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細胞凍存1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；2. 取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。3. 去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來；4. 離心1000rpm，5min；5. 去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；8. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。......閱讀全文
為了防止因污染或技術原因使長期培養功虧一簣，考慮到培養細胞因傳代而遲早會出現變異，有時因寄贈、交換和購買，培養細胞從一個實驗室轉運到另一個實驗室，最佳的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊細胞株的遺傳特性極為重要。現簡要介紹深低溫保存法 (－70℃~－196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本
1.懸浮細胞 ●計數將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數生長期。以大約200～400g離心5分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。 ●以1×107到5×107細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養基中再次懸浮細胞，或者以0.5×107到1×107在無血清培養基中，再次懸浮細胞。 ●
上一期我們為大家詳細介紹了實驗中的腫瘤細胞的基本知識，不管是從ATCC購買，亦或朋友惠贈，當細胞不遠萬里到達咱們手里，最重要的事就是如何讓它們茁壯成長。這看似簡單，然而卻因細胞長不起來或者污染等因素，折磨得不少英雄豪杰意欲“自掛東南枝”。今天小編就結合多年實踐經驗和ATCC的動物細胞培養指南，為
實驗概要本實驗介紹了已凍存的HEK293和HeLa細胞的傳代培養，包括細胞復蘇、傳代和凍存。主要試劑細胞培養液成分為RPMI1640基本培養液 10%胎牛血清 1%三抗，PBS，凍存培養液(含10%DMSO或甘油)，Trypsine-EDTA消化液，液氮主要設備水浴鍋，35mm培養皿，37℃培養箱，
細胞培養技術細胞周期的測定一、原理細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。 單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現多采用其他方法測群體周期。 測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞計數法
抗體的概念 動物機體受到抗原物質的刺激后, 由B淋巴細胞轉化為漿細胞產生的, 能與相應抗原發生特異性結合反應的免疫球蛋白, 這類免疫球蛋白稱為抗體(Antibody,簡稱 Ab)。 免疫球蛋白 免疫球蛋白(Immunogolobulin, 簡稱Ig) 是指存在于人和動物血液(
抗原提純與動物免疫 對抗原的要求是純度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如為細胞抗原，可取1×107個細胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐劑并經充分乳化，如為聚丙烯酰胺電泳純化的抗原，可將抗原所在的電泳條帶切下，研磨后直接用以動物免疫。 選擇與所用骨髓瘤細胞同源的B
單克隆抗體雜交瘤技術基本流程單克隆抗體的制備步驟1、免疫原的制備；2、免疫動物 ；選擇體重18-20g BALB/C 雌性小鼠用于免疫。50-100ug抗原/只與等體積福氏完全佐劑混合，充分乳化后，經背腹部皮下多點注射及腹腔注射相結合的方式免疫，總的免疫體積0.2-0.3ml每只；間隔3周，取與
魚類受精卵細胞凍存試劑盒（超低溫）產品說明書主要用途YIJI魚類受精卵細胞凍存試劑（超低溫）是一種旨在幫助超低溫冷凍環境下儲存各種魚種受精卵細胞，確保其功能完整性和孵化活力的保護性介質和權威而經典的技術方法。該技術由經過精心研制、成功實驗證明的。適用于clipeiformes、esociformes
現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術，而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系，特別是在醫藥領域的發展，細胞培養更具有特殊的作用和價值。比如基因工程藥物或疫苗在研究生產過程中很多是通過細胞培養來實現的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細胞作為載體；細胞工程中更
細胞分離技術一、從原代組織中分離細胞 將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，最常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。從原代組織中獲得單細胞懸液的一般方法是酶解聚。細胞暴露在酶中的時間要盡可能的短，以保持最大的活性。下列步驟可以解聚整個組織，獲得較高產量的有活性細胞。1.胰蛋
凍存管的使用方法和注意事項 凍存管的使用步驟 ⑴ 從細菌純培養物中挑取新鮮培養物配成大約為3-4麥氏比濁度的菌懸液接種與菌種保存管中。 ⑵ 擰緊保存管，來回顛倒4-5次使細菌乳化，不能旋搖。 ⑶ 把保存管放入冰箱保存(-20℃--70℃) 凍存管安全使用建議
實驗材料 載體和酵母菌 試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 SD
細胞培養器具體步驟編輯基本概述編輯細胞的生長需要營養環境，用于維持細胞生長的營養基質稱為培養基。培養基按其物理狀態可分為液體培養基和固體培養基。液體培養基用于大規模的工業生產以及生理代謝等基本理論的研究工作。液體培養基中加入一定的凝固劑(如瓊脂)或固體培養物(如麩皮、大米等)便成為固體培養基。固體
13.如何選擇正確的血清種類？14.可否使用與原先培養條件不同的血清種類？不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。15.血清滅活是否必須？這個問題
15.血清滅活是否必須？這個問題現在有爭議。有人主張價格不菲的血清中含有諸如生長因子，維生素，氨基酸等珍貴物質，而將它們置于50℃以上的溫度長達30分鐘的熱處理會對血清中的生長因子，氨基酸等成分帶來的負面影響。盡管如此，在大多數實驗室之中血清的熱滅活還是作為常規來執行，尤其是在昆蟲細胞和胚胎干細胞培
細胞一般儲存在液氮中,溫度達196°C ,理論上儲存時間是無限的。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以zuida限度的保存細胞活力。細胞復蘇就是要把原本冷凍保存(凍存)著的細胞恢復到一般的生長狀態,今天我們來看看原代細胞的復蘇步驟。一、檢查收到細胞株包裹時,請
基本方案 實驗方法原理 實驗材料
酶聯免疫斑點(ELISPOT)測定法是一種在單細胞懸液中檢測分泌某種特定蛋白質的細胞和定量分析產生該特定蛋白質的細胞頻率的有力工具。1983年，Crekinsky等運用ELISPOT技術成功檢出分泌特異性抗體的細胞頻率，經過不斷發展，目前該技術已廣泛用于檢測產生、分泌多種其他效應分子
基本方案實驗方法原理實驗材料草地夜蛾（Sf 9）細胞 &nbs
酶聯免疫斑點(ELISPOT)測定法是一種在單細胞懸液中檢測分泌某種特定蛋白質的細胞和定量分析產生該特定蛋白質的細胞頻率的有力工具。1983年，Crekinsky等運用ELISPOT技術成功檢出分泌特異性抗體的細胞頻率，經過不斷發展，目前該技術已廣泛用于檢測產生、分泌多種其他效應分子的細胞(如細胞因
2011年，Hans Clevers等首先報道了成人小腸類器官的構建方法，人小腸類器官分別具有小腸上皮組織隱窩和絨毛區域細胞的特征，小腸類器官與小腸上皮組織在細胞組成和形態結構上高度相似，并具有良好的短狀吸收和離子轉運功能。人小腸類器官的培養條件與小鼠小腸類器官不同，除了加入基本生長因子外(
實驗步驟一、常規操作方案下面這個典型流程對許多蛋白質都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 據 N g u y e n 等(1993)首先開發的方案改編而成，并用于冷泉港蛋白質純化與鑒定課程的不溶性重組蛋白純化部分（Burgess and K n u t h ， 1996)。其他類似的流程也可能
實驗步驟 一、常規操作方案 下面這個典型流程對許多蛋白質都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 據 N g u y e n 等(1993)首先開發的方案改編而成，并用于冷泉港蛋白質純化與鑒定課程的不溶性重組蛋白純化部分（Bu
隨著分子遺傳學技術出現，體細胞雜交也取得了重要的進步：作為探針的 DNA 可以從用于體細胞雜交或 Southernblot 的細胞中獲取，而來自相應基因的探針無論是雜交到濾膜，還是雜交到染色體的變性或非變性的片段上，都能被辨別。然而，由于人類與嚙齒目動物在 DNA 和蛋白質水平上的相似性，作
實驗步驟 附 加 材 料（其他材料見基本方案 2)候 選 雜 交 瘤 系（見輔助方案 2)克隆和擴增用培養基（見輔助方案 4)微 孔 板 觀 察 鏡（由 Flow 實驗室或 Dynatech 公司提供），可選的1.重懸候選雜交瘤所在孔中的細胞（見 輔 助 方 案 2 , 步 驟 4)，用血
26、PFHM-II 和HYBRIDOMA-SFM之間有什么差別？ PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium)是不包含有蛋白質的單克隆抗體生產培養基。如果作為雜交瘤生產培養基使用，PFHM-II可能需要補充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM即是雜交瘤生產培養
實驗材料匯合至一定程度的受體細胞試劑、試劑盒受體細胞適合生存的培養基合適的選擇性試劑含感興趣染色體及合適遺傳標記的供體細胞儀器、耗材10 cm 組織培養板25 cm 組織培養瓶倒置相差顯微鏡實驗步驟基本方案 單層全細胞融合1.倘若不知道細胞的選擇條件，通過以下方式來確定：將培養于 25 cm 培養瓶
單層全細胞融合實驗 實驗材料 匯合至一定程度的受體細胞
實驗材料 匯合至一定程度的受體細胞 試劑、試劑盒 受體細胞適合生存的培養基