段;(3)純化和回收DNA片段。實驗方法原理DNA瓊脂糖凝膠電泳的基本原理是利用DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時具有的電荷效應和分子篩效應。電荷效應是指DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電,在電場中向正極移動,且相同數量的雙鏈

    分子生物學實驗診斷技術

    一、酸雜交技術檢驗方法建立的基本要素是特異性和靈敏度,在復雜的物體中,使無法感覺的特定物質進入人類的觀察范圍。核酸雜交檢測技術就是利用核酸堿基嚴格配對的特異性,核酸標記物的靈敏度而建立的檢測核酸結構與功能的方法。該法建立以來已有二十年,目前研究實驗室用得多,臨床實驗室用得較少,除成本高外,關鍵是操作

    DNA膠回收實驗技術總結

    膠回收一. 提高膠回收量的辦法:1) 增加電泳時的上樣量。2) 電泳緩沖液用新鮮配制的。3) 切膠時盡量只切有條帶的膠,減小切膠體積:含目的片斷很少的膠就不要要了,不然影響回收率。4) 把切的兩塊或多塊膠融化后,無論多大的體積都用一個管子,轉移到同一個柱子上。5) 溶膠時所加的溶液可多一點,這樣更有

    核酸的電泳與檢測

    【實驗目的】(1)了解核酸瓊脂糖凝膠電泳的原理,學會其具體的操作程序。(2)對提取的DNA進行檢測,掌握紫外電泳圖譜的觀察分析方法。【實驗原理】瓊脂糖凝膠電泳是一種非常簡便、快速、最常用的分離純化和鑒定核酸的方法。帶電荷的物質在電場中的定向運動稱為電泳,核酸分子是兩性解離分子,在pH8.0時,DNA

    瓊脂糖凝膠電泳注意事項及操作流程

    凝膠電泳操作注意事項: 1. 緩沖系統:在沒有離子存在時,電導率最小,DNA不遷移,或遷移極慢,在高離子強度的緩沖液中,電導很高并產熱,可能導致DNA變性,因此應注意緩沖液的使用是否正確。長時間高壓電泳時,常更新緩沖液或在兩槽間進行緩沖液的循環是可取的。 2. 瓊脂糖:不同廠家、

    生物技術常用實驗操作簡單介紹

    一、總RNA的提取(Trizol法提取)在收集到生物材料之后,最好能即刻進行RNA制備工作。若需暫時儲存,則應以液氮將生物材料急速冷凍后,儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時,將儲存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細胞,不可以先行解凍,以避免RNase的作用。1.  提取組

    電泳的原理、分類和應用

      【概述】帶電顆粒在電場作用下,向著與其電性相反的電極移動,稱為電泳(electrophoresis, EP)。利用帶電粒子在電場中移動速度不同而達到分離的技術稱為電泳技術。  1807年,由俄國莫斯科大學的斐迪南·弗雷德里克·羅伊斯(Ferdinand Frederic Reuss)最早發現。 

    盤狀聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白

    原理盤狀聚丙烯酰胺凝膠,是由丙烯酰胺單體和少量的交聯劑甲叉雙丙烯酰胺,在催化劑的作用下聚合交聯而成的三維網狀結構的凝膠。改變單體的濃度或單體與交聯劑的比例,可以得到不同孔徑的凝膠,將次凝膠灌裝于直立的玻璃管中,再加樣品,進行電泳分離,稱為盤狀聚丙烯酰胺凝膠電泳。一般常采用7.5%的盤狀聚丙烯酰胺凝膠

    Southern 雜交操作步驟及注意事項

    Southern 雜交是分子生物學的經典實驗方法。其基本原理是將待檢測的DNA樣品固定在固相載體上,與標記的核酸探針進行雜交,在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號。通過Southern雜交可以判斷被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。該項技術廣泛被應用在遺傳病

    紫外分析儀工作原理

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    紫外分析儀簡介

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    紫外分析儀分類及使用范圍總結

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    紫外分析儀的分類及應用范圍

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    分子雜交——Southern基因檢測

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    瓊脂糖核酸電泳標準實驗步驟

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