Southern轉膜方法
Southern轉膜方法（毛細管虹吸印跡法、電轉移法與真空轉移法）將凝膠中的DNA進行堿變性并將pH值恢復至中性后，即可將凝膠中的DNA片段轉移到固相支持物上。用于轉膜的固相支持物有多種，包括硝酸纖維素濾膜(NCM)、尼龍膜、化學活性膜和濾紙等，Southern轉膜時可根據需要選擇不同的固相支持物用于雜交。常用的Southern轉膜方法有以下3種。1．毛細管虹吸印跡法 此法是利用濃鹽酸轉移緩沖液的推動作用，將凝膠中的DNA轉移到固相支持物上，轉移方式見圖。其原理是：容器中的轉移緩沖液含有高濃度的NaCl和檸檬酸鈉，上層吸水紙的虹吸作用使緩沖液通過濾紙橋、濾紙、凝膠、硝酸纖維素濾膜向上運動，同時帶動凝膠中的DNA片段垂直向上運動，凝膠中的DNA片段移出凝膠而滯留在膜上。利用毛細管虹吸作用的轉移法轉移效率不高，尤其對分子量較大的DNA片段更是如此，但由于其器具簡單，不需要特殊裝置，因此一直被廣泛用于Southern印跡的轉膜。2......閱讀全文
Southern轉膜方法
Southern轉膜方法（毛細管虹吸印跡法、電轉移法與真空轉移法）將凝膠中的DNA進行堿變性并將pH值恢復至中性后，即可將凝膠中的DNA片段轉移到固相支持物上。用于轉膜的固相支持物有多種，包括硝酸纖維素濾膜(NCM)、尼龍膜、化學活性膜和濾紙等，Southern轉膜時可根據需要選擇不同的固相支持物用
電泳、轉膜
轉膜是把DNA從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物（一般是尼龍膜）上固定，是進行各種后續研究（如RFLP分析，陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究）的前提。實驗目的：掌握Southern blotting的原理及操作步驟。實驗原理：1. 轉膜的方式： 向上的毛細管轉移 向下的毛細管轉移 同時向
Western－不同轉膜方法的取舍
轉膜:小分子量的蛋白半干轉效果比較好，大分子量（100KD）以上建議濕轉。具體轉膜條件需要多摸一下。30-80KD半干轉恒流1mA/cm2，1-1.5h 都可以，大分子濕轉100V，2.5h以上應該可以，轉完膜麗春紅染出的條帶比較清楚的話，一般都能有結果。濕轉，Buffer一定要預冷，最好提前一天配
Western轉膜步驟
下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。I. 所需材料：?Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）?電泳后的迷你膠
電泳、轉膜概述
轉膜是把DNA 從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物（一般是尼龍膜）上固定，是進行各種后續研究（如 RFLP 分析，陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究）的前提。實驗目的：掌握 Southern blotting 的原理及操作步驟實驗原理：1．轉膜的方式：向上的毛細管轉移向下的毛細管轉移同時向兩張膜
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
western轉膜放置問題
1. 定義轉膜時與膠接觸的一面為“正”2. 封閉時使用封閉液，液體蓋過膜就好，所以無所謂正反3. 假如用暗室顯影法，將顯影的試劑與“正”面接觸，膠片與“正面”接觸4. 假如用熒光的話，理論上“正”面朝下，掃描，但實際操作過程中貌似都可以的
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
wb轉膜條件公式
wb轉膜條件公式：10% SDS溶液(m/v)。將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如NC膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白
小分子轉膜時間
小分子的話就不要過夜轉,采取100V一小時應該就可以了,注意降溫。知識補充蛋白的分子量 是理論的分子量 其實還可能有一些修飾的 比如乙酰化 糖基化等那么要考慮分子量的問題 其次 你買的抗體怎么樣？特異性 效價 親和力等 是否適合做WB？ 再次 你可以用預染的蛋白marker試一試 確定你的目的蛋白沒
轉膜后怎么分清楚膜的正反
轉膜后分清楚膜的正反的方法：定義轉膜時與膠接觸的一面為“正”。封閉時使用封閉液，液體蓋過膜就好，所以無所謂正反，假如用暗室顯影法，將顯影的試劑與“正”面接觸，膠片與“正面”接觸，假如用熒光的話，理論上“正”面朝下，掃描，但實際操作過程中貌似都可以的。濕電轉膜儀：濕電轉膜儀是用來轉印蛋白的儀器。轉移蛋
轉膜后怎么分清楚膜的正反
轉膜后分清楚膜的正反的方法：定義轉膜時與膠接觸的一面為“正”。封閉時使用封閉液，液體蓋過膜就好，所以無所謂正反，假如用暗室顯影法，將顯影的試劑與“正”面接觸，膠片與“正面”接觸，假如用熒光的話，理論上“正”面朝下，掃描，但實際操作過程中貌似都可以的。濕電轉膜儀：濕電轉膜儀是用來轉印蛋白的儀器。轉移蛋
轉膜后怎么分清楚膜的正反
轉膜后分清楚膜的正反的方法：定義轉膜時與膠接觸的一面為“正”。封閉時使用封閉液，液體蓋過膜就好，所以無所謂正反，假如用暗室顯影法，將顯影的試劑與“正”面接觸，膠片與“正面”接觸，假如用熒光的話，理論上“正”面朝下，掃描，但實際操作過程中貌似都可以的。濕電轉膜儀：濕電轉膜儀是用來轉印蛋白的儀器。轉移蛋
Dry－Transfer－干法蛋白轉膜
Trans-Bot SD Assembly1. Prepare the transfer buffer.2. Following electrophoresis, equilibrate the gels in transfer buffer.? Equilibration facilitates
半干轉是否要去膜？
半干轉是否要去膜、濾紙、膠同樣大小，因為膠大小不一定規則，膜和濾紙會大一點，那樣會不會短路？可以相等，但是如果紙、膜比凝膠大就比較容易形成短路了，上下兩層濾紙也不能因過大而相互接觸，這樣會短路，電流不會通過膠和濾紙。轉移前和轉移過程中看看電壓就行，正常的半干轉是慢慢變高的，最后結束時一般是開始的1.
western轉膜時間和電流
300mA90分鐘,我們是1.0的膠厚度,要是0.75也行,但1.5mm的厚膠要時間長一些,另外你做的蛋白如果超過100kd建議時間更長一些,若是小蛋白就減少轉模時間,立春紅確定最適時間
western－blot轉膜的原理
電場力作用條件下，帶電粒子（PAGE膠中的蛋白）會發生定向遷移；蛋白大小如果超過膜孔徑（0.22μm or 0.45μm），不會透過膜；WB用的膜具有蛋白吸附作用；
轉膜時甲醇的作用
轉膜 將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體（例如 NC 膜）上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法毛細管印跡法和電泳印跡法。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理完全相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。前者操作容易，轉移效率高；而后者適用于大膠的蛋白轉移，所
Western－轉膜時用干轉還是濕轉效果比較好？
關鍵看效果怎么細分，干轉，速度快，效率稍低，濕轉，速度比較慢，轉移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量為主，干轉就挺好的，效率非常高，幾分鐘就做完了。分子量特別大，又沒有其他人的方案做參考，可以先試試濕轉。就是幾個小時等得比較痛苦。好幾個人做的話，真是等到花兒也謝了。至于說效果，不是
Western－轉膜時用干轉還是濕轉效果比較好
關鍵看效果怎么細分，干轉，速度快，效率稍低，濕轉，速度比較慢，轉移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量為主，干轉就挺好的，效率非常高，幾分鐘就做完了。分子量特別大，又沒有其他人的方案做參考，可以先試試濕轉。就是幾個小時等得比較痛苦。好幾個人做的話，真是等到花兒也謝了。至于說效果，不是
做western轉膜，用濕轉電泳，還是半干轉電泳好
半干轉要用專門的半干轉膜儀，而濕轉用電泳儀配附件即可；半干轉所需時間較短，但控制不好，中間發熱比較大容易把膜和膠烘壞；而濕轉耗時較長，尤其對大分子量的蛋白轉膜效果較好。相對來講，還是濕法轉膜的實驗室多一些。
western－blot－試驗中蛋白轉膜總轉不上去
當然，首先要考慮的問題是你轉過頭了，蛋白質跑出去了。其次你的電流有點大，你也沒說轉了多久？用的干轉還是濕轉？是不是拿出來的時候很熱？這種情況有可能使蛋白質降解。我們一般是濕轉用100mA轉2小時， 干轉所需電流更小。
雜交膜轉印膜*纖維素膜NC膜與PVDF膜的區別
1.?*纖維素膜*纖維素膜是蛋白印跡廣泛使用的轉移介質，對蛋白有很強的結合能力，而且適用于各種顯色方法，包括同位素，化學發光(Luminol類)、常規顯色、染色和熒光顯色；背景低，信噪比高。NC膜的使用也很簡便，比如不需要甲醛預處理，只要在無離子水面浸潤排出膜內氣泡，再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以
轉膜后為什么要電泳
、轉膜后的mark非常歪的原因是膠、膜以及濾紙（三明治組合）之間氣泡沒趕干凈導致的。2、而條帶特別不清晰就得看你的轉膜時間了：轉膜時間不夠會導致膠上的蛋白包括mark沒有完全轉到膜上，轉膜時間長了會導致膠上的蛋白包括mark已經穿過膜到濾紙上了。建議電泳后膠進行考馬斯亮藍染色、轉膜后的膜進行麗春紅染
westernblotting轉膜是根據什么原理
western blot中封閉主要是起去除非特異性吸附的作用在western blot轉膜時，PVDF膜在甲醇活化后是帶電的，因而在轉膜時會將蛋白吸附。封閉的目的就是要將PVDF膜上無蛋白的部分空隙用奶粉填滿，以免孵抗體的時候一抗二抗與之結合，產生非特異條帶或者是背景雜亂。所以western blo
半干轉膜儀如何使用
以WEALTEC的YRDIMES半干轉膜儀為例，首先確認是轉蛋白質還是核酸。蛋白質可參考Bjerrum and Schafer-Nielsen或Towbin或Dunn緩沖液系統配置緩沖液，電泳后將凝膠浸入緩沖液平衡5分鐘，將轉印膜和濾紙裁切并浸入緩沖液，合上上蓋，按說明書墊上BP-C紙，普通轉印1或
RNA的電泳，轉膜和雜交
實驗原理：基本同 Southern Blotting，但因RNA 是單鏈分子，必須消除局部區域形成的二級結構，在電場中泳動的距離才能反映它本身的大小，因而需使用變性膠進行電泳；另應特別注意防止RNA 的降解。實驗材料：經檢測質量好的 RNA實驗步驟：1．制膠：Agarose 1%-1.2% ， 1×
轉膜實驗原理與操作步驟
轉膜是把DNA從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物(一般是尼龍膜)上固定，是進行各種后續研究(如 RFLP 分析，陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究)的前提。 實驗目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步驟 實驗原理： 1. ?轉膜的方式： 向上的毛細管