Amicon?Pro蛋白純化濃縮操作指南
蛋白從克隆表達到純化脫鹽濃縮，一路經過千山萬水，寶貴的活性蛋白產量是很多人的“命根子”。然鵝，努力的我們還是苦惱的時候多，欣喜的時候太少太少～～ 純化黑科技，是時候放大招了 有沒有什么好方法能讓操作步驟少一點、再少一點，而同時蛋白的活性及產量損失也少一點、再少一點？？ 讓我們看看那些蛋白操作高手的秘密武器吧——Amicon? Pro由傳統方法升級到革命性的Amicon? Pro純化超濾系統，純化、濃縮、換液從此不同。 真的能這樣操作？？視頻：https://v.qq.com/x/page/q0378jlg84p.html 讓我們一起來欣賞一下Amicon? Pro帶來的蛋白純化濃縮的流暢操作。 操作1親和純化——多樣本操作，更快更好6次低速離心，總耗時~100分鐘（含65分鐘孵育時間）向上滑動閱覽1.&n......閱讀全文
Amicon?－Pro蛋白純化濃縮操作指南
蛋白從克隆表達到純化脫鹽濃縮，一路經過千山萬水，寶貴的活性蛋白產量是很多人的“命根子”。然鵝，努力的我們還是苦惱的時候多，欣喜的時候太少太少～～??純化黑科技，是時候放大招了?有沒有什么好方法能讓操作步驟少一點、再少一點，而同時蛋白的活性及產量損失也少一點、再少一點？？?讓我們看看那些蛋白操作高手的
蛋白純化經驗指南3
56) 向您請教一個問題，我用pET28載體、宿主菌BL21(DE3)表達目的蛋白，目的蛋白的兩端都帶His-tag,蛋白的大小為37kD，在利用Ni-NTA純化時總是在目的蛋白帶旁邊伴隨一條帶去除不了，請問有什么高招可以解決這個問題？!!!此外，該表達產物為包涵體，請問這種產物可不可以直接用來制備
蛋白純化經驗指南4
86) 選擇sephadex G75或者superdex 75,柱子的大小一般都是按你的處理量算的,通常的柱子大多是1.6x60,2.6x60,或者有100cm的柱子,內徑為1.6或者2.6的.也也有更粗的.一般都不會有問題.?1,我們實驗室沒有sephadex G75(3000-80000)，最接
蛋白純化經驗指南2
28) 首先我想問一下agarose和sepharose區別,我的理解是:都指瓊脂糖,但agarose是未連接其他介質的,而sepharose是連接其他介質的,不知理解對不對?請指教!Glutathione-agarose(4%cross-linked beaded agarose)和Glutath
蛋白純化經驗指南1
蛋白純化經驗指南生物谷整理?http://www.bioon.com??原創：Chromatography weixingui@263.net，?推薦書籍：《蛋白純化與實驗鑒定指南》、《生物工程下游技術》、《酶工程》、《酶制劑工業》?1) 我現在手頭有個融合蛋白，純化的時候用助溶劑溶解后做了GST親
定量濃縮儀的操作指南說明
全自動氮空吹掃濃縮儀通過自動控制氮氣或干燥潔凈的空氣吹掃樣品而達到快速將樣品濃縮的目的，使樣品前處理的時間大大縮短，大大提高工作效率；無人值守的功能使操作人員不必守在儀器面前，大大降低了有毒有害氣體對人體的傷害，減少操作人員繁瑣費力的操作過程。該儀器具有易操作，省時、安全、節約成本等特點。一、安裝儀
Amicon－Stirred－Ultrafiltration－Cells
DescriptionFor protein concentration, gas pressure is applied directly to ultrafiltration cell. Solutes above the membrane's molecular weight (MW)
應用切向流技術的DNA/蛋白質樣品制備方案
生命科學研究中應用切向流技術（TFF）的DNA/蛋白質樣品制備方案??????? 生命科學實驗室的超濾設備 密理博提供的實驗室超濾全套解決方案 ??????? 盡管切向流過濾Amicon? Ultra的超速裝置，提供優良的性能（使用水平吊籃轉子尤佳）。更多的用于與大規模操作
蛋白染色儀使用操作指南
eStain L1 蛋白染色儀是一個高效的蛋白染色系統，該系統運用金斯瑞生物科技自主研發的ZL蛋白染色技術。eStain L1 快速電染法整合了傳統的固定—染色—脫色三步反應，可實現在 10 分鐘或更短時間內穩定、高效、快速、可靠的對聚丙烯酰胺凝膠上的蛋白進行考馬斯蘭染色。整個染脫色過程無需
核酸的純化，濃縮和定量
一、核酸的純化 在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的純化。其關鍵步驟是去蛋白質，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每當需要把克隆有某一些所用的酶滅活或去除以便進行下一步時，可進行這種抽提。然而，如要從細胞裂解液等復雜的分子混合物中純化核酸，則要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白質后
慢病毒怎么純化和濃縮
慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸慢病毒濃縮后沉淀用多少體積1%bsa重懸
慢病毒的濃縮與純化
方法一 超速離心沉淀法1. 取6個Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘。2. 每個Ultra-clear SW28離心管中加入約32ml的預先處理的病毒上清液。3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。將移液管一
慢病毒的濃縮與純化
實驗概要本文介紹了慢病毒濃縮與純化的兩種方法：超速離心沉淀法，PEG-8000濃縮法。實驗材料慢病毒上清液實驗步驟超速離心沉淀法： 1. 取6個Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續消毒30分鐘； 2. 每個Ultra-clear SW28離心管中
DNA的純化濃縮與定量
實驗目的 將復雜的細胞分子混合物加入有機溶媒萃取以除去蛋白質及其它成分，就可以純化DNA。一般常用酚及氯仿(phenol/chloroform)可使蛋白質變性(denaturaion)的特性來進行萃取的步驟，DNA和RNA不溶于有機溶媒中，而溶于水層。另外，分子選殖(molecular clon
超濾離心管的常見問題有這些？
超濾離心管的常見問題與解答一：超濾離心管的膜材質是什么？密理博超濾離心管的膜材質為默克密理博特有的Ultracel再生纖維素膜，生產工藝嚴格，截留分子量明確而，蛋白吸附損失zui小。二：如果要用超濾離心管的方法分離兩種蛋白，那么這兩個蛋白的大小需要相差多少？按照經驗，建議兩個蛋白的分子量要相差一個數
慢病毒的濃縮與純化——PEG8000濃縮法
實驗概要本實驗介紹了用PEG-8000濃縮法濃縮與純化慢病毒的操作步驟。主要試劑1. NaCl2. PEG8000主要設備1. 高壓滅菌鍋2. 0.45μm濾頭3. 高速離心機4. 低溫冰箱實驗步驟1. 5X PEG8000 NaCl配制稱取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在2
蛋白質純化的操作程序
分離純化某一特定蛋白質的一般程序可以分為前處理、粗分級、細分級三步。前處理分離純化某種蛋白質,首先要把蛋白質從原來的組織或細胞中以溶解的狀態釋放出來并保持原來的天然狀態,不丟失生物活性。為此,動物材料應先剔除結締組織和脂肪組織,種子材料應先去殼甚至去種皮以免受單寧等物質的污染,油料種子最好先用低沸點
尿蛋白試驗(PRO)的概述
血液中常會有定量的對人類生命活動不可或缺的蛋白存在。一部分的蛋白會在腎臟的絲球體中過濾進入尿液中，但又會在腎小管被吸收而回到血液中。 因此，若腎臟的機能正常，在尿液中出現的蛋白量只有一點點，但是當腎臟與尿管出現障礙時就會漏出多量的蛋白變成蛋白尿。調查這種尿中蛋白的檢查就稱為尿蛋白檢查。 尿蛋白的
氮氣純化裝置4000小時維護包重置操作指南
一、查看儀器是否需要維護1、當屏幕顯示“Service 4000h”時（如下圖），表示4000h維護包需要更換，維護報警。2、進入Diagnostics查看運行時間。3、關機，按如下操作更換4000h維護包。二、更換4000h維護包4000h維護包組件零件數量維護周期貨號組合式過濾器濾芯14000h
蛋白濃縮方法
蛋白濃縮方法基本有：?丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸銨沉淀法；（低溫）有機溶劑沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超濾法；透析法；離子交換層析和冷凍干燥法……?1，丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法?試驗要求的儀器簡單，但是常常導致蛋白質變性。?2，免疫沉淀法：得有特異性抗體！?3，硫酸銨沉淀法：利用高濃
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（八）
肽圖分析法 - 蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南反相高效液相色譜已成為蛋白質分析和表征的標準方法，尤其是治療性藥物的分析和表征。反相色譜分析法分辨率高，檢測靈敏度好，能夠提供大量關于蛋白質的信息。有些時候，蛋白質作為完整的分子分析，但更多的時候采用蛋白水解酶作用于特殊的氨基酸殘基將碳骨架斷開，
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（三）
蛋白質純化RP-HPLC 是一種有效的蛋白質/多肽純化工具。通過 RP-HPLC 法可以從雜質中分離目標蛋白/多肽，采集到的片段可用于進一步研究，以及借助正交分析技術的分析，甚至可作為治療藥物。在蛋白質/多肽分析過程中，色譜條件優化的目標是優化分辨率和保留時間。制備色譜法分離蛋白質/多肽時，色譜條件
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（七）
在氧化環境條件下，盡管蛋白質的幾個氨基酸都可能受影響，但最有可能被氧化的氨基酸是甲硫氨酸；甲硫氨酸可被氧化成甲硫氨酸亞砜（圖34）。對甲硫氨酸殘基的氧化取決于其在蛋白質中的位置。埋藏在蛋白質內部的甲硫氨酸不可能被氧化。接近表面且與溶劑接觸的甲硫氨酸側鏈最有可能被氧化。氧化條件包括熱、過渡金屬的存在以
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（一）
蛋白質組學蛋白質組學是鑒定和定量細胞、組織或生物體蛋白質的科學，目的是了解生物學變化和疾病狀態，開發疾病的生物標記和治療藥物的靶點。如果將一個基礎蛋白的各個修飾蛋白算作一個蛋白，那么哺乳動物細胞含多達3~4萬個蛋白。當計算各個修飾后的蛋白時，蛋白質的數量遠遠超過了10萬。細胞內不同蛋白質的豐度或濃度
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（十三）
?圖17. TFA濃度對峰形和選擇性的影響 洗脫液：加入如圖所示的TFA，以20%~32%的乙腈（ACN）梯度洗脫，洗脫時間為15分鐘。樣品1.血管緊張素II 2.血管緊張素III3.血管緊張素I其它離子對試劑。盡管目前為止TFA仍是最常用的離子對試劑，但蛋白質/多肽分離有時會采用磷酸和七氟丁酸（H
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（十五）
其它離子對試劑。盡管目前為止TFA仍是最常用的離子對試劑，但蛋白質/多肽分離有時會采用磷酸和七氟丁酸（HFBA）等其它試劑。 如圖18所示，一些情況下，磷酸可分離一些TFA無法分離的多肽。通常磷酸鹽使用濃度約為20-30 mM，pH為2~2.5。此外，磷酸鹽緩沖液對一些蛋白質的分離效果要優于TFA。
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（十）
反相高效液相色譜和質譜（MS）的聯用為蛋白質/多肽分析提供了強大的工具。20世紀80年代，約翰·貝內特·芬恩和他的同事們開發了電噴霧離子源，使質譜與反相高效液相色譜得以聯用。采用液相色譜-質譜聯用的好處包括：質譜是非常靈敏的檢測技術。 質譜可以提供所分離多肽/蛋白質的分子量。 質譜可利用分子
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（十一）
HPLC-MS 聯用的兩個重要因素是電噴射接口的最佳流速及三氟乙酸對肽電離的影響 基本電噴霧接口的信號在5~10μL/min的流速區間上迅速下降（圖28）。這與采用標準分析型HPLC柱的流速不相容。目前，商用電噴霧提供一種高剪切流氮氣輔助的電噴霧（氣流輔助電噴霧），它將電噴霧的最佳流速區間提升到了2
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（二）
色譜分析色譜技術已發展成一種強大的分離技術，能夠分離大量蛋白質和多肽。但任何一種單獨的色譜技術仍然只能分離出一小段蛋白質。因此，多種色譜技術的結合使用已成為蛋白質組分析中蛋白質分離的一種普遍方法。二維色譜在長期的蛋白質純化模式的基礎上，John Yates和同事開發了一種名為多維蛋白質鑒定技術（Mu
蛋白質和多肽反相HPLC分析和純化指南（十二）
蛋白質/多肽液相分析中的流動相選擇有機溶劑可將吸附在疏水界面的蛋白質洗脫（圖14）。在梯度洗脫期間，當有機溶劑量達到針對每一蛋白質的特定濃度時，蛋白質就會從疏水界面上解吸，繼續順著柱向下，從而從柱中洗脫。圖14. 當有機改性劑的濃度達到特定值時，蛋白質從疏水界面洗脫。乙腈。在多肽的反相色譜分離時最常