酶免疫技術中酶和酶作用底物
酶和酶作用底物（一）酶的要求： 一個酶蛋白分子每分鐘可催化10 3 ～10 4 個底物分子轉變成有色產物。用于標記的酶應符合：1.酶的活性要強，催化反應的轉化率高，純度高。2.酶催化底物后產生的產物易于判斷或測量，方法簡單易行、敏感和重復性好。3.作用專一性強 ，酶活性不受樣品中其他成分的影響，受檢組織或體液中不存在與標記酶相同的內源性酶或抑制物。用于均相酶免疫測定的酶還要求當抗體與酶標抗原結合后，酶活性可出現抑制或激活。4.易與抗體或抗原偶聯 ，標記后酶活性保持穩定，且不影響 標記抗原與抗體的免疫反應性 。5.酶、輔助因子及其底物對人體無害 ，酶的底物易于配制、保存，酶及其底物應價廉易得。（二）常用的酶1.辣根過氧化物酶（HRP）：目前酶聯免疫吸附試驗中應用最廣泛 的標記用酶。由無色的糖蛋白(主酶)和亞鐵血紅蛋白(輔基)結合而成的復合物。輔基是酶活性基團 ，而主酶則與酶活性無關 ，HRP的純度用RZ(HRP分別在40......閱讀全文
酶免疫技術中酶和酶作用底物
酶和酶作用底物（一）酶的要求：?一個酶蛋白分子每分鐘可催化10 3 ～10 4 個底物分子轉變成有色產物。用于標記的酶應符合：1.酶的活性要強，催化反應的轉化率高，純度高。2.酶催化底物后產生的產物易于判斷或測量，方法簡單易行、敏感和重復性好。3.作用專一性強 ，酶活性不受樣品中其他成分的影響，受檢
酶免疫技術中酶和酶作用底物是怎么樣的呢？
酶和酶作用底物 （一）酶的要求： 一個酶蛋白分子每分鐘可催化10 3 ～10 4 個底物分子轉變成有色產物。用于標記的酶應符合： 1.酶的活性要強，催化反應的轉化率高，純度高。 2.酶催化底物后產生的產物易于判斷或測量，方法簡單易行、敏感和重復性好。 3.作用專一性強 ，酶活性不受樣品
酶免疫技術酶與底物
酶結合物是酶與抗原或者抗體、半抗原在交聯劑作用下聯結的產物,是 ELISA 成敗的關鍵試劑。它不僅具有抗原抗體的特異性反應,還具有酶促反應的特性,最終產生生物放大的特性。酶免疫反應中,最常用的酶是辣根過氧化物酶,HRP的催化反應需要底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)。供氫體多為無色的還原型染
免疫酶技術中常用的酶底物系統
各種免疫酶技術,最終都是以某種顯色反應而揭示待測物質來進行定性和定量分析。不同酶要選擇相應的底物,見下表。免疫酶技術中常用的酶-底物系統酶底物顯色反應測定波長/nm辣根過氧化物酶二氨基聯苯胺深褐色沉淀5-氨基水楊酸棕色449鄰苯二胺橘紅色492/460鄰聯甲苯胺藍色4254-硝基酚磷酸黃色400堿性
酶免疫技術常用的底物知識點小結
1.HRP的底物 作為供氫體的底物化合物較多，常用的有以下幾種： （1）鄰苯二胺（OPD）：OPD被認為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD是ELISA中應用最早的底物，但其應用液穩定性差，易
酶免疫技術常用的底物知識點小結
1.HRP的底物 作為供氫體的底物化合物較多，常用的有以下幾種：（1）鄰苯二胺（OPD）：OPD被認為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD是ELISA中應用最早的底物，但其應用液穩定性差，易變色，需新
酶免疫技術常用的底物知識點小結
1.HRP的底物 作為供氫體的底物化合物較多，常用的有以下幾種： （1）鄰苯二胺（OPD）：OPD被認為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD是ELISA中應用最早的底物，但其應用液穩定性差，易
用于酶聯免疫測定（ELISA）酶的色原底物
辣根過氧化物酶的色原底物 HRP最常用的色原底物有鄰苯二胺(OPD)、2，2’—吖嗪—(3—乙酰苯基噻唑磺酸—6)[2，2’—azino-di(3—ethylben2thiazolinesulphonicacid-6)，ABTS](雜環吖嗪)、四甲基聯苯胺(TMB)和4—氨基安替比林：苯酚耦聯底
異相酶免疫試驗和均相酶免疫試驗
Ag為待測抗原，AgAb-E為結合標記物，Ab-E為游離標記物。若抗原-抗體反應影響標記物中酶的活性,如酶活性消失，即結合標記物(AgAb-E)無酶活性，游離標記物(Ab-E)有酶活性； (1) 檢測時不需分離結合標記物(AgAb-E)和游離標記物(Ab-E),檢測體系中標記物酶活性(Ab-E
ELISA中的試劑（3）－酶的底物
3.3 酶的底物?3.3.1 HRP的底物?HRP催化過氧化物的氧化反應，最具代表性的過氧化物為H2O2，其反應式如下：DH2+ H2O2 D+ H2O上式中，DH2為供氧體，H2O2為受氫體。在ELISA中，DH2一般為無色化合物，經酶作用后成為有色的產物，以便作比色測定。常用的供氫體有鄰苯二
酶免疫電鏡技術
（一）??原理?酶免疫電鏡技術是利用酶的高效率的催化作用對其底物的反應形成不同的電子密度，借助于電子顯微鏡觀察，證明酶的存在，從而對抗原進行定位。（二）材料與試劑1．PBS液? 取NaCl 8.5g，Na2HPO40.85g，KH2PO40.54g，加水至1 000ml即可。2．DAB溶液? 取5m
免疫酶標技術
免疫酶標技術1）??直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％?H2O2（或1％?H2O2?甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘
免疫酶技術介紹
免疫酶技術(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫測定，是通過酶標記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法，其應用范圍極廣。顯示方法是用酶的特殊底物來處理反應后的標本，通過酶催化底物的顯色反應來測定抗原或抗體的存在，以酶標作定量或定性分析。標記酶有辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷
免疫酶技術介紹
免疫酶技術(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫測定，是通過酶標記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法，其應用范圍極廣。顯示方法是用酶的特殊底物來處理反應后的標本，通過酶催化底物的顯色反應來測定抗原或抗體的存在，以酶標作定量或定性分析。標記酶有辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷
免疫酶標技術
中文名稱免疫酶標技術英文名稱immunoenzymatic technique定 義以酶標記抗體（或抗原），通過相應底物被酶解后的顯色反應，對細胞和組織標本中的抗原-抗體復合體進行定位、定性分析和鑒定的方法。也可根據酶催化底物顯色的深淺程度，定量測定體液標本中待測抗原或抗體的含量。應用學科細胞生物
酶免疫技術分類
酶免疫技術一般分成酶免疫組化技術和酶免疫測定兩大類。酶免疫組化技術與熒光抗體技術相似，酶標記抗體與組織切片上的抗原起反應，然后與酶底物作用，形成有色沉淀物，可以在普通光學顯微鏡下觀察。如酶作用的產物電子密度發生一定的改變，則可用電子顯微鏡觀察，稱為酶免疫電鏡技術。 酶免疫測定根據抗原抗體反應后
免疫酶標技術
實驗方法原理 先將酶與抗體結合形成酶標抗體，然后和相應的抗原反應，使抗原抗體復合物上帶有酶分子，再與酶的底物H2O2—DAB（3’3—二胺荃聯苯胺）發生顯色反應，在顯微鏡下觀察，根據顏色產物檢測相應抗原。實驗材料 抗體試劑、試劑盒 PBSH2O2血清儀器、耗材 顯微鏡實驗步驟 1. ?標本固定；2.
免疫酶標技術
1） 直接法1．標本固定。2．PBS洗滌2×3分鐘。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。4．正常血清（1：10）孵育，室溫20分鐘。5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6．PBS洗滌3×3分鐘。7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色
酶免疫技術抗體的酶標記方法
用于酶免疫技術的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩定;反應產物易于顯現;能商品化生產。目前酶免疫技術檢測中常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和堿性磷酸酶(AP),其次還有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和蘋果酸脫氫酶等。由于辣根過氧化
免疫學檢驗中的酶免疫技術
20世紀中期，以放射免疫技術為代表的標記免疫技術相繼問世，它將某種可微量或超微量測定的物質（如放射性核素、熒光素、酶、化學發光劑等）標記于抗原（抗體）上制成標記物，加入到抗原抗體的反應體系中與相應的抗體（抗原）反應，以檢測標記物的有無及含量間接反映被測物的存在與多少。這些將標記技術與抗原抗體反應
免疫學檢驗中的酶免疫技術
目前，免疫學檢驗中的標記技術主要包括酶免疫技術、熒光免疫技術、放射免疫技術、金免疫技術、化學發光免疫技術等。其中酶免疫技術是以酶標記的抗體（抗原）作為主要試劑，將抗原抗體反應的特異性和酶催化底物反應的高效性和專一性結合起來的一種免疫檢測技術。作為經典的三大標記技術之一，酶免疫技術在檢驗醫學中得到廣
酶標抗體和酶抗酶復合物的應用于免疫酶組化技術
酶標抗體和酶-抗酶復合物的應用于免疫酶組化技術（APAAP法）【基本原理】 堿性磷酸酶-抗堿性磷酸酶橋聯酶染色法(APAAP法)，是一種免疫組化技術。用兔抗鼠IgG起搭橋作用，其中一個Fab段連接McAb ，另一個Fab段連接APAAP復合物，再通過復合物中的堿性磷酸酶催化底物顯色來判斷
酶催化的特點和底物類型
特點一、酶促反應具有極高的效率二、酶促反應具有高度的特異性酶的特異性是指酶對底物的選擇性，有以下三種類型：1.絕對特異性 酶只作用于特定結構的底物，生成一種特定結構的產物。如淀粉酶只作用淀粉。2.相對特異性 酶可作用于一類化合物或一種化學鍵。例如磷酸酶可作用于所有含磷酸酯鍵的化合物。3.立體異構特異
大腸桿菌的呼吸酶和底物
大腸桿菌的呼吸酶和底物呼吸酶氧化還原對中點電位（伏）甲酸脫氫酶碳酸氫鹽/甲酸鹽?0.43氫化酶質子/氫?0.42NADH脫氫酶NAD/NADH?0.32甘油-3-磷酸脫氫酶DHAP/Gly-3-P?0.19丙酮酸氧化酶醋酸鹽+二氧化碳/丙酮酸鹽?乳酸脫氫酶丙酮酸鹽/乳酸鹽?0.19D-氨基酸脫氫酶2
酶測定中底物濃度的影響有哪些？
在檢測試劑中底物濃度、輔因子、活化劑、復構劑的種類和濃度均對酶的測定至關重要。其中以底物的種類和濃度最為重要。底物濃度影響遵循米氏方程：ν＝V[S]/Km＋[S]當底物濃度遠遠小于Km，增加底物濃度，反應速度增加。當底物[S]＞＞Km時，公式近似為ν=V，反應速度不再增加，故此時反應速度為最大反應V
免疫酶技術的技術特點和應用范圍
免疫酶技術(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫測定，是通過酶標記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法，其應用范圍極廣。顯示方法是用酶的特殊底物來處理反應后的標本，通過酶催化底物的顯色反應來測定抗原或抗體的存在，以酶標作定量或定性分析。標記酶有辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷
免疫酶技術的方法
ACA（抗心磷脂抗體）主要通過抑制血管內皮細胞合成PGI2，干擾血栓調節素、纖溶酶原激活劑和蛋白質C系統的活性，抑制抗凝血酶III的活化等而致凝血前高凝狀態，與復發性動靜脈血栓形成、反復自然流產及血小板減少癥關系密切。其主要程序為用純心磷脂的無水乙醇溶液包被聚苯乙烯板，封閉后分別于標本孔和對照孔中加
酶免疫技術的介紹
酶免疫技術是以酶標記的抗體或抗原為主要試劑的方法，是標記免疫技術的一種。近年來標記免疫技術飛速發展，應用不同標記物，根據不同原理、不同技術建立起來的檢測方法層出不窮，而方法的創建者往往給同類的方法以不同的名稱。因此確知某一方法屬于哪一類型，對該方法的正確理解有著重要意義。本節先敘述各種標記免疫技
酶免疫技術的概述
酶免疫技術是以酶標記的抗體或抗原為主要試劑的方法，是標記免疫技術的一種。近年來標記免疫技術飛速發展，應用不同標記物，根據不同原理、不同技術建立起來的檢測方法層出不窮，而方法的創建者往往給同類的方法以不同的名稱。因此確知某一方法屬于哪一類型，對該方法的正確理解有著重要意義。本節先敘述各種標記免疫技
酶免疫技術的分類
酶免疫技術一般分成酶免疫組化技術和酶免疫測定兩大類。酶免疫組化技術與熒光抗體技術相似，酶標記抗體與組織切片上的抗原起反應，然后與酶底物作用，形成有色沉淀物，可以在普通光學顯微鏡下觀察。如酶作用的產物電子密度發生一定的改變，則可用電子顯微鏡觀察，稱為酶免疫電鏡技術。 酶免疫測定根據抗原抗體反應后