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（1）DAN斑點雜交①先將膜在水中浸濕，再放到15×SSC中。②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。③用鉛筆在濾膜上標好位置，將DNA點樣于膜上。每個樣品一般點50μl（2～10μg DNA）。④將膜烘干，密封保存備用。（2）RNA斑點雜交：與上法類似，每個樣品至多加10μg總RNA（經酚/氯仿或異硫氰酸胍提取純化）。方法是將RNA溶于5μlDEPC水，加 15μl甲醛/SSC緩沖液（10×SSC中含0.15mol/l 甲醛）使RNA變性。然后取5～8μl點樣于處理好的濾膜上，烘干。培養細胞，標本處理技術可以簡化，不用提取和純化RNA。方法是用含0.5%Nonidet P40的低滲緩沖液對多種動物細胞作簡單處理，離心去掉細胞核和細胞碎片，就得到基本不帶DNA而富含RNA的細胞質提取物，這一粗RNA在高鹽下用甲醛變性，不需加工直接點到硝酸纖維素膜上。本法可以快速檢測大量標本，而只需極少量的細胞（5×104）或......閱讀全文
一、目的本實驗的目的是學會原位雜交的使用方法。了解各種原位雜交的基本原理和優缺點。二、原理原位雜交組化（簡稱原位雜交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）屬于分子雜交的一種，是一種應用標記探針與組織細胞中的待測核酸雜交，再應用標記物相關的
一、目的 本實驗的目的是學會原位雜交的使用方法。了解各種原位雜交的基本原理和優缺點。 二、原理 原位雜交組化（簡稱原位雜交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）屬于分子雜交的一種，是一種應用標記探針與組織細胞中的待測核酸雜交，再應用標記物相關
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
今天黨的十九大召開，習近平大大指出：中國特色社會主義進入新時代，我國社會主要矛盾已經轉化為人民日益增長的美好生活需要和不平衡不充分的發展之間的矛盾。想想都覺得高中政治課本過時了，而考研又多了一道大題。然而這些年，醫療領域進展可不止一點！就讓我們一起看看這些年，分子病理領域的發展！ 其實相對于其
⑦60伏電泳過夜。 ⑧取出凝膠，水中浸泡2次，每次5min。 ⑨室溫下將膠浸到50mmol/L NaOH和10mmol/l NaCl中45min，水解高分子RNA，以增強轉印。 ⑩室溫下將膠浸到0.1mol/L Tris·HCl (Ph7.5)中45min，使膠中和。
為了在同一標本上或同一細胞內同時檢測是否存在兩種或兩種以上的靶核酸序列。可應用雙重或多重原位雜交技術．即以兩種或多種標記探針與靶核酸雜交。然后利用不同的檢測手段分別顯示各種靶核酸的存在和分布。該技術與免疫組織化學技術中的雙重或多重標記相似，除了探針本身的特異性外，對結果的干擾主要來自標記物及檢測試劑
一、核酸分子雜交技術1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質粒和噬菌體DNA的構建成功，核酸自動
原位雜交是在分子生物學領域應用極為廣泛的實驗技術之一，是在研究生物體發育過程中的一種極為重要的分子遺傳學的研究方法。其英文名為in situ hybridization,其中in situ為拉丁文，原義是"in its natural position". 字面的意思理解就是說在
第一節 原位雜交組織化學概述 一、核酸分子雜交技術 1961年Hall開拓了液相核酸雜交技術的研究，其基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現穩定的雙鏈區，形成雜交的雙鏈。自此以后，由于分子生物學技術的迅猛發展，特別是70年代末到80年代初，分子克隆、質
原位雜交技術應用于染色體、細胞和組織切片等樣品中進行核酸特異性檢測，與免疫組化技術的結合應用，能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓撲信息結合起來。1969年Pardue和Gall將放射性標記的探針直接應用于純化核酸的雜交，此后得益于分子克隆技術的發展，及不同探針標記系統和檢測系統
原位雜交技術應用于染色體、細胞和組織切片等樣品中進行核酸特異性檢測，與免疫組化技術的結合應用，能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓撲信息結合起來。1969年Pardue和Gall將放射性標記的探針直接應用于純化核酸的雜交，此后得益于分子克隆技術的發展，及不同探針標記系統和檢測系統
Angerer及其同事們首先應用RNA探針于原位雜交（見Cox et al 1984），核酸探針為單鏈的RNA分子，產生自具有質粒逆轉錄系統的cDNA克隆（圖20-2）。由于它是單鏈的，不像雙鏈的DNA探針，在溶液中不會再退火（reanneal），因此，較大百分比的探針可參與雜交反應，較cDNA探針
一、核酸探針標記 核酸探針分子雜交是指具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強度等）可按堿基互補原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。雜交的雙方是待測核酸及探針。 核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針；根據標記物不同，可分為放射性標記探針和非放射性標記探針兩大
原位雜交技術自創立以來，為基因的定位和表達、基因進化、發育生物學、腫瘤學、微生物學、病理學、醫學遺傳學和遺傳分析等領域研究提供了極其寶貴的資料，發揮了其他技術難以取代的作用。但不論是使用放射性核素探針，還是非放射性探針，大部分研究工作都還限于光鏡水平。為了對檢測的靶核酸進行更精確的亞細胞定位，以及能
FISH熒光原位雜交技術：1969年，Gall和Pardue等首次將同位素探針用于原位雜交實驗，獲得成功。1987年，染色體原位抑制雜交法的創建，使FISH技術得以迅速發展。隨后，Cremer等用生物素和汞或氨基乙酰熒光素等非放射性物質標記探針，創立了雙色FISH熒光原位雜交技術 。1990年，
6、基本實驗過程 用于大分子合成過程研究的放射自顯影技術： 同位素標記示蹤化合物→注入動物體內→ 取下器官或組織→切片→ 涂乳膠膜→自顯影→顯影和定影→染色→觀察 用于大分子定位研究的放射自顯影技術： 組織固定包埋→切片 ↓ 細胞化學反
納米二次離子質譜技術(NanoSIMS)在 微生物生態學研究中的應用氮(N)、碳(C)、硫(S)等生命元素的生物地球化學循環過程主要由微生物所驅動。 耦合分析自然環境中 微生物遺傳多樣性與其代謝多樣性是當今微生物生態學研究的難點和熱點。 自然環境中的微生物多樣性極 為豐富,每噸土壤中的微生物類
FISH熒光原位雜交技術：1969年，Gall和Pardue等首次將同位素探針用于原位雜交實驗，獲得成功。1987年，染色體原位抑制雜交法的創建，使FISH技術得以迅速發展。隨后，Cremer等用生物素和汞或氨基乙酰熒光素等非放射性物質標記探針，創立了雙色FISH熒光原位雜交技術 。1990年，Ne
一.基本原理核酸分子雜交技術是目前分子生生物學、細胞生物學和生物化學研究中應用最廣泛的技術之一，是定性、定量和定位檢測兩條來源不同的聚核苷酸鏈上堿基順序同源性的一種手段。DNA分子是高度有序的雙鍵分子。一條鏈的堿基與另一條鏈的堿基以氫鍵配對相連．形成腺嘌呤與胸腺嘧啶(A．T)，鳥嘌呤與胞嘧啶（G．C
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
實驗概要本文介紹了細胞組分分析方法的原理及操作流程等。實驗原理核酸分子雜交技術是目前分子生生物學、細胞生物學和生物化學研究中應用最廣泛的技術之一，是定性、定量和定位檢測兩條來源不同的聚核苷酸鏈上堿基順序同源性的一種手段。DNA分子是高度有序的雙鍵分子。一條鏈的堿基與另一條鏈的堿基以氫鍵配對相連．形成
一.基本原理 核酸分子雜交技術是目前分子生生物學、細胞生物學和生物化學研究中應用最廣泛的技術之一，是定性、定量和定位檢測兩條來源不同的聚核苷酸鏈上堿基順序同源性的一種手段。DNA分子是高度有序的雙鍵分子。一條鏈的堿基與另一條鏈的堿基以氫鍵配對相連．形成腺嘌呤與胸腺嘧啶(A．T)，鳥嘌呤與胞嘧啶（G
二、生物素標記cRNA探針在原位雜交組織化學中的應用 （一）光敏生物素標記cRNA探針的應用 以線性質粒DNA為模板合成未加標記物的cRNA探針，使其最終濃度為0.5～1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再與等體積的光敏生物素（1μg/μl）混合。在150瓦鹵素燈下，距離光源20c
一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH) 是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛應
是用標記的核酸探針，使用非放射檢測系統或放射自顯影系統，在組織切片、細胞涂片及染色體制片上等對核酸進行定性、定位和相對定量研究的一種分子生物學方法，具有靈敏、特異、直觀等優點。已逐漸成為分子生物學和分子病理學的常見技術之一，廣泛應用于腫瘤生物學、血液病理學、遺傳、微生物學、細胞和分子生物學、神經內分
分子雜交儀 Hybridization Oven根據實驗的需求，可以將分子雜交儀分為5大類。1、是用于大容量的分子雜交儀;2、用于Southern或者Northern技術點雜交的雜交儀;3、用于小容量的核酸雜交儀;4、微孔板原位雜交儀;5、載玻片原位雜交和平板雜交儀;6、Western雜交儀。原位分
熒光原位雜交實驗方法，實驗原理熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性原位雜交技術。目前這項技術已經廣泛應用于動植物基因組結構研究、染色