DNA酶解及DNA片段瓊脂糖凝膠電泳
【目的要求】1.掌握限制性核酸內切酶概念、特點及作用原理，DNA酶解技術的應用2.掌握瓊脂糖凝膠電泳分離DNA片段原理及其操作3.熟悉電泳基本原理及其影響因素【教學內容】1．限制性核酸內切酶概念、特點及作用原理，DNA酶解技術的應用2．DNA片段瓊脂糖凝膠電泳3．電泳概念、分類、應用、基本原理及其影響因素，瓊脂糖凝膠制備、加樣、電泳及結果分析【實驗】一．DNA酶解原理：1.限制性核酸內切酶：是一類能識別并水解雙鏈DNA中特定堿基順序的核酸水解酶。一般能識別4-6個堿基對，并在特定位點切割。如：HindⅢ A↓A G C T TEcoRⅠ G↓A A T T CHpuⅡ C↓C G G2.酶單位數：在最適溫度、PH條件下，1小時完全水解1μgλDNA所需的酶量為1個單位。試劑：(1)λDNA（0.38μg/μl）(2)HindⅢ (16u/μl)(3)酶解Buffer(Tris-HCl,NaCl,MgCl2,DTT )(4)反應終......閱讀全文
DNA酶解及DNA片段瓊脂糖凝膠電泳
【目的要求】1.掌握限制性核酸內切酶概念、特點及作用原理，DNA酶解技術的應用2.掌握瓊脂糖凝膠電泳分離DNA片段原理及其操作3.熟悉電泳基本原理及其影響因素【教學內容】1．限制性核酸內切酶概念、特點及作用原理，DNA酶解技術的應用2．DNA片段瓊脂糖凝膠電泳3．電泳概念、分類、應用、基本原理及其影
DNA的酶切與連接——DNA片段連接
實驗方法原理核酸片段可以通過連接酶的作用連接起來而獲得重組分子。實驗材料λDNA EcoT14I：由11條DNA片段組成試劑、試劑盒T4 DNA連接酶及其配套的10×連接緩沖液 0.5×TBE電泳緩沖液 6×Loading Buffer Goldview 瓊脂糖儀器、耗材電泳儀 水浴鍋 移液器 微波
DNA片段的制備方法
常用以下方法獲得DNA片段：①用限制性核酸內切酶將高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超聲波)取得DNA隨機片段；③在已知蛋白質的氨基酸順序情況下，用人工方法合成對應的基因片段；④從mRNA反轉錄產生cDNA。
DNA片段的回收實驗
實驗方法原理 本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法回收的片段可有效的用于重組載體構建。通過15分鐘的純化過程，PCR產物即能被有效地從含引物二聚體、非特異性擴增引物片斷等混合物中分離出來，成為高度無鹽的、不含其他大分子成分的純化片斷。在較寬的分子量范圍內有較高的回收
DNA片段的回收實驗
樹脂回收法 微量柱法 液氮凍融法 常規方法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方法特別適合于PCR片段的回收，具有純度高、操作簡潔等特點，經此方法
DNA片段回收與純化
????質粒、噬菌體等經酶切，電泳；PCR產物經電泳后，常常需要對一些DNA電泳片段進行回收和純化，用于亞克隆、探針標記等。DNA回收和純化常用方法有壓碎法、低融點瓊脂糖法、凍融法等，也有現成的試劑盒供應。一、凍融法1.??紫外燈下仔細切下含待回收DNA的膠條，將切下的膠條（小于0.6g）搗碎，置于
DNA片段的連接技術
一、目的與原理DNA酶切片段的聯接是兩DNA片段相鄰的5‘磷酸和3’羥基間可有連接酶催化形成磷酸二酯鍵，這個連接反應在體外一般都有大腸桿菌DNA連接酶和T4DNA連接酶催化，但是分子生物學試驗中主要采用T4DNA連接酶，因該酶在正常條件下，即能完成連接反應。本實驗擬通過T4DNA連接酶對酶切片斷的連
大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ－Klenow片段實驗——標記DNA的3‘末端
實驗方法原理選用本方法可產生用于放射自顯影的32P末端標記分子量標志物。放射自顯影帶的強度與片段長度無關，標記DNA可穩定數月之久。?實驗材料DNA試劑、試劑盒dNTP儀器、耗材水浴鍋實驗步驟1. ?在20 μl 反應體積中，用可產生5’突出端的限制性內切酶消化0.1~0.4 μg DNA。?2.
大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ－Klenow片段實驗
實驗方法原理 選用本方法可產生用于放射自顯影的32P末端標記分子量標志物。放射自顯影帶的強度與片段長度無關，標記DNA可穩定數月之久。?實驗材料 DNA試劑、試劑盒 dNTP儀器、耗材 水浴鍋實驗步驟 1. ?在20 μl 反應體積中，用可產生5’突出端的限制性內切酶消化0.1~0.4 μg DNA
大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ－Klenow片段實驗
標記DNA的3‘末端 修復突出的3’或5‘末端 隨即寡核苷酸引物介導 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 選用本方法可產生用于放射自顯影的32P末端標記分子量
DNA解折疊的定義
中文名稱解折疊英文名稱unfolding定 義天然的有活性的生物分子因內部的非共價鍵的改變而偏離原有立體結構的過程。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），總論（二級學科）
DNA解旋的概念
中文名稱DNA解旋英文名稱DNA unwinding定 義在一定的物理條件或相關酶類的催化作用下，維系DNA雙鏈結構的氫鍵發生斷裂使DNA雙螺旋結構局部解體的現象。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
DNA解旋的定義
解旋是指DNA分子復制時，在解旋酶的作用下，解開扭成螺旋的兩條長鏈，然后斷開雙螺旋上的堿基對的氫鍵，使DNA分子成為單鏈的過程。
聚合酶鏈式反應（PCR）擴增DNA片段
一、實驗目的1．學習PCR基因擴增的基本原理和操作方法。2．理解PCR基因擴增在分子生物實驗技術中的重要性。3．了解引物設計的一般要求。二、實驗原理多聚酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction, PCR )：原理類似于DNA的變性和復制過程，即在高溫（93-95℃）下，待擴增的
微量柱法純化DNA片段
實驗概要目的DNA片段的回收技術是重組DNA中的關鍵技術，回收是指從電泳介質中純化出目的片斷。目前待回收的片斷主要有酶切片斷和各種PCR片斷；回收的介質主要有瓊脂糖和PAGE；回收的方法主要有樹脂回收、微量柱回收、玻璃奶回收、液氮凍凍融回收及透析袋大量回收等，下面分別介紹樹脂、微量柱及液氮凍凍融回收
DNA片段探針的應用實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 雜交液洗膜液儀器、耗材 注射器超聲儀水浴鍋實驗步驟 1. ?用5~20 ml 雜交液Ⅰ依次浸泡10~20張硝酸纖維素濾膜。濾膜裝入雜交袋中，加入足夠的雜交液，密封后42℃預雜交1 h。?2. ?往帶螺蓋的試管中，加入放射性探針和2 mg 超聲波處理的鯡魚精DNA，煮沸1
DNA片段的亞克隆實驗
基本方案 凝膠塊中DNA連接 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
DNA片段探針的應用實驗
甲酰胺法 水溶液中雜交 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
凍融法回收DNA片段
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 凍融法是指采用反復冷凍與融化時由于細胞中形成了冰晶及剩余液體中鹽濃度的增高可以使細胞破裂。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。? 實驗材料
PCR擴增分離目的DNA片段
一、目的了解多聚合酶鏈反應DNA 擴增技術的基本原理和實驗應用，掌握PCR反應基本技術。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis 發現。這項技術已廣泛地應用于分子生物學各個領域，它不僅可用于基因分離克隆和核酸序列分
凍融法回收DNA片段
凍融法回收DNA片段可用于：（1）獲取純化的DNA片段；（2）回收PCR產物。實驗方法原理凍融法是指采用反復冷凍與融化時由于細胞中形成了冰晶及剩余液體中鹽濃度的增高可以使細胞破裂。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。?實驗材料DNA膠條試劑、試劑盒Tris-HCl飽和酚
DNA片段的亞克隆實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 CIPdNTPDNA聚合酶T4聚合酶DTTATP儀器、耗材 水浴鍋電泳儀培養箱實驗步驟 1. ?在20 μl 反應體積內用合適的酶完全消化DNA。75℃加熱15 min，滅活酶。如若無需進一步的酶促處理，接歩驟6。2. ?如果5’磷酸需要去除，加入2 μl 10×CIP
DNA小片段的純化回收
DNA 電泳小于100bp的片斷通常在電泳時就比較難觀察分辨，需要用分辨率很高的瓊脂糖或者丙烯酰胺凝膠。比如Cambrex的NuSieve 3:1或者GTG，或者是大名鼎鼎的MetaPhor瓊脂糖。所以實際上對于小片斷，可以分為兩種情況：一個是真的要回收電泳中特別小的片斷，這種情況我們前面有提到，比
用大腸桿菌－DNA－聚合酶－I－Klenow－片段及單鏈－DNA－模板進行...
用大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段及單鏈 DNA 模板進行雙脫氧測序實驗試劑、試劑盒 dATP去離子蒸餾水EDTA延伸 終止混合液和示蹤混合液甲酰胺上樣緩沖液Tris-Cl酶和緩沖液大腸桿菌 DNA 聚合酶ⅠKienow 片段核酸和寡聚核苷酸寡核苷酸引物單鏈 DNA 模板放射性化合物
DNA片段的亞克隆實驗——凝膠塊中DNA連接
實驗材料DNA試劑、試劑盒TAE瓊脂糖儀器、耗材電泳儀離心機實驗步驟1. ?重復基本方案中的步驟1~5。?2. ?在高質量的低融點膠中分離久DNA（0.7%，TAE緩沖液），切下體積盡可能小的所需DNA條帶（20~50 μl ）至小離心管中。3. ?在70℃融化低融點膠10 min 以上，每個連接反
細胞化學詞匯DNA解旋
中文名稱：DNA解旋英文名稱：DNA unwinding定 義：在一定的物理條件或相關酶類的催化作用下，維系DNA雙鏈結構的氫鍵發生斷裂使DNA雙螺旋結構局部解體的現象。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
DNA解超螺旋的定義
中文名稱DNA解超螺旋英文名稱DNA untwisting定 義生物體內通常處于負超螺旋狀態的DNA分子在復制或轉錄過程中負超螺旋解除的過程。是在解超螺旋酶，即拓撲異構酶Ⅰ催化下進行的。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
用大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段標記雙鏈DNA的3’端
實驗材料限制性內切核酸酶大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段模板 DNA試劑、試劑盒乙酸銨乙醇dNTP 溶液儀器、耗材Sephadex G-50 離心柱水浴實驗步驟一、材料1. 緩沖液和溶液乙酸銨（10 mol/L )乙醇2. 酶和緩沖液適宜的限制性內切核酸酶大腸桿菌 DNA 聚合酶 I
用大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段標記雙鏈DNA的3’端
實驗材料?限制性內切核酸酶大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段模板 DNA試劑、試劑盒?乙酸銨乙醇dNTP 溶液儀器、耗材?Sephadex G-50 離心柱水浴實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液乙酸銨（10 mol/L )乙醇2. 酶和緩沖液適宜的限制性內切核酸酶大腸桿菌 DNA 聚
用大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段標記雙鏈DNA的3’端
? ? ? ? ? ? 實驗材料 限制性內切核酸酶 大腸桿菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 模板 DNA 試劑、試劑盒