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  • 外源基因在原核細胞中的表達系統

    外源基因在原核細胞中表達是基因工程操作中最初取得成功的途徑。1 原核生物基因表達的特點同所有的生命過程一樣,外源基因在原核細胞中的表達包括兩個主要過程:即 DNA轉錄成mRNA和 mRNA翻譯成蛋白質。與真核細胞相比,原核細胞的表達有以下特點:①原核生物只有一種RNA 聚合酶(真核細胞有三種)識別原核細胞的啟動子,催化所有 RNA的合成。②原核生物的表達是以操縱子為單位的。操縱子是數個相關的結構基因及其調控區的結合,是一個基因表達的協同單位。調控區主要分為三個部分:操縱基因(operator)、啟動子(promotor)及其他有調控功能的部位。③由于原核生物無核膜,所以轉錄與翻譯是偶聯的,也是連續進行的。原核生物染色體 DNA是裸露的環形 DNA,轉錄成 mRNA 后,可直接在胞漿中與核糖體結合翻譯形成蛋白質。在翻譯過程中,mRNA可與一定數目的核糖體結合形成多核糖體(Polyribosome)。兩個核糖體之間有一定長度的間......閱讀全文

    外源DNA的基本特點

    基因有兩個特點,一是能忠實地復制自己,以保持生物的基本特征;二是基因能夠“突變”,突變絕大多數會導致疾病,另外的一小部分是非致病突變。非致病突變給自然選擇帶來了原始材料,使生物可以在自然選擇中被選擇出最適合自然的個體。含特定遺傳信息的核苷酸序列,是遺傳物質的最小功能單位。除某些病毒的基因由核糖核酸(

    外源酶的來源方式

    (一)微生物產生的外源酶 微生物在食品中的生長繁殖給食品的成分和性質帶來廣泛而又深刻的變化,這些變化都是在微生物分泌的各種酶的作用下發生的。有些微生物分泌的各種酶可將食品中蛋白質水解成多肽和氨基酸,并能進一步將氨基酸分解生成氨、酮酸、胺、吲哚和硫化氫等物質,而引起食品的腐敗變質。但是也有些微生物在食

    細胞化學詞匯外源DNA

    中文名稱:外源DNA外文名稱:Exogenous DNA定?????? 義:對于一個細胞來說,內源DNA是其基因組的序列(本身生物就有的DNA),而外源的DNA是通過基因工程導入的其他物種或細胞的DNA,也可以是人工合成的一段DNA。

    原核細胞的基因表達具有什么特點

    由于原核生物大都為單細胞生物,缺乏核膜,因此極易 受外界環境的影響,需要不斷地調控基因的表達,以適應 外界環境的營養條件和克服不利因素,提高生物的應變與 適應能力以完成生長發育與繁殖的過程。這種調控大多以 操縱子為單位進行。

    關于外源DNA的基本介紹

      外源DNA,是通過基因工程技術或病毒感染等途徑引入靶細胞中的DNA序列。  對于一個細胞來說,內源DNA是其基因組的序列(本身生物就有的DNA),而外源的DNA是通過基因工程導入的其他物種或細胞的DNA,也可以是人工合成的一段DNA。

    外源DNA片段未的性質

    1.帶有非互補突出端的片段  用兩種不同的限制酶進行消化可以產生帶有非互補突出端的片段,刀就是最容蜴 克隆的片段。常用的大多數質粒載體均帶有由幾個不同限制酶的識別序列組成的多克隆位點。由于現有的多克隆位點如此多樣,因而幾乎總是能找到一種帶有與外DNA片段未匹配的限制切位點的載體。于是,采用所謂的定向

    λ噬菌體臂與外源基因組DNA片段的連接實驗

    當 λ 噬菌體臂與外源基因組 DNA 片段相連時,必須考慮到兩個參數:噬菌體臂與潛在插入片段的摩爾比,以及在反應混合物中各類 DNA 的濃度。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理當 λ 噬菌體臂與外源基因組 DNA 片段相連時,必須考慮到兩個參數:噬菌體臂與潛在插入片段的摩爾

    λ噬菌體臂與外源基因組DNA片段的連接實驗

    ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 當 λ 噬菌體臂與外源基因組 DNA 片段相連時,必須考慮到兩個參數:噬菌體臂與潛在插入片段的摩爾比,以及在反應混合物中各類 DNA 的濃度。 實驗材料

    λ噬菌體臂與外源基因組DNA片段的連接實驗

    實驗方法原理 當 λ 噬菌體臂與外源基因組 DNA 片段相連時,必須考慮到兩個參數:噬菌體臂與潛在插入片段的摩爾比,以及在反應混合物中各類 DNA 的濃度。實驗材料 噬菌體 T4 DNA 連接酶基因組 DNAλ 噬菌體包裝混合物λ 噬菌體臂 DNA試劑、試劑盒 ATPSM 和 SM+ 明膠儀器、耗材

    動物細胞培養及外源基因導入的原理和方法

    細胞培養是現代生物學研究中應用最為廣泛的技術之一。它的突出優點,一是研究對象是活的細胞,可長時期地監控、檢測甚至定量評估其形態、結構和生命活動等;二是可以人為地嚴格控制研究條件,便于研究各種物理、化學、生物等外界因素對細胞生長、發育和分化等的影響,有利于單因子分析;三是研究的樣本可以達到比較均一性。

    動物細胞培養及外源基因導入的原理和操作步驟

    實驗概要通過本實驗掌握傳代細胞培養的基本方法,了解無菌操作的基本原則。掌握磷酸鈣介導的貼壁細胞的通用轉染方法。了解細胞凋亡的形態特征,掌握細胞凋亡DNA梯度(“DNA Ladder”)電泳檢測法。實驗原理細胞培養是現代生物學研究中應用最為廣泛的技術之一。它的突出優點,一是研究對象是活的細胞,可長時期

    實時熒光定量-PCR技術用于檢測插入的外源基因拷貝數

    自 1994 年,第一例轉基因植物產品 Flavr Savr TM 西紅柿在美國上市,到 2003 年底,世界范圍內轉基因作物已遍布 18 個國家和地區,種植面積達 167.2 萬英畝 (6770 萬公頃 )( Ewen SWB,1999; 北國網 ) 。大量實踐使得植物轉基因技術已有了

    外源化學物質的adme過程

    簡述外源化學物質的adme過程血液凝固可分為三個過程:1)凝血酶原激活物形成;2)凝血酶形成;3)纖維蛋白形成。內源性凝血途徑特點:參與凝血的因子均在血漿中,啟動因子是XII,當血管內膜受損或血液抽出體外后接觸異物表面時被激活,再依次通過因子XI、IX的激活引起因子X激活。外源性凝血途徑特點:由血管

    酵母表達外源蛋白(foreign-protein)(5)

    或者第5步和第6步改為丙酮洗:5.加入200ul冰冷的丙酮,用手指輕彈EP管,洗去管底和管壁殘余的TCA。6.15000g,離心10-20分鐘,倒掉上清,將EP管倒扣在吸水紙上輕輕控幾下,除去殘余在管口的液體。樣品是酵母細胞超聲后離心獲得的上清,用Loading buffer溶解蛋白沉淀,始終不

    什么是外源化學物的毒性

    毒性與劑量、接觸途徑、接觸期限有密切關系。評價外源化學物的毒性,不能僅以急性毒性高低來表示,有一些外源化學物的急性毒性是屬于低毒或微毒,但卻有致癌性,如,NaNO2;有些外源化學物的急性毒性與慢性毒性完全不同,如苯的急性毒性表現為中樞神經系統的抑制,但其慢性毒性卻表現為對造血系統的嚴重抑制。

    外源質粒DNA轉化大腸桿菌

    摘要: 轉化是將外源DNA分子通過物理或化學的方法導入基因工程細菌中的過程,是基因工程等研究領域的基本實驗技術之一. 外源質粒 DNA 轉化 大腸桿菌 1 實驗簡介 轉化是將外源DNA分子通過物理或化學的方法導入基因工程

    酵母表達外源蛋白(foreign-protein)(2)

    如果是用自己配置的培養基,如玉米浸提液、麥芽浸提液、麥麩浸提液等等,可以不用換液,采取添料來維持酵母對培養基的營養需要。用無機鹽進行大規模發酵,更省錢。大規模發酵時,甲醇的流加速度增加不要太快。另外使用純氧并不昂貴,在武漢買個鋼瓶600元左右,一瓶純氧20元。一個批次100h左右估計3-4 瓶氧氣。

    酵母表達外源蛋白(foreign-protein)(1)

    1、 菌株用GS115表達不出蛋白,換KM71H后,大部分克隆能表達。2、溫度: 在28度和室溫下誘導表達,表達水平可能都不低。3、pH手冊上用6.0,pH提高到6.8,不表達的蛋白可能就表達出來。BMMY的pH7.0-7.5比較合適。國內外做的最好的rHSA,最適pH大概 5-6左右。pH3的時候

    酵母表達外源蛋白(foreign-protein)(4)

    15、菌體密度:菌體是在BMMY中培養的,可以不用BMMY做對照,在600nm處測OD值,培養基和PBS光吸收都很低,PBS更方便。麥芽浸提液培養酵母(不換液,補料),生長階段結束后,密度可達到10-12,誘導培養結束后,密度可達到18左右。如果用1體積的BMGY,在生長階段結束后,換液時,加入1/

    酵母表達外源蛋白(foreign-protein)(3)

    12、蛋白降解分泌表達的目標蛋白比胞內蛋白確實容易被降解。可以嘗試以下幾種辦法:1、盡可能降低培養液的pH值減少酶活,酵母生長pH值比較廣,4~7都可以試一下;2、多試幾種蛋白添加劑,充當酶解底物(比如酵母酸);3、摸索最適下罐(搖瓶也一樣),寧可少表達點也別給降解光了。實在沒辦法,只好換菌株或做p

    簡述外源凝集素的功能

      1、有助機體Ca2+、糖輸運、維系共生功能。在機體的Ca2+和糖輸運中起作用。在貝類中,為它們同一些植物共生起維系作用。  2、共扼接合功能。與其他糖蛋白或糖發生共扼接合,就如高等動物中抗體與抗原體系中的相互作用。  3、清除雜物功能。在甲殼動物變態期間,參與清除機體不必要的細胞,組織片段或殘余

    概述外源凝集素的作用

      凝集素中一大類動植物乃至微生物起源的多價非免疫蛋白或糖蛋白,一般被認作為外源凝集素—Lectins。它是Boyd于1963年提出,后被大家認可的。外源凝集素是非免疫起源的熱敏蛋白質或糖蛋白,由于其多價構型及對特定細胞多糖具結合親和力,它們選擇凝集某些細胞(包括脊椎動物血球及一些病原微生物)和沉淀

    動物細胞培養及外源基因導入的原理和操作步驟(二)

    實驗試劑細胞營養液(DMEM液體培養基,10%胎牛血清,雙抗100單位/ml),消化液(0.05%胰酶,0.53mM EDTA·Na),Hank’s液。2. 2×HBS液(280mMNaCl, 10mMKCl, 1.5mMNaHPO4·2H2O, 12mM葡萄糖,50mMHepes,pH7.05,

    研究揭示水稻RNA識別結構域蛋白抑制外源基因沉默的機制

      植物是復雜的生物系統。植物體內基因的表達受到多種水平的調控,如轉錄水平、轉錄后水平、DNA甲基化/去甲基化等,從而對基因表達進行精密高效的調控。  中國科學院遺傳與發育生物學研究所張勁松研究組篩選OsEIN2過表達材料的抑制子,鑒定到一個包含RNA識別結構域(RRM)的蛋白SOE。SOE可以與剪

    動物細胞培養及外源基因導入的原理和操作步驟(一)

    實驗原理細胞培養是現代生物學研究中應用最為廣泛的技術之一。它的突出優點,一是研究對象是活的細胞,可長時期地監控、檢測甚至定量評估其形態、結構和生命活動等;二是可以人為地嚴格控制研究條件,便于研究各種物理、化學、生物等外界因素對細胞生長、發育和分化等的影響,有利于單因子分析;三是研究的樣本可以達到比較

    學者闡述外源注意不同階段神經機制

    近日,華南師范大學腦科學與康復醫學研究院副研究員王本馳應邀在《認知科學趨勢》(Trends in Cognitive Sciences)發表Spotlight短文,介紹了基于顯著干擾的外源性注意的神經加工機制。外源性注意對人類的影響會隨著注意發生時間的變化而變化。從最初的注意捕獲,到后期的返回抑制,

    關于外眼源性眩暈的原因分析

      外眼源性眩暈的原因:  如眼肌麻痹產生復視,注意飛快行車或站立于懸崖等,引起頭暈眼花及眩暈。  引起眩暈的疾病種類很多,大約有上百種病可以引起眩暈,不同的疾病的原因也是不一樣的。按照病變部位的不同,大致可以分為周圍性眩暈和中樞性眩暈兩大類。中樞性眩暈是由腦組織、腦神經疾病引起,比如聽神經瘤、腦血

    關于外源凝集素的基本介紹

      外源凝集素又稱植物性血細胞凝集素,是一類可使紅血球凝集的非免疫來源的多價糖結合蛋白或蛋白質。例如,類凝集素僅存在于豆科作物中,它們對糖結合的專一性較寬。

    關于外源凝集素的組成介紹

      外源凝集素由結合多個糖分子的蛋白質亞基組成,分子量為91000~130000u(道爾頓),為天然的紅細胞抗原.外源凝集素比較耐熱,80℃數小時不能使之失活,但100℃溫度下1h可破壞其活性.外源凝集素對實驗動物有較高的毒性.在小鼠的食物中加入0.5%的黑豆凝集素可引起小鼠生長遲緩.大豆凝集素的毒

    關于外源凝集素的應用介紹

      1)分離和純化含糖高分子;  2)分離和純化細胞;  3)鑒定微生物;  4)選擇突變株細胞;  5)研究細胞表面的結構特征;  6)鑒定糖鏈的結構;  7)探索免疫反應的機理;  8)作為組織化學和細胞化學的試劑;  9)作為腫瘤細胞鑒定試劑和治療劑;  l0)臨床上的其他用途。

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