293細胞培養(cellculture)技術
1、293細胞明顯適應酸性環境,pH值在6.9～7.1時,可順利貼壁生長, 換液時動作要輕。一般用高糖的DMEM培養基。2、傳代：倒去廢液，PBS洗一次（輕），用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長良好細胞，培養瓶中輕搖,使之流遍所有細胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細胞變圓,就可加DMEM終止消化，反復吹打至細胞全成單個懸浮細胞即可。12小時-24小時90%以上細胞貼壁。293細胞傳代時機為達80-90%匯合，傳代比例為1：3。3、293細胞在低代時容易貼壁，生長良好，在傳到幾十代以后，易聚集成團，且貼壁不牢，用PBS沖洗時即可能脫落，即使消化后也不容易吹打成單細胞懸液，最好購入時先大量凍存。4、復蘇 293細胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。細胞冷凍后復蘇時,都有不同程度的腫脹,若以50ml培養瓶待細胞長滿瓶底的 70%～80......閱讀全文
293細胞培養(cell－culture)技術
1、293細胞明顯適應酸性環境,pH值在6.9～7.1時,可順利貼壁生長, 換液時動作要輕。一般用高糖的DMEM培養基。2、傳代：倒去廢液，PBS洗一次（輕），用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長良好細胞，培養瓶中輕搖,使之流遍所有細胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，
七個293T細胞培養的注意事項
培養293細胞應注意以下幾個方面：1.用1640加10%胎牛血清，有的種系用DMEM.血清要求質量較高，在普通血清中細胞生長不太好。1640用雙蒸水溶解，按說明加入碳酸氫鈉。2.培養液中應加入HEPES，起緩沖pH值的作用，否則會影響細胞狀態。如果用20%的HEPES，每次配培養液時每200ml培養
如何養293、293T系列的細胞
將細胞培養瓶豎立放置，吸走培養基，如果培養基中的脫落細胞較多，說明細胞現在很容易脫落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，來回輕微晃動培養瓶直到細胞完全脫落，加入10mlMEM，混勻，不能吹打，分裝2瓶。如果細胞沒長滿就脫落，則只需加入5mlMEM，不分裝。如果培養瓶中的細胞貼壁較牢固，
人胚腎細胞293A細胞培養的基本技術（三）無菌操作
? ? ???三、無菌操作? ? 無菌操作是防止污染、決定培養是否成功的首要條件。由于體外培養細胞缺乏抗感染能力，在一切操作中要努力做到z大限度的無菌。工作前對手部需清洗消毒，進無菌操作室時戴K罩和穿工作服。不能用手直接觸及已消毒器皿內部。打開培養瓶前或封閉瓶口前須火焰燒灼瓶口等。
293fectin?－Transfection
實驗概要293fectin? ?is a proprietary, cationic lipid-based formulation for transfection of ?DNA into eukaryotic cells. 293fectin? is optimized for transfe
Culturing－HEK－293－Cells
ReagentsMedium:500 ml Dulbecco’s Modified Eagle Medium (Gibco #41966-029)55 ml FCS (10 %)2.8 ml Gentamycin Solution (Sigma G-1272, 10 ml))TrypsinTryps
293細胞的大規模培養
293細胞是腺病毒載體的包裝細胞。腺病毒是繼逆轉錄病毒后用于基因治療研究的熱門載體。直接將腺病毒載體導入人體內表達目的基因，治療惡性腫瘤、心血管疾病或一些遺傳疾病已取得可喜進展；利用腺病毒載體在包裝細胞293中表達分泌性蛋白質，如蛋白酪氨酸激酶1C等亦成為生產重組蛋白的一條途徑。因此完善293細胞的
Transient－transfection－into－293T－cells
PurposeTransient transfection into 293T cells is a convenient way to overexpress and obtain both cellular and extracellular (secreted or membrane) pro
293細胞的大規模培養
293細胞是腺病毒載體的包裝細胞。腺病毒是繼逆轉錄病毒后用于基因治療研究的熱門載體。直接將腺病毒載體導入人體內表達目的基因，治療惡性腫瘤，心血管疾病或一些遺傳疾病已取得可喜進展；利用腺病毒載體在包裝細胞 293中表達分泌性蛋白質，如蛋白酪氨酸激酶 1C等亦成為生產重組蛋白的一條途徑。因此完善 293
293T細胞的培養
包裝細胞293T細胞的培養一、293T細胞的凍存1. 隨著傳代的次數增加，293T細胞會出現生長狀態下降，出現突變等。所以要在細胞購進時就進行大量凍存，以保證實驗的穩定性和持續性。2. 在細胞對數生長期進行凍存，增加細胞復蘇成活率。3. 倒去細胞上清液，加入D-Hank's液洗去殘留的培養基
Generating－stable－cell－lines－in－HEK293
Generating stable cell lines in HEK293Prior to transfection, it is recommended that you linearize your pcDNA gene construct. Linearizing will decrease
Generating－stable－cell－lines－in－HEK293
Generating stable cell lines in HEK293Prior to transfection, it is recommended that you linearize your pcDNA gene construct. Linearizing will decrease
CO2恒溫搖床解決人胚腎－293－(HEK293)－細胞結團問題（二）
Lysate preparation and western blottingProtein lysates were created by harvesting the cells from con?uent T-?asks or from suspension cultures at h
使用CO2恒溫搖床解決人胚腎－293－(HEK293)－細胞結團問題
人胚腎 293 (HEK293)? 細胞在重組蛋白表達中是最常見的宿主細胞。 這類細胞能夠表達大量的膜蛋白，如 G 蛋白偶聯受體? (GPCR) ，是無法在最常見的生物制藥生產宿主，如：中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞中作表達。 HEK293 雖然是蛋白表達的極好宿主，然而 HEK293 細胞
CO2恒溫搖床解決人胚腎－293－(HEK293)－細胞結團問題（一）
人胚腎 293 (HEK293)? 細胞在重組蛋白表達中是最常見的宿主細胞。 這類細胞能夠表達大量的膜蛋白，如 G 蛋白偶聯受體? (GPCR) ，是無法在最常見的生物制藥生產宿主，如：中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞中作表達。 HEK293 雖然是蛋白表達的極好宿主，然而 HEK293 細胞
293長滿六孔板的細胞量
6000萬個。正常情況下，六孔板的每個孔長滿約有100萬個細胞，也就是293長滿需要6000萬個細胞量。293細胞是人腎上皮細胞系，有多種衍生株，比如HEK293，293T/17等，來源都是人胚胎腎細胞，其極少表達細胞外配體所需的內生受體。
Growth,－Maintenance－and－Transfection－of－Suspension－Adapted－293EBNA－cells
ProcedureI. INTRODUCTIONThe 293 EBNA cell line is established from primary embryonal human kidney cells transformed with sheared human adenovirus type
如何優化LipoD293轉染試劑？
LipoD293DNA轉染試劑是脂質體DNA轉運工具的升級版本。我們實驗室使用LipoD293DNA轉染試劑成功轉染了HepG2，LNCaP，CHO及HEK293細胞。接下來，我們樂意就如何提高轉染效率，降低毒性等方面的小技巧同大家分享。1、LipoD293/DNA的比率。盡管合適的比率由細胞類型決
磷酸鈣法轉染HEK293T細胞
磷酸鈣法轉染HEK293T細胞可應用于：（1）研究轉染哺乳動物細胞的機理；（2）基因工程。實驗方法原理常規轉染技術可分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩定轉染（永久轉染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數，產生高水平的表達，但通常只持續幾天，多用于啟動子
磷酸鈣法轉染HEK293T細胞
磷酸鈣法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 常規轉染技術可分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩定轉染（永久轉染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可
細胞轉染技巧及常見問題分析
1.?Freestyle? 293-F細胞的培養：在37℃，125rpm，8% CO2的搖床培養箱中培養；轉染當天Freestyle? 293-F細胞密度達到1.5-2.5×106個/ml時可以進行轉染，但細胞存活率需>95%；可以使用生產的臺盼藍染色細胞存活率檢測試劑盒(C0011)進行細胞存活率
磷酸鈣法轉染HEK293T細胞介紹
一.試劑配制無菌水ddw： 高溫滅菌； 分裝；2XHBS： 280mM NaCl10mM KCl1.5 mM Na2HPO412 mM glucose50 mM HEPESAdjust the pH , every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N NaOH, t
內蒙古呼和浩特新增陽性病例293例
10月5日，記者從呼和浩特新冠肺炎疫情防控新聞發布會上了解到，10月4日0到24時，呼和浩特市新增新冠肺炎確診病例54例(含34例無癥狀感染者轉確診)、無癥狀感染者239例。 截至10月4日24時，呼和浩特市現有確診病例319例、無癥狀感染者453例。本次疫情來勢兇猛，快速、隱匿性傳播特點明顯，
腺病毒體外在293細胞中大量擴增的方法
在293?細胞中大量擴增腺病毒一旦重組病毒已被純化和鑒定，即可在293 細胞中進行大量擴增。本手冊提供了遞增培養規模和腺病毒感染周期的基本方法，按這一方法最終得到的病毒量約為3×1011～3×1012。由于一個細胞中所含的病毒顆粒為1000～10000，因此1L 培養細胞可得到約5×1012?病毒顆
293T細胞貼壁慢，抱團生長，該怎么辦
1.細胞單用Trypsin消化，消化下來的細胞容易成團并且吹打后也不容易成為單細胞，并且消化時間要掌握好，很容易漂起來；2.用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution消化，感覺應該在用秒計的時間就消化下來，處理要迅速，我曾經棄Trypsin溶液后，就幾乎看
細胞培養實驗——懸浮細胞培養
實驗材料凍存 HeLa S3 細胞試劑、試劑盒70% 乙醇完全 MEM-10胰酶／EDTA儀器、耗材旋轉瓶完全培養基-525 cm2 組織培養瓶C02 培養箱Sorvall H-6000A 轉子100 ml 或 200 ml 通氣旋轉瓶和帶濾膜的瓶蓋實驗步驟1. 將含有凍存 HeLa S3 細胞的安
用于人誘導多能干細胞的逆轉錄病毒制備
實驗概要用于人誘導多能干細胞的逆轉錄病毒制備主要試劑0.25%Trypsin、1 mg/mL PDL、Lipo LTX、Opti-MEM、Polybrene、293T培養液主要設備35 mm培養皿、4孔培養板，0.45 μm濾器，2mL、5mL、10mL、25mL、15mL、50mL離心管、倒置顯微
動物細胞培養及外源基因導入的原理和方法
細胞培養是現代生物學研究中應用最為廣泛的技術之一。它的突出優點，一是研究對象是活的細胞，可長時期地監控、檢測甚至定量評估其形態、結構和生命活動等；二是可以人為地嚴格控制研究條件，便于研究各種物理、化學、生物等外界因素對細胞生長、發育和分化等的影響，有利于單因子分析；三是研究的樣本可以達到比較均一性。
細胞的真核轉染及共聚焦顯微鏡觀察
實驗概要本實驗介紹了細胞瞬時轉染與傳代、細胞的裂解及共聚焦顯微鏡觀察。主要試劑1. 裂解緩沖液配方：1%NP-40，100mM NaCl，20mM TRis pH8.0，5mM EDTA，5mM MgCl2，10% Glycerol。2. 細胞培養液成分：RPMI1640基本培養液 10%胎牛血清
動物細胞培養——細胞培養介紹
實驗方法原理目的細胞培養的評判性檢查。應用檢查常規維持的一致性；在復蘇、傳代、凍存前培養狀況的評估；對新的或實驗性情形反應的評估；確認明顯的污染物。訓練目標熟悉不同類型和不同密度的細胞培養的外觀；數碼或膠片相機的使用；滅菌物品和污染物間的區別，健康的和不健康的培養物間的區別；培養物生長階段的評估。監