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    蛋白純化經驗指南2

    28) 首先我想問一下agarose和sepharose區別,我的理解是:都指瓊脂糖,但agarose是未連接其他介質的,而sepharose是連接其他介質的,不知理解對不對?請指教!Glutathione-agarose(4%cross-linked beaded agarose)和Glutathione Sepharose 4B是一種東西嗎? 其次,我想問一下你純化過GST融合蛋白沒有?我現純化一個融合蛋白(某種酶和GST融合),我買了SIGMA公司的GLUTATHIONE-AGAROSE五毫升,但我不知怎么做.分子克隆說直接將親和介質于細菌裂解液混允離心....我不知我買的可不可以這樣做.而產品說明書上說做柱子,我就想1毫升的柱子怎么做,裝介質的柱子的高度和直徑有要求嗎? agarose是通常的瓊脂糖的英文名稱,大家都這么叫,它不是商品的注冊名稱。而sepharose是amersham的瓊脂糖凝膠的注冊......閱讀全文

    蛋白純化經驗指南-1

    蛋白純化經驗指南生物谷整理 http://www.bioon.com  原創:Chromatography weixingui@263.net, 推薦書籍:《蛋白純化與實驗鑒定指南》、《生物工程下游技術》、《酶工程》、《酶制劑工業》 1) 我現在手頭

    Western Blot實驗技術詳解和常見問題解答

    Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被

    Western Blot詳解

      Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。   本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術:   一、原理   二、分類

    Jackson ImmunoResearch 二抗選用指南

    Jackson ImmunoResearch  公司二抗選用指南( 此部分內容來源于 Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc  網站,如有疑問,請參考原網站)親和層析法純化的二抗    用親和層析法純化的抗體是指,利用耦

    第二屆質譜論壇:質譜在生物醫藥中的應用

      質譜論壇學術報告 賽默飛世爾科技色譜質譜部應用工程師 劉婷   來自賽默飛世爾科技的應用工程師劉婷 為大家作了題為《高分辨質譜提高代謝物鑒定的數量和可靠性》的報告。   代謝

    GFP 和熒光共振能量轉移技術測定蛋白質相互作用實驗

                實驗材料 進行轉染的細胞株 按第二階段所介紹的方法制備表達了蛋白質探針的細胞 試劑、試劑盒

    RNA干擾載體的構建的實驗流程

    RNA干擾載體主要用來研究基因表達調控,RNA干擾技術已已被廣泛用于基因結構功能研究和傳染性疾病及基因治療領域,進行RNA干擾實驗首先是構建RNA干擾載體,本文以pRI系列載體為例論述了干擾載體的構建的實驗流程。產品技術背景pRI系列載體是基于III類rna聚合酶啟動子:人類H1啟動子的專用于哺乳動

    shRNA干擾載體構建

    產品技術背景pRI系列載體是基于III類RNA聚合酶啟動子:人類H1啟動子的專用于哺乳動物細胞RNA干擾的載體。H1啟動子在哺乳動物細胞內合成類似siRNA分子的小分子RNA。由于H1啟動子有精確的轉錄起始位點和終止信號,H1啟動子轉錄產物精確生成人工設計的shRNA,shRNA經過RISC剪切后形

    shRNA干擾載體構建

    產品技術背景pRI系列載體是基于III類RNA聚合酶啟動子:人類H1啟動子的專用于哺乳動物細胞RNA干擾的載體。H1啟動子在哺乳動物細胞內合成類似siRNA分子的小分子RNA。由于H1啟動子有精確的轉錄起始位點和終止信號,H1啟動子轉錄產物精確生成人工設計的shRNA,shRNA經過RISC剪切后形

    GFP 和熒光共振能量轉移技術測定蛋白質相互作用實驗

    我們將方案分成三個階段: 第一階段介紹蛋白質的制備及蛋白質的熒光染料標記;第二階段,通過轉染或微注射將適當的探針成分導入細胞;第三階段,圖像的收集和分析過程。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料進行轉染的細胞株按第二階段所介紹的方法制備

    多項儀器研發項目列入863計劃和2014備選項目

      一、前沿生物技術主題  1.蛋白質測序新技術新裝備及配套試劑國產化  (1)陣列毛細管柱蛋白質分離-陣列點樣裝置  研制二維陣列毛細管分離新裝置,第一維分離柱可分離48個餾分,第二維維陣列毛細管分離柱可同時分離48個流份;開發陣列紫外檢測器; 研制多柱點樣頭并行點樣器和流份收集器;開發

    DNA 酶 I 足跡法對 DNA 上的蛋白質結合位點作圖實驗

    本方案介紹在放射性標記的 DNA 片段上確定蛋白質結合位點的作圖方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羥自由基斷裂 DNA。如果希望得到優化足跡法反應的建議,請參見本方案最后部分的疑難解析以及優化 DNA 酶 I 足跡法反應的欄目。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)

    生物粒子介導的 DNA 轉染實驗

    下面是拫據 Horch 等(1999)、Sanford 等(1993)、主要基因槍生產商的出版物(US/EG Bulletins 1688 and 2087;Bio-Rad) 以及 Steve Finkbeiner(University of California,San Francisco) 建立

    Jackson ImmunoResearch 二抗選用指南

    Jackson ImmunoResearch 公司二抗選用指南(此部分內容來源于Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc網站,如有疑問,請參考原網站)親和層析法純化的二抗用親和層析法純化的抗體是指,利用耦聯到瓊脂糖凝膠上的抗原將抗血清中的抗體親和層析下

    縮短蛋白質療法的上游生物工藝時間

     過去十五年來,蛋白質療法在全世界范圍內的應用急劇增長。因此,對于很多生物制藥公司而言,當務之急是尋找更經濟和更有效的方法提升上游生物工藝生產。    提高上游生產的策略之一是使用生物工藝模型模仿大型生物反應器,以幫助選擇最合適的克隆,并優化培養基、補料和過程

    長個晶體,一定要用自家貓胡須?當科學家迷信起來

    無數次熬夜、屢戰屢敗屢敗屢戰地做著同一個實驗,然而實驗中起眼或者不起眼的變量和參數實在太多。你開始懷疑一切,開始每次改變小小的一點條件(雖然你可能覺得有些條件根本不應該影響到你的實驗結果),希望找到傳說中的金手指,然后,突然有一天,你竟然奇跡般地把煎熬了很久的實驗做出來了!你開始歸納總結,你試圖還原

    NP40以及菌體/細胞裂解法-1

    細胞裂解分析化學,論壇,化學分析,儀器分析,分析測試,色譜,電泳,光譜u5kLlIOT采用溫和的裂解條件,不能破壞細胞內存在的所有蛋白質-蛋白質分析化學論壇~O/b:te}  相互作用,多采用非離子變性劑(NP40或Triton X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的,通過經驗確定。&

    我國的單抗行業將迎來黃金發展時期

      單克隆抗體是針對腫瘤(癌癥)的特異性藥物。單克隆抗體不僅為基礎醫學研究提供極有價值的抗癌載體,而且在臨床醫學上也得到廣泛的實際應用,為腫瘤、自身免疫等許多臨床疾病的診斷、治療和預防提供了新的手段,是人類治療腫瘤的希望所在。    單克隆抗體具有三種獨特的作用機制。主要包括靶向效應、阻斷效應、信

    磷酸鈣介導的質粒 DNA 轉染真核細胞實驗

    本方法中介紹的磷酸鈣介導的質粒 DNA 轉染貼壁細胞是對 Jordan 等建立的方法 (1996) 的改進。Jordan 等大大優化了磷酸鈣介導的中國倉鼠卵巢細胞與人胚腎 293 細胞的轉染方法。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料指數

    我國的單抗行業將迎來黃金發展時期(五)

    4.3 多個單抗進入地方醫保,未來個別單抗有望進入國家醫保,單抗行業拐點將至    鑒于單抗藥物療效顯著,目前郝賽汀以及美羅華、恩利的使用效果得到了專家的認同,2009年個省調整醫保目錄之后,有多個單抗藥物進入省醫保,其中利妥昔單抗(美羅華)進入了9個省醫保、西妥昔

    CRISPR精品操作指南:如何精確有效完成實驗!

      生物學家們總是沉迷于對基因組修修補補,而其中一種近期紅得發紫的技術就是 CRISPR。自2012年CRISPR/Cas 首次作為一種基因組編輯工具登臺以來,關于這種技術的論文數量就大幅增加,最好的證明之一就是2015年兩位科學家由于在CRISPR基因組編輯技術方面的重要貢獻而獲得“科學突破獎”,

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    下面的方案分成 3 個階段:用 pTet-tTAk 穩定轉染成纖維細胞,穩定轉染可誘導表達 tTA 的 NIH-3T3 細胞,分析轉染細胞中的蛋白表達。穩定轉染細胞系表達反式激活因子和靶基因分為兩個階段。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗

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    測序中,4 個系列的 DNA 片段在變性的條件下在一個薄的聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳分析。本方案介紹了制備均一緩沖液和丙烯酰胺濃度膠的方法。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,作者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒丙烯酰胺溶液過硫酸銨水溶液去離子水去污劑乙醇KOH 甲醇溶

    甲狀腺檢查全面解析

    史上最全的甲狀腺疾病實驗室檢查項目,您值得收藏!血清甲狀腺激素測定甲狀腺素(T4)全部由甲狀腺分泌,而三碘甲腺原氨酸(T3)僅有20%直接來自甲狀腺,其余約80%在外周組織中由T4經脫碘代謝轉化而來。T3是甲狀腺激素在組織實現生物作用的活性形式。正常情況下,循環中T4約99.98%與特異的血漿蛋白相

    史上最全面解讀甲狀腺疾病的實驗室診斷

    一、血清甲狀腺激素測定(TT4、TT3、FT4、FT3)甲狀腺素(T4)全部由甲狀腺分泌,而三碘甲腺原氨酸(T3)僅有20%直接來自甲狀腺,其余約80%在外周組織中由T4經脫碘代謝轉化而來。T3是甲狀腺激素在組織實現生物作用的活性形式。正常情況下,循環中T4約99.98%與特異的血漿蛋白相結合,包括

    純水系統在分光光度計法檢測毒膠囊中的應用分析

    《每周質量報告》曝光了13種藥用鉻超標膠囊藥物,其成分含有不可食用的工業明膠。部分鉻含量大幅超過國家標定的“不超過2mg/kg”標準上限。4月16日,因為將名為“白袋子明膠”實質為工業明膠銷售到浙江藥品膠囊生產企業,河北省衡水市阜城縣“學洋明膠蛋白廠”被當地公安局查封。同日,國家食品藥品監督管理局發

    縮短蛋白質療法的上游生物工藝時間(一)

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