抗體的概念、動物產生抗體的機理及單克隆抗體...（三）
單克隆抗體雜交瘤技術基本流程單克隆抗體的制備步驟1、免疫原的制備；2、免疫動物 ；選擇體重18-20g BALB/C 雌性小鼠用于免疫。50-100ug抗原/只與等體積福氏完全佐劑混合，充分乳化后，經背腹部皮下多點注射及腹腔注射相結合的方式免疫，總的免疫體積0.2-0.3ml每只；間隔3周，取與一免減半量抗原和等體積的福氏不完全佐劑充分乳化后，第二次腹腔注射0.2-0.3ml每只；過2-3周后用加倍劑量的抗原進行腹腔注射，3天后取脾細胞進行融合；3、細胞融合 ；取上述免疫小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞（SP2/0）按5-10：1的比例，在無血清的RPMI-1640培養基中混勻，1500rpm離心5min，去除培養基；用50% PEG（Sigma,分子量1500－4000）作為融合劑，在37℃下水浴下加入0.5-0.7ml，使其融合2min；用無血清的RPMI-1640培養基終止融合后1500rpm離心5min，沉淀用......閱讀全文
抗體的概念、動物產生抗體的機理及單克隆抗體...（三）
單克隆抗體雜交瘤技術基本流程單克隆抗體的制備步驟1、免疫原的制備；2、免疫動物 ；選擇體重18-20g BALB/C 雌性小鼠用于免疫。50-100ug抗原/只與等體積福氏完全佐劑混合，充分乳化后，經背腹部皮下多點注射及腹腔注射相結合的方式免疫，總的免疫體積0.2-0.3ml每只；間隔3周，取與
抗體的概念、動物產生抗體的機理及單克隆抗體...（二）
構成抗原的條件：一、異物性，又稱為異質性或異源性正常情況下，自身組織或細胞對機體本身無免疫原性。而異種或異體物質，以及化學組成或結構發生改變的和由于某種因素而暴露的在胚胎期與免疫系統隔絕的自身物質則為良好的抗原。二、理化性狀大分子物質抗原的免疫原性與其分子大小有直接關系：1、免疫原性良好的物質分子量
抗體的概念、動物產生抗體的機理及單克隆抗體...（一）
抗體的概念動物機體受到抗原物質的刺激后, 由B淋巴細胞轉化為漿細胞產生的, 能與相應抗原發生特異性結合反應的免疫球蛋白, 這類免疫球蛋白稱為抗體(Antibody,簡稱 Ab)。免疫球蛋白免疫球蛋白(Immunogolobulin, 簡稱Ig) ?是指存在于人和動物血液(血清)、組織液及其它外分泌液
抗體的概念動物產生抗體的機理及單克隆抗體的制備方法
抗體的概念 動物機體受到抗原物質的刺激后, 由B淋巴細胞轉化為漿細胞產生的, 能與相應抗原發生特異性結合反應的免疫球蛋白, 這類免疫球蛋白稱為抗體(Antibody,簡稱 Ab)。 免疫球蛋白 免疫球蛋白(Immunogolobulin, 簡稱Ig) 是指存在于人和動物血液(
單克隆抗體的概念
解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體。如果能獲得僅針對單一表位的漿細胞克隆，并使其在體外擴增分泌抗體，就有可能獲得單一表位特異性的抗體。然而，漿細胞在體外的壽命較短，難以培養。為克服這一缺點，Kohler和Milstein將可產生特異性抗體但短壽的B細胞與不產生抗體但長壽
單克隆抗體的概念
單克隆抗體單克隆抗體（Monoclonal Antibody，McAb）即單個B淋巴細胞克隆所分泌的抗體。抗體主要由機體的B淋巴細胞合成，每個B淋巴細胞有合成一種抗體的遺傳基因。當機體受抗原刺激時，抗原分子上的許多決定簇分別激活各個具有不同基因的B細胞。被激活的B細胞分裂增殖形成該細胞的子孫，即克隆
單克隆抗體的產生方法
（一）動物體內誘生法?目前McAb治療用或體外診斷用的多采用該法。小鼠腹腔接種液體石蠟，一周后接種雜交瘤細胞懸液，接種10～14天后，無菌抽取腹水，離心取上清液即可。（二）體外培養法?這是實驗室制備的方法。將雜交瘤細胞置培養瓶中培養，離心后收集上清液。
簡述單克隆抗體的動物免疫
單克隆抗體制備的宿主動物一般選用BALB/c小鼠，鼠單抗的應用范圍相當廣泛，一些國內外公司均開發出了兔的單克隆抗體制備技術。 免疫原分為可溶性抗原和顆粒性（細胞）抗原，用無菌鹽水稀釋并與佐劑混合，腹腔注射抗原與佐劑徹底混勻后形成的穩定乳狀液，在免疫原提供持續的免疫應答基礎上進行加強免疫 周期
單克隆抗體的基本概念
動物脾臟有上百萬種不同的 B 淋巴細胞系,選擇性表達出不同基因的 B 淋巴細胞合成不同的抗體。當機體受抗原刺激時,抗原分子上的許多決定簇分別激活各個表達不同基因的 B 細胞。被激活的 B 細胞分裂增殖形成效應B 細胞(漿細胞)和記憶 B 細胞,大量的漿細胞克隆合成和分泌大量的抗體分子分布到血液、體液
如何篩選動物單克隆抗體
單克隆抗體制備過程中,總共有兩次篩選,第一次篩選出雜交瘤細胞,第二次篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞,兩次篩選的原理和方法是不相同的.第一次篩選的原理與方法：細胞融合后,雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵.普遍采用的HAT選擇性培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A
如何篩選動物單克隆抗體
單克隆抗體制備過程中,總共有兩次篩選,第一次篩選出雜交瘤細胞,第二次篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞,兩次篩選的原理和方法是不相同的.第一次篩選的原理與方法：細胞融合后,雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵.普遍采用的HAT選擇性培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A
單克隆抗體的制備（三）
3.2 免 疫 B 細胞的制備血清效價有意義(>1 : 1000)的免疫后動物可以提供抗原反應性B 細胞用于融合。這些細胞可以從脾臟或淋巴結中獲得。動物用吸人CO2 處死，在無菌操作下取組織，放 在 4°C無血清培養基中，最多可放lh 。用懾子或針頭輕輕打開組織脾臟或淋巴結的外包膜獲得單細胞
關于單克隆抗體的動物免疫的介紹
單克隆抗體制備的宿主動物一般選用BALB/c小鼠，鼠單抗的應用范圍相當廣泛，一些國內外公司均開發出了兔的單克隆抗體制備技術。 免疫原分為可溶性抗原和顆粒性（細胞）抗原，用無菌鹽水稀釋并與佐劑混合，腹腔注射抗原與佐劑徹底混勻后形成的穩定乳狀液，在免疫原提供持續的免疫應答基礎上進行加強免疫 周期
單克隆抗體時動物的選擇與免疫
一、動物的選擇 目前應用最廣的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠為好。就品系而言以Balb/c小白鼠應用最廣，因為所有的小白鼠骨髓瘤系均從Balb/c小白鼠系誘導出來。Balb/c系小白鼠必須用純系的，雌雄均可，以8~12周齡為宜。大白鼠也可，能產生較多量的單抗體。現在已經在小鼠雜交瘤的基礎上，發展了
單克隆抗體制備動物的選擇與免疫
1、動物的選擇目前應用最廣的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠為好。就品系而言以Balb/c小白鼠應用最廣，因為所有的小白鼠骨髓瘤系均從Balb/c小白鼠系誘 導出來。Balb/c系小白鼠必須用純系的，雌雄均可，以8~12周齡為宜。大白鼠也可，能產生較多量的單抗體。現在已經在小鼠雜交瘤的基礎上，發展了
單克隆抗體培養—含有單克隆抗體的腹水制備
實驗步驟材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)裸 鼠 ， 6?8 周齡，無 特 殊 病 原（SPF)，或者是同基因型宿主（注射小鼠-小鼠雜交瘤時）姥 鮫 焼（Pristane， 2,6，10，14-四甲基十五焼； Aldrich 公司提供）雜 交 瘤（單 元 1.3)添 加 10 mmol/L H
單克隆抗體的純化實驗——單克隆抗體的純化實驗
1~5 ml/min?的速度上樣于蛋白A-Sepharose柱，用Tris緩沖液洗柱子直至所有的未結合的蛋白都被洗脫，采用A280監測。?3. ?依次用2~3倍柱床體積的檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液液以及甘氨酸·Cl緩沖液連續洗脫結合蛋白，洗脫下的蛋白直接接入裝有中和緩沖液的管中，中和緩沖液的體積應為所
單克隆抗體
·?????????Tips and hints for the storage of antibodies?(Synaptic Systems)·?????????Purification of IgG Using Protein A- or Protein G-Agarose(KPL)·????
抗體的概念
抗體（antibody）是指機體由于抗原的刺激而產生的具有保護作用的蛋白質。它（免疫球蛋白不僅僅只是抗體）是一種由漿細胞（效應B細胞）分泌，被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質，僅被發現存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面。抗體能識別特定外來物的一個獨特特征
自身抗體產生的原因及后果
抗體一般是由于外來蛋白質或其他物質（尤其是致病菌）進入機體后由免疫系統產生，用于免疫反應以消滅外來的有害物質。通常情況下，免疫系統能夠識別并忽視機體自身的細胞，并不對其產生抗體；同時，免疫系統也不會對環境中沒有威脅的物質（如食物），產生過度反應。但是，在特定情況下，免疫系統對于機體自身的物質的識別失
抗體的作用機理
抗體是由活化的B細胞（漿細胞）產生的針對某一特異性抗原而產生的蛋白質，這種蛋白質可以特異性得與相應的抗原結合，從而中和抗原的毒性作用。對于病原體或者是被病毒感染了的細胞或者是腫瘤細胞，機體由抗體介導的免疫反應主要有ADCC和補體系統，ADCC主要由CTL和NK來執行，在CTL和NK或活化的巨噬細胞表
單克隆抗體技術動物免疫的操作過程
(1) 抗原制備。制備單克隆抗體的免疫抗原，從純度上說雖不要求很高，但高純度的抗原使得到所需單抗的機會增加，同時可以減輕篩選的工作量。因此，免疫抗原是越純越好，應 根據所研究的抗原和實驗室的條件來決定。一般來說，抗原的來源有限，或性質不穩定，提純時易變性，或其免疫原性很強，或所需單抗是用于抗原不
單克隆抗體技術：抗體檢測
用檢測抗體的方法從雜交細胞中篩選出生產指定抗體的雜交株是很重要的。檢測抗體的方法很多，從沉淀反應到放射免疫測定。由于細胞培養液中的抗體濃度通常是很低的，而且傳統的檢測方法多是以多價抗原與多克隆抗血清相反應。雜交瘤產生的抗體則是單克隆的，所以并不是每項方法都能適用。一定要選擇敏感的、快速的、一次又能檢
抗原抗體反應的人單克隆抗體的制備
小鼠的單克隆抗體蛋白應用于人體后，作為抗原能引起人的免疫應答，大大降低其生物活性，并可能導致變態反應。因此人源單克隆抗體在臨床治療上有廣泛應用前景，引起人們的普遍興趣。但是人單克隆抗體制備存在許多技術上和倫理上的障礙，如人雜交瘤細胞系不穩定，有些抗原不能對人進行人工免疫，人B細胞只能從外周血中分
單克隆抗體的優點
(1)雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產高特異性、高均一性的抗體。(2)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。(3)由于可能得到“無限量”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA和ELISA等。(4)由于單克
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。1、二氧化硅吸附法新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min 15分鐘，除去細胞成分（或
單克隆抗體的概述
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。[1] 它通常采用雜交瘤技術來制備，將具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群，從根本上解決了在抗體制備中長期存在的特異性和可重復性問題，可直接用于疾病的診斷、預防、治療以及免疫機制的研究。
單克隆抗體的優點
(1)雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產高特異性、高均一性的抗體。(2)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。(3)由于可能得到“無限量”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA和ELISA等。(4)由于單克
單克隆抗體的簡介
1975年分子生物學家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦在自然雜交技術的基礎上，創建立雜交瘤技術，他們把可在體外培養和大量增殖的小鼠骨髓瘤細胞與經抗原免疫后的純系小鼠B細胞融合，成為雜交細胞系，既具有瘤細胞易于在體外無限增殖的特性，又具有抗體形成細胞的合成和分泌特異性抗體的特點。將這種雜交瘤作單個細
單克隆抗體的優點
(1)雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產高特異性、高均一性的抗體。 (2)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。 (3)由于可能得到“無限量”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA和ELISA等。